傅冠元
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：路易斯安那州立大学更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 蛋白酪氨酸磷酸酶shp-1催化活性域的纯化和动力学分析
- 2009年
- 为了获得分离纯化shp—1催化活性域蛋白（D1C）并估测其动力学常数，试验选择D1C的转化菌株经IVFG诱导表达、菌体裂解缓冲液悬浮和超声波破碎后，通过HPLC分离纯化D1C蛋白，所得产物进行SDS～PAGE电泳检测，然后以pY作为去磷酸化反应的底物，利用孔雀绿显色法，通过双倒数作图法对纯化的D1C蛋白进行动力学分析。结果表明：试验成功地表达了D1C蛋白，其分子质量约为34．6ku，主要以可溶性蛋白的形式表达；通过HPLC技术可有效地对D1C蛋白进行分离纯化；D1C蛋白的米氏常数Km=2．04mmol／L，催化常数（kcat）=44．98s^-1，特异性常数（kcat／Km）=22．05L／（mmol·s）。
- 莫毅王伟梁方方傅冠元蒋和生Wayne Zhou
- 关键词：SHP-1蛋白表达蛋白纯化动力学分析
- 蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1/SHP-2催化活性域的表达和动力学分析被引量：1
- 2009年
- 为了分离纯化SHP-1/SHP-2催化活性域蛋白(分别命名为D1C/D2C),并估测其动力学常数,将已经构建好的D1C/D2C重组质粒转化Escherichia coli BL21菌株,经IPTG诱导表达、菌体裂解缓冲液悬浮和超声波破碎后,通过HPLC分离纯化D1C/D2C蛋白,所得产物进行SDS-PAGE电泳检测。然后,以pY作为去磷酸化反应的底物,利用孔雀绿显色法,通过双倒数作图法对纯化的D1C/D2C蛋白进行动力学分析。结果表明,本试验已成功地表达了D1C和D2C蛋白,主要以可溶性蛋白的形式表达;利用HPLC技术可有效地对D1C/D2C蛋白进行分离纯化;D1C的相对分子质量为34.6 kD,米氏常数Km=2.04 mmol/L,催化常数Kcat=44.98 s-1,特异性常数Kcat/Km=22.05 L/(mmol.s);D2C的相对分子质量为35.3 kD,米氏常数Km=2.47 mmol/L,催化常数Kcat=27.45 s-1,特异性常数Kcat/Km=11.11 L/(mmol.s);D1C的磷酸酶活性较强于D2C。
- 莫毅王伟梁方方傅冠元蒋和生Wayne Zhou
- 关键词：SHP-1SHP-2蛋白表达蛋白纯化动力学分析
