黄浦江
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省科技厅国际合作项目国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化被引量：6
- 2013年
- 克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)末端脱氧核糖核酸转移酶TdT蛋白(Terminal deoxynucleotidyl transferases)成熟肽基因序列,并与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a-TdT,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析表明,37℃、0.7 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后,TdT融合蛋白的表达量最大,分子质量大小与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式存在。利用HisTrap HP亲和层析柱使TdT蛋白得到进一步纯化,最佳咪唑洗脱浓度为300 mmol/L,Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性的结合,表明表达蛋白为目的蛋白。
- 黄瑜张雪利鲁义善简纪常吴灶和黄浦江周泽军
- 关键词：红笛鲷原核表达纯化WESTERNBLOT分析
- 红笛鲷IL-6基因的克隆及其对哈氏弧菌OmpW DNA疫苗佐剂效应的初步研究
- 红笛鲷(Lutjanus sanguineus)广泛分布于红海、非洲东岸、菲律宾和日本等沿海地区,在我国主要分布于台湾海峡、琼州海峡、海南岛、北部湾等海域,是我国沿海的重要养殖鱼类之一。近年来随着海水鱼类养殖密度的不断增...
- 黄浦江
- 关键词：红笛鲷IL-6嵌合基因DNA疫苗
- 文献传递
- 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因克隆、表达及DNA疫苗的免疫效果被引量：7
- 2013年
- 参照GenBank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因序列，设计引物扩增OmpW的开放阅读框，序列分析结果显示该基因全长645bp。将其定向克隆到原核表达载体pET-32a（＋），在大肠杆菌BL21中成功表达出带His-tag的融合蛋白，融合蛋白分子量约为43．8ku，且主要以包涵体形式存在。优化的表达条件为37oC，IPTG浓度0．1mmol／L，诱导时间5h。将纯化的融合蛋白免疫SPF昆明小鼠制备多克隆抗体，ELISA方法检测抗体效价达1：30000，Western．Blot结果表明鼠抗OmpW血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应，提示OmpW可能是哈维氏弧菌的一种重要保护性抗原。为进一步研究哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护效果，构建了真核表达重组质粒pcDNA-OmpW，然后将真核质粒免疫接种红笛鲷。PCR结果显示，免疫接种后第7—28天，在红笛鲷的肌肉、头肾、肝脏和脾脏组织中均存在质粒分布；RT．PCR结果显示，免疫接种后第7～28天，红笛鲷上述组织均有目的基因的表达。ELISA结果表明，红笛鲷体内血清产生了抗OmpW蛋白的高效价抗体。Western．Blot分析表明，DNA疫苗免疫后红笛鲷体内表达了相应的目的蛋白，并诱导产生了相应抗体。攻毒实验结果表明，免疫保护率高达60％，可见pcDNA-OmpW可作为红笛鲷预防哈维氏弧菌感染的有效候选疫苗之一。
- 黄浦江黄郁葱简纪常吴灶和鲁义善张雪利
- 关键词：哈维氏弧菌外膜蛋白免疫原性DNA疫苗
- 融合蛋白IL6-OmpW的质粒构建及表达纯化被引量：1
- 2013年
- 以重组质粒pMD18-T/IL6和pMD18-T/OmpW为模板,分别扩增红笛鲷IL-6基因和哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因,运用PCR重叠延伸剪切技术,将IL-6和OmpW基因融合,将融合基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白高效表达,融合蛋白分子质量约为66.6 ku。优化后表达条件为温度37℃,IPTG浓度0.2 mmol·L-1,诱导时间5 h。用HisTrap HP亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱浓度为400 mmol·L-1,纯化蛋白的质量浓度为480μg·mL-1。Western-blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异反应,表明目的蛋白得以正确表达。
- 黄浦江黄郁葱简纪常吴灶和鲁义善黄瑜樊云霞
- 关键词：基因融合
