目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C,ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,Rho C)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated,coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果:Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,Rho C,ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:Fasudil具有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。
目的:探讨BTB/POZ结构域蛋白7(BTBD7)假基因1(BTBD7P1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及功能。方法:检测106例配对的HCC组织与癌旁组织标本中BTBD7P1 m RNA的表达,分析BTBD7P1m RNA表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。用BTBD7P1过表达慢病毒载体转染HCC细胞系Bel7404后,检测细胞增殖率以及BTBD7 m RNA与蛋白的表达。结果:HCC组织中BTBD7P1相对表达量明显低于癌旁组织为(0.71 vs.2.14,P<0.05);BTBD7P1m RNA低表达与肿瘤大小、卫星灶、分化程度、静脉血管侵犯、出血坏死、HCC分期明显有关(均P<0.05);BTBD7P1 m RNA低表达患者的1、3、5年总体生存率及无瘤生存率均明显低于BTBD7P1m RNA高表达患者(均P<0.05)。与转染空载体质粒的对照组Bel7404细胞比较,转染BTBD7P1过表达慢病毒载体的Bel7404细胞,细胞增殖能力明显减低,BTBD7 m RNA表达明显下调(均P<0.05),但BTBD7蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:BTBD7P1可能在m RNA水平对亲本基因BTBD7表达进行调控,从而参与了HCC发生与发展。
背景与目的:YTH基因家族的所有成员都属于m6A阅读蛋白,负责参与肿瘤发生发展过程中的甲基化调控。然而,YTH基因家族在肝癌中的表达情况和具体作用仍有待进一步阐明。本文旨在通过生物信息学方法探究YTH家族成员在肝癌中的表达与预后价值,及其与免疫浸润及相关功能的关系。方法:用UALCAN数据库分析YTH基因家族在肝癌及其亚组中的表达差异。采用Kaplan-Meier plotter数据库分析YTH基因家族在肝癌中的预后价值。使用c Bio Portal数据库进行YTH基因家族的共表达谱和遗传学变异分析。通过Web Gestalt数据库进行YTH基因家族的功能和通路富集分析。YTH基因家族与肝癌中的免疫细胞浸润的相关性分析采用TIMER 2.0数据库完成。结果:肝癌中YTHDC1、YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3的m RNA表达均较正常肝组织明显升高,并与临床TNM分期及肿瘤分级密切相关,其在1、2、3期/级中表达逐级升高,而在4期/级中表达水平下降。预后分析显示,YTHDF1和YTHDF2的高表达均与患者更短的总生存期(OS)和无复发生存期(RFS)明显相关。TCGA数据库和c Bio Portal工具分析显示,YTHDF3基因变异率为25%,是YTH家族中最高的。GO功能富集分析显示YTH基因家族的主要癌症相关功能指向代谢及生物合成分解方向,尤其是激素代谢、固醇类代谢、脂代谢、药物分解代谢等。通过TIMER 2.0数据库分析多数YTH家族成员的表达与CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、B细胞、中性粒细胞以及树突细胞的浸润呈正相关,与巨噬细胞浸润呈负相关。结论:YTH基因家族在肝癌中存在分子和表达谱的失调。YTH基因家族成员(尤其是YTHDF1和YTHDF2)是肝癌潜在的预后标志物和新的治疗靶点,这些发现可为肝癌机制与靶向治疗的研究提供新的途径。
