王保亚
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Tudor-SN蛋白与乳腺癌细胞生物学行为的关系研究
- 目的 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其复发和转移严重威胁患者的生命.在恶性肿瘤发生转移的过程中,肿瘤的高侵袭性和迁移能力的提高是重要的前提条件.Tudor-SN蛋白(又称p100,SND1蛋白)是一种高度同源性的,且...
- 刘欣王保亚苏超高星杰朱梦瑜段中潮钱宝鑫付晓杨洁
- 关键词：TGF-Β信号通路SMAD蛋白乳腺癌
- 重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达
- 2011年
- 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。
- 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁
- 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类HELA细胞
- 人类TudoR-SN蛋白表达抑制MDA-MB-231稳定株的建立及鉴定
- 研究目的:<br> 乳腺癌(Breast Cancer, BC)是女性最常见的恶性肿瘤之一，已成为全球范围内发病率最高的女性恶性肿瘤之一。和其它实体瘤相似，乳腺癌也具有很强的远处转移的倾向，如转移到肺、...
- 王保亚
- 关键词：侵袭力分子机制
- 文献传递
- 蛋白表达抑制稳定株MDA—MB-231-Tudor—SNI的筛选和鉴定
- 2010年
- 目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰（RNAi）技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞，经G418筛选出稳定株，通过RT—PCR检测Tudor—SN的mRNA水平，再以Western印迹技术鉴定Tudor—SN蛋白表达情况并计算蛋白表达抑制率。结果与对照组相比，以G418筛选的MDA—MB-231-Tudor—SNI稳定株Tudor—SN的mRNA水平降低（P〈0．01，n=3），蛋白表达水平明显下调（P〈0．01，n=3），蛋白表达抑制率达78．12％。结论成功筛选并鉴定人类Tudor—SN蛋白表达抑制MDA—MB-231稳定株，有助于深入研究Tudor—SN蛋白在乳腺癌中的作用。
- 王保亚刘欣高星杰朱梦瑜杨振霞赵秀娟杨洁
- 关键词：RNA干扰细胞筛选
- Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建
- 2011年
- 目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段（SN5α、SN5β）的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.
- 钱宝鑫朱梦瑜高星杰刘欣苏超付晓王保亚王鑫廷杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒
