王伟
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：路易斯安那州立大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PZR基因的定点突变、表达和纯化
- 2009年
- 为获得纯化的单磷酸化PZR蛋白,使用双磷酸化位点的His-PZR重组原核表达载体为模板,采用重叠延长PCR定点突变技术分别构建:PZR-Phe263(TTT)和PZR-Phe241(TTT)重组原核表达载体,并与C-Src重组原核表达载体共同转化E.coliBL21菌株,通过IPTG诱导表达,Ni-NTA纯化,获得了单磷酸化的PZRa和PZRb蛋白,为进一步研究PZR内的不同ITIM基序与酪氨酸磷酸酶间的作用机制及其在信号转导过程中的功能奠定了基础。
- 莫毅王伟梁方方杨旭芬宋茜蒋和生Wayne Zhou
- 关键词：定点突变纯化
- 蛋白酪氨酸磷酸酶shp-1催化活性域的纯化和动力学分析
- 2009年
- 为了获得分离纯化shp—1催化活性域蛋白（D1C）并估测其动力学常数，试验选择D1C的转化菌株经IVFG诱导表达、菌体裂解缓冲液悬浮和超声波破碎后，通过HPLC分离纯化D1C蛋白，所得产物进行SDS～PAGE电泳检测，然后以pY作为去磷酸化反应的底物，利用孔雀绿显色法，通过双倒数作图法对纯化的D1C蛋白进行动力学分析。结果表明：试验成功地表达了D1C蛋白，其分子质量约为34．6ku，主要以可溶性蛋白的形式表达；通过HPLC技术可有效地对D1C蛋白进行分离纯化；D1C蛋白的米氏常数Km=2．04mmol／L，催化常数（kcat）=44．98s^-1，特异性常数（kcat／Km）=22．05L／（mmol·s）。
- 莫毅王伟梁方方傅冠元蒋和生Wayne Zhou
- 关键词：SHP-1蛋白表达蛋白纯化动力学分析
- 蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1/SHP-2催化活性域的表达和动力学分析被引量：1
- 2009年
- 为了分离纯化SHP-1/SHP-2催化活性域蛋白(分别命名为D1C/D2C),并估测其动力学常数,将已经构建好的D1C/D2C重组质粒转化Escherichia coli BL21菌株,经IPTG诱导表达、菌体裂解缓冲液悬浮和超声波破碎后,通过HPLC分离纯化D1C/D2C蛋白,所得产物进行SDS-PAGE电泳检测。然后,以pY作为去磷酸化反应的底物,利用孔雀绿显色法,通过双倒数作图法对纯化的D1C/D2C蛋白进行动力学分析。结果表明,本试验已成功地表达了D1C和D2C蛋白,主要以可溶性蛋白的形式表达;利用HPLC技术可有效地对D1C/D2C蛋白进行分离纯化;D1C的相对分子质量为34.6 kD,米氏常数Km=2.04 mmol/L,催化常数Kcat=44.98 s-1,特异性常数Kcat/Km=22.05 L/(mmol.s);D2C的相对分子质量为35.3 kD,米氏常数Km=2.47 mmol/L,催化常数Kcat=27.45 s-1,特异性常数Kcat/Km=11.11 L/(mmol.s);D1C的磷酸酶活性较强于D2C。
- 莫毅王伟梁方方傅冠元蒋和生Wayne Zhou
- 关键词：SHP-1SHP-2蛋白表达蛋白纯化动力学分析
- 双磷酸化His-PZR蛋白的表达与分离纯化被引量：1
- 2009年
- 目的获得纯化的双磷酸化His-PZR蛋白。方法本试验采用His-PZR与C-Src重组原核表达载体共同转化E.coliBL21菌株的方法,通过IPTG诱导表达,Ni-NTA纯化及HPLC分离纯化等技术,获得双磷酸化的His-PZR蛋白。结果成功表达了His-PZR蛋白,约占全菌体蛋白的8.5%,相对分子质量约为10 000;并分离纯化出双磷酸化的His-PZR蛋白。结论双磷酸化His-PZR蛋白的表达和纯化,为进一步研究His-PZR与SHP蛋白间的作用机制及其在信号转导过程中的功能奠定了基础。
- 莫毅王伟梁方方兰干球郭亚芬蒋和生
- 关键词：酪氨酸磷酸酶纯化
