刘宇轩
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目上海市科技兴农重点攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 隐孢子虫病免疫学诊断方法的建立和应用及其免疫预防研究
- 作为腹泻病常见病原之一的隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）能侵入人或动物的肠道，引起隐孢子虫病（cryptosporidiosis）。在隐孢子虫的众多种类中，微小隐孢子虫（Cryptosporidium...
- 刘宇轩
- 关键词：家畜寄生虫隐孢子虫病免疫学诊断亚单位疫苗
- 文献传递
- 微小隐孢子虫棒状体蛋白CpPRP1 sushi结构域的定位及其重组蛋白对小鼠隐孢子虫感染的免疫保护效果研究
- 微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)是严重危害人和动物健康的寄生原虫,目前,隐孢子虫病尚无有效的治疗药物和预防疫苗.棒状体蛋白在隐孢子虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用,微小隐孢子虫假定棒状体蛋白1...
- 黄燕石凯米荣升刘宇轩胡盼詹婷婷宋悦贾海燕陈兆国
- 四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2014年
- 为克隆不同种隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因,分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况,根据GenBank上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)Cryptopain-1基因序列设计合成引物,用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因,并将其克隆至pZeroBack/blunt载体,阳性克隆经PCR鉴定正确后测序,与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对,并进行系统进化分析。结果显示,本研究成功从泰泽隐孢子虫(C.tyzzeri)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、兔隐孢子虫(C.cuniculus)基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较,泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%,演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。
- 王晓娟米荣升周鹏黄燕王向佩杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 关键词：隐孢子虫克隆
- 基于微小隐孢子虫重组CP15/60蛋白的间接ELISA检测方法的建立及上海市猪隐孢子虫感染情况调查被引量：2
- 2015年
- 为建立敏感、特异的猪隐孢子虫感染血清学检测方法,了解上海市猪隐孢子虫感染情况,以纯化的重组CP15/60(r CP15/60)为诊断抗原,建立了检测隐孢子虫感染的间接ELISA方法,并对上海市猪隐孢子虫感染情况进行血清学调查。结果显示,与Nested PCR方法检测结果相比,本研究建立的r CP15/60-ELISA方法的阴阳性符合率为83.3%,敏感性为100%,特异性为80%;重复性试验的变异系数在12.5%之内;对341份猪田间血清进行检测,阳性为194份,占56.89%,表明该方法可用于实验室初步诊断和现场猪隐孢子虫病的流行病学调查。
- 刘宇轩米荣升黄燕于慧珠胡盼詹婷婷周金林陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫间接ELISA
- 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
- 2015年
- 为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。
- 杨晓娇周鹏米荣升黄燕石凯王晓娟王向佩刘宇轩雷晓思陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫克隆原核表达
- 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达被引量：4
- 2014年
- 为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。
- 杨晓娇周鹏米荣升黄燕石凯王晓娟王向佩刘宇轩雷晓思陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫真核表达质粒
- 猪附红细胞体a1基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2014年
- 为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1基因部分序列的PCR扩增、克隆、序列测定及生物信息学分析。结果显示,共获得了41条猪附红细胞体a1基因片段序列,序列长度均为1 657bp;同源性分析显示,它们与GenBank中登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列的相似性在97.7%~99.9%之间,氨基酸序列的相似性在99.1%~99.8%之间。系统进化分析表明,多数上海市猪附红细胞体分离株的a1基因与GenBank中登录的德国54/96分离株a1基因序列在同一个聚簇上。
- 王向佩周鹏沈莉萍曹薇米荣升黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 关键词：猪附红细胞体A1基因克隆
- 小附红细胞体的分离鉴定及其对猪的人工感染试验被引量：1
- 2015年
- 采用2对附红细胞体种特异性引物,对上海地区2个屠宰场采集的736份猪血液基因组DNA进行PCR检测,将小附红细胞体特异性引物扩增产物克隆到pMD18-T载体,进行序列测定和生物信息学分析。将小附红细胞体阳性血液分离物肌肉注射给5头切除脾的断奶广西巴马小型猪仔猪,感染后定期采血,进行显微镜检,并提取基因组DNA进行PCR检测。另设3头猪作为不感染对照组,进行相同的检测。结果显示,共有101份样品检测出附红细胞体阳性,阳性率为13.72%,其中54份为小附红细胞体单独感染,占7.34%。5头巴马小型猪在接种小附红细胞体后第13~16天起,至第34天试验结束,出现明显的临床症状;血液显微镜检和PCR检测均发现存在小附红细胞体感染;其序列测定显示,16SrRNA基因的部分序列与接种的小附红细胞体的相应序列完全一致。上述结果表明,本研究成功筛选出小附红细胞体阳性血液,并成功实现了小附红细胞体对巴马小型猪的人工感染试验。
- 雷晓思周鹏米荣升黄燕刘宇轩胡盼詹婷婷江帆夏延富邓俊良陈兆国
- 猪源附红细胞体rnpB基因的克隆与序列比较被引量：2
- 2014年
- 为了解猪源附红细胞体（Mycoplasma spp.）RNA酶P RNA（RNase P RNA,rnpB）基因序列变异状况,将实验室保存的经16S rRNA基因序列分析鉴定的53份猪源附红细胞体阳性DNA样品用于rnpB基因的扩增,扩增产物克隆至pMD18-T载体并进行序列测定。将获得的序列与GenBank登录的猪附红细胞体（Mycoplasma suis）德国分离株rnpB基因序列（登录号：EF523602）进行分析和比对,利用MEGA5.0软件构建系统发育树,并与16S rRNA判定结果进行比较。结果共得到42条猪附红细胞体rnpB基因和11条小附红细胞体（M.parvum）rnpB基因序列。猪附红细胞体上海分离株rnpB基因与GenBank登录的猪附红细胞体德国分离株rnpB基因之间的核苷酸序列相似性为98.1%～100.0%;小附红细胞体上海分离株rnpB基因与猪附红细胞体德国分离株rnpB基因序列的相似性为91.0%,与猪附红细胞体上海分离株rnpB基因序列相似性为90.0%～91.0%。系统进化分析显示猪附红细胞体rnpB基因与小附红细胞体rnpB基因分布在不同聚簇上,与16S rRNA基因序列鉴定结果一致。
- 王向佩周鹏米荣升沈莉萍黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 关键词：猪附红细胞体克隆
