简宇
- 作品数：9 被引量：22H指数：4
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
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- 小鼠创面GM-CSF表达特点及其作用机制初探
- 黄宏徐祥郭敏崔文慧简宇戴卉杨永华蒋建新
- 小鼠急性皮肤缺损创面粒-巨噬细胞集落刺激因子表达特点及其作用机制被引量：6
- 2011年
- 目的探讨创面愈合过程中粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—macrophage colony stimulating factor，GM—CSF）的表达变化及其在创面愈合中的作用和机制。方法采用小鼠全层皮肤缺损伤模型。肌肉麻醉后在背部中线近颈侧制作1．0cm×1．0cm大小皮肤缺损伤创面。50只雄性小鼠创面造模成功后，单笼饲养，将每笼编号，依次为1～50号，按完全随机原则将小鼠分为对照组（25只）和GM—CSF治疗组（25只），每组分为5个时相点，分别为5只。治疗组创面用重组GM—CSF（rhGM—CSF）凝胶（10μg／cm^2），对照组创面用凝胶基质。于伤后第3，5，7，10和14天，观察创面愈合时间；测定创面愈合率；切取创面组织，检测病理组织学变化；通过CD31免疫组化染色结果分析，计算创面微血管密度；应用RT—PCR检测创面GM—CSF、血小板源性生长因子（platelet—derived growth factor，PDGF）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和基质细胞衍生因子-1（stromal cell derivedfactor-1，SDF-1）基因表达变化。结果RT—PCR检测结果显示创面GM—CSF基因表达伤后3d达峰值（P〈0．01），直到伤后10d均维持较高水平（P〈0．05），伤后14d其表达显著下降接近正常；应用rhGM—CSF凝胶后，创面愈合时间较对照组提前（2．4±0．3）d，其创面愈合率于伤后7～14d显著升高（P〈0．05）；组织学显示创伤早期创面中性粒细胞数量较少，创沿上皮细胞增殖数量较多，创面肉芽组织增生明显，并日．细胞密度大，以梭形细胞和卯圆形细胞为主，新生血管数量较多；创面微血管密度在伤后7～14d显著增加（P〈0．05）；VEGF和SDF-1基因表达，分别于伤后7d和10d内显著上调表达（P〈0．05），促愈生长因子PDGF基因于伤后各时相点均显著上调表达（P〈0．05）。结论GM—CSF在创面愈合早期表达增高，GM—CSF可促进�
- 郭敏崔文慧徐祥简宇代卉杨永华蒋建新黄宏简华刚
- 关键词：伤口愈合粒-巨噬细胞集落刺激因子基因表达
- 转化生长因子-β1促血管内皮细胞向间质细胞转化的作用研究被引量：5
- 2010年
- 目的观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)促进内皮细胞向间质细胞转化[endothelial-mesenchymal(myofibroblast)transition,EnMT]的效应,探讨肌成纤维细胞的来源以及纤维化疾病发生的新机制。方法分离培养人脐静脉内皮细胞,采用不同浓度的TGF-β1(0、10、25、和50ng/ml)刺激细胞72h后,倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫荧光方法检测第Ⅷ因子相关抗原和α-SMA表达变化,RT-PCR检测VE-钙粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型胶原基因表达变化。结果正常对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β1刺激组内皮细胞由铺路石样形态向梭形转化。免疫荧光检测可见对照组含有少量FⅧ,α-SMA双阳性细胞。TGF-β1组FⅧ,α-SMA双阳性细胞明显增多,并且具有明显的浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,TGF-β1刺激导致内皮细胞特异性标记物VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)基因的表达显著减少(P<0.05),随着TGF-β1刺激浓度的增加,VE-钙粘蛋白基因表达呈明显的下降趋势;相反,内皮细胞间质性标记物α-SMA和I型胶原基因的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),并且具有明显的浓度依赖性。结论 TGF-β1刺激内皮细胞后,细胞表型和功能均表现为间质细胞特性,提示TGF-β1具有促进内皮细胞向间质细胞转化(EnMT)的作用,并且其促EnMT效应具有明显的浓度依赖性。
- 简宇简华刚黄宏徐祥郭敏代卉崔文慧蒋建新朱佩芳王正国
- 关键词：内皮细胞肌成纤维细胞转分化转化生长因子-Β1
- 血管内皮细胞向间质细胞转化在创伤愈合过程中的作用研究
- 第一部分人病理性瘢痕组织及小鼠创伤愈合过程中存在EnMT
目的:观察人病理性瘢痕组织中是否存在EnMT;观察小鼠创伤愈合过程中是否存在EnMT,及其在创伤愈合过程中的表达情况。
方法:临床收集人病理性瘢痕组织...
- 简宇
- 关键词：血管内皮细胞细胞转化创伤愈合过程免疫荧光方法瘢痕组织
- 基质细胞衍生因子-1α诱导骨髓来源细胞促进皮肤创面愈合
- 目的探讨皮肤创面基质细胞衍生因子-1α(Stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)在诱导骨髓来源细胞(Bone marrow derived cells,BMDCs)募集到达创面过程中的...
- 黄宏曾登芬王莎莉张波蒋建新王正国冯帅南郭敏简宇
- 内皮细胞-间质细胞转化在纤维化疾病中作用的研究进展被引量：3
- 2010年
- 纤维化是机体对损伤的一种病理反应，是机体在多种内外因素作用下，以间质细胞增生，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）异常沉积为特征的病理生理过程。目前，组织器官的纤维化疾病仍然是现代医学中尚未解决的临床难题，
- 简宇黄宏简华刚
- 关键词：纤维化疾病细胞转化内皮细胞病理生理过程细胞外基质病理反应
- 基质细胞衍生因子-1α在诱导骨髓来源细胞到达皮肤创面中的作用
- 2010年
- 目的 探讨皮肤创面基质细胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1α,SDF-1α）在诱导骨髓来源细胞（bone marrow derived cells,BMDCs）向创面募集过程中的作用.方法分离培养小鼠BMDCs,并通过CXCR=4（SDF-1d特异性受体）免疫荧光鉴定BMDCs.培养的BMDC8分为正常培养组（BMDCs组）和CXCR4抗体共孵育组（100 ng/ml,anti-CXCR4组）,用CM-DiI标记后分别将各组BMDC8注入全层皮肤缺损伤小鼠模型的尾静脉,同时以注射DMEM/F12无血清培养基作为对照组,观察创面标记的BMDCs数量及创面愈合率. 结果 （1）BMDCs均表达CXCR4;（2）在伤后7和14 d BMDCs组的创面愈合率分别为（41.3±4.6）%和（92.3±2.1）%,显著高于相应时相点对照组[（29.3±2.3）%、（77.3±2.5）%]和anti-CXCR4组[（30.7±4.6）%、（85.7±1.5）%]（P＜0.05）,而anti-CXCR4组的创面愈合率仅在伤后14 d显著高于对照组（P＜0.05）;（3）在伤后7和14 d,BMDCs组创面标记的BMDCs数目分别为（535±84）个/每张切片和（769±124）个/每张切片,显著高于相应时相点的anti-CXCR4组[（335±97）个/每张切片;（521±127）个/每张切片]（P＜0.05）. 结论 BMDCs参与并促进皮肤创面愈合;SDF-1α在诱导BMDCs到达创面过程中有重要作用.
- 冯帅南徐祥曾登芬张猛王莎莉郭敏简宇张波杨策蒋建新王正国黄宏
- 关键词：伤口愈合骨髓细胞基质细胞衍生因子-1Α
- 肿瘤坏死因子α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用被引量：5
- 2012年
- 目的 观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法 取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,均按随机数字表法分为6组：对照组,培养液中不加任何刺激因素；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组,分别在培养液中添加相应终浓度TNF-α,每组3个样本.培养72 h后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态；免疫荧光法检测12孔板中各组细胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,计算2种因子双阳性细胞数比值及吸光度值比值；RT-PCR检测6孔板中各组细胞钙黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达（以灰度值比值表示）.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果（1）原代培养HUVEC为圆形、短梭形或扁平形,传代后细胞呈铺路石样旺盛生长.经第1、2、3、4、5次传代后HUVEC凝血因子Ⅷ阳性表达率分别为（85.5±1.8）％、（88 1±5 0）％、（93.6±3.7）％、（92.9±4 8）％、（89.5±1.1）％,明显高于原代培养HUVEC的（81.4±3.8）％,F值均为7.481,P值均小于0.05.（2）对照组细胞呈圆形、短梭形或扁平形,细胞间连接紧密；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组随着TNF-α浓度的增加,细胞形态逐渐向长梭形转变,细胞间连接减少、间隙变大.（3）对照组中凝血因子Ⅷ、α-SMA双阳性细胞数比值和吸光度值比值分别为0.055±0 015、0.078±0 017,均显著低于5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组的0 257±0.106、0 280±0.129、0.505±0 059、0.817±0.035、0.929±0.101和0.437±0 040、0 456±0.097、0 496±0.082、0.787±0 131、0.885±0 087,F值分别为45 009、50.099,P值均小于0.01.（4）5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞中钙黏蛋白mRNA水平分别为0.70±0.05、0.63±0 06、0 60±0.10、0.45±0.16、0 26±0.14,后4组显著低于对照组的0 8
- 代卉黄宏王莎莉徐祥简宇崔文慧张猛张波蒋建新
- 关键词：肿瘤坏死因子Α内皮细胞间质细胞细胞转分化肌成纤维细胞
- 粒细胞巨噬细胞刺激因子对大鼠创面哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路的作用被引量：4
- 2012年
- 目的 了解应用粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）对大鼠创面愈合的影响及对哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白（mTOR）信号通路的作用. 方法 将50只SD大鼠按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组25只,于其背部制作约2 cm×2 cm全层皮肤缺损创面.治疗组大鼠创面外涂重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（ rhGM-CSF）凝胶,10 μg/cm2,rhGM-CSF实际作用量为1×10-4 μg/cm2；对照组创面涂抹不含任何药物的凝胶基质,10 μg/cm2.2组每日给药1次直至创面愈合.于致伤后1、3、5、7、14 d,每组每时相点处死5只大鼠：（1）观察并计算创面愈合率.（2）于前4个时相点取创面组织标本,行HE染色观察组织病理学改变,ELISA法检测GM-CSF含量,蛋白质印迹法检测GM-CSF、CD31及mTOR信号通路相关分子P70S6K、磷酸化（p-）P70S6K、4E-BP1、p-4E-BP1、mTOR、p-mTOR表达量.对数据行t检验. 结果 （1）伤后1d,2组大鼠创面愈合率接近（t=0.307,P＞0.05）；伤后3～ 14 d,治疗组创面愈合率明显高于对照组（t值为2.704～ 4.030,P ＜0.05或P ＜0.01）.（2）HE染色可见,与对照组同时相点相比,治疗组创面肉芽组织及微血管数量明显增多,创缘角化上皮细胞增殖明显.（3）ELISA法和蛋白质印迹检测结果显示,2组大鼠创面GM-CSF含量及蛋白表达量均在伤后3d达到峰值,对照组分别为（720.9±0.9）pg/mL、2.45±0.10,治疗组分别为（910.5±1.3）pg/mL、2 80±0.48.治疗组各时相点GM-CSF含量均明显高于对照组（t值为105.743～298.971,P值均为0.000）,治疗组伤后1、5、7 d GM-CSF蛋白表达量明显高于对照组（t值为4.070～5.275,P值均小于0.01）.（4）治疗组伤后1、3、7d创面组织中CD31表达量均明显高于对照组（t值为7.237～26.401,P值均小于0.01）.（5）治疗组伤后各时相点创面组织中mTOR和p-mTOR表达量均高于对照组（t值为2.921 ～23.143,P ＜0.05或P＜0.01）.治疗组P70S6K表达量�
- 崔文慧黄宏徐祥郭敏代卉简宇郭韡邢伟蒋建新杨戎
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子信号传导创面愈合
