王素琴
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：西安交通大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- hGPx-1-198Leu真核表达载体的构建与鉴定及在H9C2细胞中的表达
- 2014年
- 目的构建含有人GPx-1基因Pro198Leu多态的真核表达载体,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制提供依据。方法采用全基因合成的方法合成含多态位点的人GPx-1基因cDNA片段,同时在基因5′端和3′端分别引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位点,通过限制性内切酶酶切目的片段和真核表达载体pEGFPN3,再用T4DNA连接酶将含有目的基因的片段定向插入到载体pEGFP-N3真核人巨细胞病毒启动子下游。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆、提取质粒进行鉴定。将hGPx-1-198Leu真核表达载体转染HEK293细胞,观察转染效率,并采用RT-PCR检测转染重组载体后细胞中GPx-1的mRNA表达水平。重组载体转染H9C2细胞,观察补硒之后的GPx-1表达情况。结果获得目的基因cDNA片段全长869bp,PCR和测序鉴定载体中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA。重组载体转染HEK293细胞后检测到GPx-1的mRNA水平比未转染组及空质粒转染组明显升高,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制奠定了基础。H9C2细胞在转染后GPx-1蛋白水平升高并且随着硒浓度的升高而升高。结论成功构建了含Pro198Leu多态位点的hGPx-1真核表达载体,并且也插入了保证该基因有效表达的硒代半胱氨酸插入序列。
- 王素琴牛小麟朱延河高登峰林琳
- 关键词：真核表达载体转染H9C2细胞硒
- GPx-1^(P198L)转基因小鼠模型的建立及鉴定
- 2015年
- 目的建立系统性高表达含198位点多态性的胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(cellular glutathione peroxidase-1,GPx-1)转基因小鼠(GPx-1P198L),为研究GPx-1P198L在氧化应激相关疾病中的作用提供动物模型。方法利用显微注射法将限制性内切酶BamHⅠ和AccⅠ线性化的GPx-1(198Leu)转基因载体注射到C57BL/6J小鼠受精卵中,建立GPx-1P198L转基因小鼠。PCR鉴定实验后小鼠的基因型,Western blot检测GPx-1蛋白表达。结果建立了GPx-1P198L首建鼠13只,筛选后9只原代转基因小鼠能产生子代,其中4只原代转基因小鼠产生的子代(F1代)心脏组织高表达GPx-1蛋白,4只小鼠成功建系。结论建立了系统性表达突变型人GPx-1(198Leu)的转基因小鼠,为研究GPx-1(198Leu)在氧化应激相关疾病中的作用提供了动物模型。
- 王素琴朱延河林琳高登峰牛小麟
- 关键词：转基因小鼠氧化应激
