余涧坤
- 作品数：15 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种含HP1γ的胍基化聚氨基胺类聚合物基因载体复合物的制备及其应用
- 本发明涉及生物制剂新剂型和基因载体技术领域，具体涉及一种具有常染色质靶向功能的含HP1γ的胍基化聚氨基胺类聚合物基因载体复合物及其制备方法和应用。该复合物特点在于含有靶头蛋白和二硫键的胍基化聚氨基胺类基础载体，其具有良好...
- 余涧坤任昱曈
- 文献传递
- BCRP过表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖和凋亡的影响。方法取对数生长期的MDA-MB-435S细胞,将其随机分为三组,阳性转染组将真核表达质粒pc DNA3.1/BCRP经双酶切和测序鉴定后转染MDA-MB-435S细胞,阴性对照组同步转染2μg pc DNA3.1的空质粒,空白对照组用2 m L原培养液正常培养。采用RT-PCR法和Western blotting法检测BCRP mRNA和蛋白表达。转染后48 h,每组再分设7个丝裂霉素(MMC)浓度(0.01、0.10、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00μmol/L)组,每个浓度组3个复孔,加入相应浓度的MMC 10μL,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果重组真核表达质粒pc DNA3.1/BCRP经双酶切和测序证实该质粒构建正确;阳性转染组转染24、48、72 h后,MDA-MB-435S细胞中BCRP mRNA和蛋白表达均明显增加(P均<0.05);与阴性对照组比较,阳性转染组转染pc DNA3.1/BCRP 48 h后,细胞凋亡率无统计学差异(P>0.05);CCK-8结果显示,化疗药物MMC作用24 h后,与阴性对照组比较,阳性转染组转染pc DNA3.1/BCRP 48h后细胞存活率显著增加(P<0.05)。结论 BCRP过表达可促进人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖,但对细胞凋亡无明显影响。
- 于兆进余涧坤于丽凤魏敏杰赵琳
- 关键词：乳腺癌乳腺癌耐药蛋白细胞增殖细胞凋亡
- 含CBX3的L-精氨基氨酸化聚胺类聚合物基因载体的制备方法及其应用
- 本发明属于药物制剂新辅料、生物制剂新剂型和基因载体技术领域，具体涉及一种含有靶头蛋白CBX3的聚氨基胺类聚合物复合物基因载体及其制备方法和应用。该复合物复合物基因载体引入了CBX3靶头蛋白，具有良好膜透性和细胞内环境还原...
- 余涧坤秦孟孟
- 阳离子聚合物基因载体的研究进展被引量：1
- 2019年
- 阳离子聚合物是一类非常有应用前景的非病毒基因载体。与病毒载体比较,非病毒载体具有价格低廉、结构简单、低免疫原性等优点。聚乙烯亚胺(PEI)是目前研究最多的阳离子聚合物非病毒基因载体,具有较高的转染效率,常作为基因载体研究的阳性对照载体;聚氨基胺(PAAs)是由多氨基单体和还原敏感性交联剂聚合而成的线形或支化聚合物,具有水溶性佳、毒性低以及抗水解能力高等优点;聚氨基酯(PAEs)具有易降解的特性,细胞毒性较低;天然高分子生物材料具有良好的生物相容性。选择安全高效的基因载体是基因治疗的关键,深入了解阳离子聚合物载体的生物学性质、聚合物结构、转染效率以及细胞毒性之间的关系,可为设计构建安全、特异性高、具有高效基因递送效率的阳离子聚合物基因载体提供新的思路。
- 张宝臻余涧坤
- 关键词：阳离子聚合物基因载体转染效率细胞毒性结构修饰
- 一种与多种肿瘤细胞特异性结合的新型多肽及其用途
- 本发明属于生物医学领域，具体涉及一种与多种肿瘤细胞特异性结合的新型多肽及其用途。该多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1‑SEQ IDNO.5之一所示的氨基酸序列。该多肽及其生物活性片段和衍生物作为分子影像探针和药物...
- 魏敏杰于丽凤余涧坤赵琳王欣瑀王佳琪牛延新李梓楠
- 文献传递
- FANCF-shRNA质粒构建及其对卵巢癌细胞OVCAR3沉默效应的观察被引量：3
- 2011年
- 目的:构建针对人FANCF基因的特异性shRNA真核表达载体,体外观察siRNA对卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因的沉默效应。方法:采用基因克隆技术,将设计合成的能表达短发夹RNA的寡核苷酸序列插入真核表达质粒载体pSilencerTM4.1-CMV-neo,构建能表达FANCF-shRNA的真核表达载体;转染人卵巢癌OVCAR3细胞,提取总RNA和蛋白,RT-PCR验证mRNA表达的变化,蛋白质印迹法验证蛋白表达的变化。结果:质粒酶切和测序证实成功构建了FANCF-shRNA的真核表达载体。与野生型OVCAR3相比,脂质体法转染卵巢癌OVCAR3细胞后,FANCFmRNA 24、48和72 h的表达水平与阴性控制组比较均下调,抑制率分别为(23.91±6.58)%(、51.23±5.86)%和(47.42±7.52)%;FANCF蛋白在244、8和72 h的表达水平与阴性控制组比较亦下调,抑制率分别为(16.28±5.46)%(、24.42±6.85)%和(36.05±8.26)%。证实FANCF-shRNA具有沉默OVCAR3细胞FANCF基因表达的效应。结论:siRNA-FANCF干扰可引起卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因沉默,可能为卵巢肿瘤基础和临床研究提供一种有效的方法。
- 郝俊莹孙海刚李娜余涧坤唐宏涛李艳琳于兆进赵琳何苗魏敏杰
- 关键词：FANCF
- 含CBX3的L-精氨基氨酸化聚胺类聚合物基因载体的制备方法及其应用
- 本发明属于药物制剂新辅料、生物制剂新剂型和基因载体技术领域，具体涉及一种含有靶头蛋白CBX3的聚氨基胺类聚合物复合物基因载体及其制备方法和应用。该复合物复合物基因载体引入了CBX3靶头蛋白，具有良好膜透性和细胞内环境还原...
- 余涧坤秦孟孟
- 文献传递
- FANCF-shRNA表达质粒的构建及MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立
- 2011年
- 目的构建针对人FANCF基因的shRNA表达质粒(FANCF-shRNA),转染FANCF-shRNA使人乳腺癌MCF-7细胞FANCF基因沉默,从而建立MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型。方法实验分两部分:FANCF-shRNA表达质粒的构建:根据相关文献报道,使用Ambion公司的在线设计软件,设计并合成能够编码针对FANCF基因的小发夹RNA(FANCF-shRNA)的DNA模板,将其插入到p SliencerTM 4.1-CMV neo表达质粒中,形成pSliencerTM 4.1-CMV-FANCF-shRNA重组质粒;将该重组质粒转化到E coli感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR及基因测序方法筛选出插入正确的FANCF-shRNA表达质粒;MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立:碱裂解法提取FANCF-shRNA表达质粒,通过脂质体介导将该质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞中,RT-PCR法检测FANCF基因mRNA表达水平,确认FANCF基因沉默。结果含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR扩增片段约为250 bp,并且其基因测序结果显示插入片段碱基排列顺序正确,没有突变,说明FANCF-shRNA表达质粒构建成功;与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA质粒后第2天、第3天、第5天和第7天,FANCF基因mRNA表达水平均明显减低,表达抑制率分别为(36.51±6.84)%、(37.03±6.61)%、(53.03±9.33)%和(39.51±10.13)%(P<0.05),说明FANCF基因沉默,MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染成功建立。结论成功构建了FANCF-shRNA表达质粒并建立MCF-7-FANCF-RNAi细胞模型,为研究FANCF基因在乳腺癌发生发展及耐药产生与调控中的作用奠定实验基础。
- 唐宏涛何苗李娜孙海刚余涧坤郝俊莹魏敏杰
- 关键词：人乳腺癌MCF-7细胞RNAI
- 一种靶向多种肿瘤细胞的新型多肽及其用途
- 本发明属于生物医学领域，涉及一种与肿瘤细胞靶向结合的多肽，具体涉及一种与多种肿瘤细胞特异性结合的多肽及其用于肿瘤预防、治疗及诊断的用途。该多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1‑SEQ IDNO.5之一所示的氨基酸序...
- 魏敏杰于丽凤余涧坤赵琳
- 文献传递
- 一种含HP1γ的胍基化聚氨基胺类聚合物基因载体复合物的制备及其应用
- 本发明涉及生物制剂新剂型和基因载体技术领域，具体涉及一种具有常染色质靶向功能的含HP1γ的胍基化聚氨基胺类聚合物基因载体复合物及其制备方法和应用。该复合物特点在于含有靶头蛋白和二硫键的胍基化聚氨基胺类基础载体，其具有良好...
- 余涧坤任昱曈
