石宁宁
- 作品数：41 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 减少异种肝移植血小板吞噬的ASGR1基因敲除猪
- 肝移植是解决临床供体肝短缺的有效途径之一.猪的肝脏作为"过渡肝"移植给急性肝衰病人,可以有效缓解急性肝衰病人的病情.敲除猪α-1,3半乳糖基转移酶基因(GGTA1已基本解决了异种肝移植的超急性免疫排斥...
- 李西睿魏静冯冲龙川纪慧丽石宁宁蒋应弟曾国敏潘登科
- 关键词：异种肝移植基因敲除
- 胰腺特异性表达Hes1基因的构建及体外表达
- 2015年
- 为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β细胞、猪耳成纤维细胞及猪肾细胞,培养48h后,通过qRT-PCR、Western Blot检测.结果显示:Hes1在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均高效表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞及猪肾细胞中均不表达.试验表明:胰岛特异性表达载体PDX1-Hes1的成功获得,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供参考,为后续制备胰腺缺陷型的小型猪提供了条件.
- 魏静杨希祥石宁宁宋小凤冯冲潘登科臧荣鑫
- 胰腺特异性表达载体PDX1-eGFP构建及体外验证被引量：1
- 2015年
- 为了研究胰腺发育与缺陷的转基因特异性表达系统,探索胰腺特异性表达载体的构建并进行体外验证。以增强型绿色荧光蛋白(e GFP)为报告基因,小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动e GFP表达载体PDX1-e GFP,载体转染MIN-6胰岛β细胞和猪耳成纤维细胞,培养48 h后,进行荧光观察和RT-PCR、Western blot检测。结果显示,e GFP在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞中均不表达。本研究结果表明,成功获得胰岛特异性表达载体PDX1-e GFP,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供依据,为制备胰腺缺陷动物奠定基础。
- 杨希祥魏静宋小凤石宁宁冯冲臧荣鑫潘登科李娟
- 早期胚胎的卵裂球聚合制备GFP示踪的嵌合体小型猪
- 引言/目的日本科学家将大鼠多功能干细胞注入小鼠囊胚,在敲除Pdx1基因的胰腺缺失小鼠体内生长出大鼠胰腺,成功生成种间嵌合体。表明异种器官移植未来通过基因编辑技术与嵌合体技术结合在动物体内长出人类器官成为可能,而小型猪的生...
- 龙川纪慧丽冯冲石宁宁高景波唐雨婷杜敏杰潘登科
- 猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证
- 2014年
- 目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化:将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3'端的内含子剪接受体位点(splicing acceptor site,SA)突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA(M)-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异:载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA(M)-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3'端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。
- 于淑珍冯冲石宁宁宋小凤潘登科
- 关键词：特异性表达EGFP五指山小型猪
- 表达hCD47小型猪创建及其在异种移植中抗吞噬研究
- 目的猪是人类异种器官移植的理想供体。然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白(signal regulatory proteinα,SIRPα)不能识别异种细胞表面的整...
- 龙川石宁宁曾国敏冯冲潘登科
- 关键词：异种移植巨噬细胞巴马小型猪
- GTKO五指山小型猪SLA单倍型分型及异种移植效果比较
- 目的 随着敲除α-1,3半乳糖基转移酶基因猪的诞生(GTKO),异种移植引起的超急性免疫排斥反应已基本解决.然而,猪主要组织相容性复合体(Swine leukocyte antigens,SLA)作为异种抗原的存在,仍是...
- 高景波蒋应弟石宁宁潘登科
- 关键词：五指山小型猪SLA单倍型异种移植免疫排斥
- 用于异种移植的GTKO/hCD46/hTBM多基因修饰五指山小型猪
- 小型猪是理想的异种器官移植供体,猪器官移植到人体后会诱发超急性免疫排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)、凝血功能障碍等一系列问题,通过对小型猪进行多基因修饰,可以阻断HAR及凝血功能障碍的发生,为...
- 潘登科冯冲石宁宁龙川李西睿
- 转基因猪的繁育及多基因复合育种
- 引言 随着国家转基因猪新品培育的实施和转基因猪在生物医学研究的开展,转基因克隆猪的繁育是否正常、遗传是否稳定等问题也是转基因猪研究的重要内容.课题组2010-2012年获得了转线虫sfatI基因的富含ω-3多不饱和脂肪酸...
- 潘登科冯冲石宁宁龙川李西睿
- 绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析被引量：1
- 2015年
- 猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(Galactosyltransferase gene knockout,GTKO)猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将CAG启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达载体导入GTKO猪耳成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备了EGFP猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR扩增观察、检测和分析克隆猪各组织器官中EGFP蛋白和转录本的表达状况。结果显示,EGFP蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表达,但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP的GTKO猪,为EGFP示踪异种细胞组织移植奠定了基础。
- 李智方冯冲纪慧丽石宁宁宋小凤赵勤丽龙川潘登科杨小淦
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白异种移植
