黄德新
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
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- 单纯疱疹病毒II型糖蛋白G主要抗原表位的表达和抗原性检测
- 2007年
- 利用PCR拼接技术，合成含单纯疱疹病毒II型糖蛋白G（gG2）抗原表位（氨基酸序列第561～578位）的片段，并进一步利用基因工程技术获得该表位的双拷贝片段，克隆入pET—KDO表达载体进行原核表达。经IPTG诱导后，高效表达出分子量大小约为39kDa的融合蛋白，经Western blot检测具有良好的抗原性。表达的融合蛋白经凝血酶切割和亲和层析纯化，得到双拷贝gG2（561～578aa）目的蛋白，经ELISA检测具有良好的灵敏度和特异性。该重组抗原的构建和表达可用于HSV-2特异性血清学诊断的研究。
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- 关键词：抗原表位
- 多拷贝脑钠肽基因表达质粒的构建及其表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建多拷贝脑钠肽(BNP)基因重组表达质粒,并探讨BNP基因的拷贝数与其表达水平的相关性。方法通过人工合成和PCR技术扩增BNP基因,将其克隆至载体pCW111中,构建表达质粒pBNP11,并通过亚克隆构建含有不同数量表达盒的正向串联表达质粒,分别转化大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),经温度诱导表达,SDS-PAGE分析,并经激光扫描测定目的蛋白的表达量。结果测序及酶切鉴定证明1～3拷贝BNP重组表达质粒构建正确,重组蛋白在大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)中均可获得表达,表达量分别为菌体总蛋白的8.12%、9.94%、和9.18%。结论已构建了多拷贝BNP的重组表达质粒,BNP的表达水平随BNP拷贝数的增加而升高,但并未成倍增加。
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- 关键词：脑钠肽质粒拷贝数原核表达
- 免疫层析检测装置及其检测方法
- 本发明公开了一种免疫层析检测装置及其检测方法，装置包括膜基体，膜基体上依次设置有样品垫、承载由反应性物质和指示性物质组成的标记物的标记物垫、包被或化学交联有反应性物质的检测带、吸水垫，标记物为反应性物质和指示性物质偶联在...
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- 梅毒螺旋体重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的应用被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆、表达梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)膜蛋白TpN47、TpN17、TpN44.5和TpN15,建立双抗原夹心ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法:应用聚合酶链反应法(PCR)从Tp全基因组中扩增4个目的片段,克隆到载体pET-HT-JKM中,在BL21(DE3)plysS菌中诱导表达,Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,辣根过氧化物酶标记,双抗原夹心酶联免疫吸附法检测人血清中的特异性IgM和IgG抗体。结果:成功表达了4种重组蛋白用作ELISA包被和酶标抗原检测国家Tp参比血清,特异性和灵敏度均为100%;检测385份临床血清样本,结果与TPPA法相比符合率达到99%(P<0.01),灵敏度和特异性分别为98.2%(162/165)和99.5%(219/220)。结论:表达的4种重组抗原具有很好的生物活性,为理想的梅毒的血清学诊断用抗原。以这4种表达蛋白为基础建立的双抗原夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,而且方法简单,结果客观,易于自动化操作,值得临床大力推广。
- 卢海蓉王晓红陈少娟王峰章刚黄德新
- 关键词：重组蛋白梅毒螺旋体
- 免疫层析检测装置及其检测方法
- 本发明公开了一种免疫层析检测装置及其检测方法，装置包括膜基体，膜基体上依次设置有样品垫、承载由反应性物质和指示性物质组成的标记物的标记物垫、包被或化学交联有反应性物质的检测带、吸水垫，标记物为反应性物质和指示性物质偶联在...
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- 文献传递
- 梅毒螺旋体重组抗原TpN47的纯化工艺研究被引量：1
- 2013年
- 目的以含有TpN47基因的表达菌体为原料,纯化梅毒螺旋体重组抗原TpN47,并提高产品收率。方法表达菌体经超声破碎后离心取沉淀,沉淀变性溶解后采用金属螯合亲和层析进行纯化。通过对层析异常现象的分析和优化层析工艺操作提高收率。结果所得纯品经SDS-PAGE分析表明可用于检测梅毒相关抗体,优化后的操作工艺使产品收率大幅提高。结论利用金属螯合亲和层析可纯化得到符合要求的梅毒螺旋体重组抗原TpN47,通过改善层析操作提高目标蛋白收率是可行的。
- 章刚黄德新骆晓栋
- 关键词：梅毒螺旋体收率复性
