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Tudor-SN蛋白参与调控DNA损伤应答分子机制的研究: 细胞DNA是内外环境中众多不利因素攻击的靶标,受损的DNA会诱发一系列疾病并威胁到基因组的稳定性。为了对抗不利因素造成的DNA损伤,细胞在长期进化过程中,形成了包括损伤监视、染色质重塑、周期调控、损伤修复、凋亡诱导等在内...; 付晓张春燕张锴苏超孟浩辛灵彪任媛媛张玮孙晓明Olli Silvennoinen姚智杨熙杨洁; 关键词：组蛋白修饰; 文献传递

重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达: 2011年; 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。; 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁; 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类 HELA细胞

Tudor-SN蛋白参与调控DNA损伤应答分子机制的研究: 细胞DNA是内外环境中众多不利因素攻击的靶标，受损的DNA会诱发一系列疾病并威胁到基因组的稳定性.为了对抗不利因素造成的DNA损伤，细胞在长期进化过程中，形成了包括损伤监视、染色质重塑、周期调控、损伤修复、凋亡诱导等在内...; 付晓张春燕张锴苏超孟浩辛灵彪任媛媛张玮孙晓明Olli Silvennoinen姚智杨熙杨洁; 关键词：组蛋白修饰

PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布: 2010年; 目的将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP—C2质粒，使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达，观察其在HeLa细胞中的表达及定位。方法以重组质粒pEGFP—C2-PSF为模板，PCR法扩增出目的基因，将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP—C2上，构建重组质粒pEGFP—C2-PSF（I—V）。将构建成功的pEGFP—C2-PSF（I—V）质粒脂质体法转染HeLa细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布。结果成功构建质粒pEGFP—C2-PSF（I～V），并在HeLa细胞中实现表达；Western印迹检测到融合蛋白GFP—PSF（I～V）；在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位。结论人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEG—FP—C2-PSF（I～V）构建成功，可用于标记PSF蛋白的不同功能片段，为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础。; 张馨予东莉洁付晓杨振霞杨洁; 关键词：重组质粒融合蛋白

重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达: 2010年; 目的将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.; 苏超朱梦瑜高星杰王鑫廷张桂敏付晓葛林杨洁; 关键词：PGEX-4T-1 重组质粒融合蛋白

Tudor-SN蛋白与乳腺癌细胞生物学行为的关系研究: 目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其复发和转移严重威胁患者的生命.在恶性肿瘤发生转移的过程中,肿瘤的高侵袭性和迁移能力的提高是重要的前提条件.Tudor-SN蛋白(又称p100,SND1蛋白)是一种高度同源性的,且...; 刘欣王保亚苏超高星杰朱梦瑜段中潮钱宝鑫付晓杨洁; 关键词：TGF-Β信号通路 SMAD蛋白乳腺癌

Tudor-SN蛋白参与DNA损伤应答的机制探讨: 目的:各种来自机体内外环境中的损伤因素,如机体代谢产生的活性氧、紫外线、电离辐射、基因毒性药物等均能引发基因组DNA的结构性损伤、拷贝数变化、表达调控紊乱等。为了对抗这些不利因素的影响,细胞在长期进化过程中,形成了一整套...; 付晓; 关键词：细胞凋亡组蛋白修饰 ATM; 文献传递

活细胞内人AGTR1-3′UTR的荧光标记及应激定位分析: 2014年; 利用噬菌体衣壳蛋白MS2和带有序列特异性茎环结构(含有MS2蛋白结合位点)的RNA之间的高度亲和力,对外源性人血管紧张素1型受体(angiotensin II receptor type 1,AGTR1)mRNA 3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)片段进行红色荧光标记,进而在活细胞(HeLa)内研究该mRNA片段的应激生物学行为。通过在pSG5空载体质粒上先后插入两个双链DNA目的片段AGTR1-3′UTR和24×MS2,构建重组质粒pSG5/AGTR1-3′UTR/24×MS2,并将该质粒与重组质粒pERFP/MS2和pEGFP/C1-G3BP共转染入Hela细胞。荧光显微成像结果显示,AGTR1-3′UTR-24×MS2 mRNA片段能够携带具有入核信号的MS2-RFP融合蛋白离开胞核进入胞浆,而且在亚砷酸盐刺激下,红色荧光标记的AGTR1-3′UTR-24×MS2 mRNA片段可在胞浆中形成与应激蛋白G3BP-GFP共定位的颗粒。该结果表明,针对AGTR1-3′UTR片段的MS2-RFP荧光标记系统构建成功,该荧光标记系统能有效避免假阳性的荧光信号。在细胞受到氧化应激时,AGTR1-3′UTR会被招募至胞浆中的应激颗粒结构中,启示了AGTR1-3′UTR区域对于调控AGTR1 mRNA在细胞内的应激定位具有重要作用。; 张毅高星杰付雪苏超史雪彬段中潮付晓何津岩杨洁; 关键词：重组质粒荧光标记

SND1低表达宫颈癌CasKi细胞稳定株的构建及其生物学功能变化被引量：1: 2017年; 目的构建SND1低表达的人宫颈癌CasKi细胞稳定株,探讨SND1低表达对CasKi细胞生物学功能的影响。方法 CasKi细胞随机分为六组,空白对照组不做处理,阴性对照组、干扰1~4组分别转染TRC2-p LKO-puro Vector的空载慢病毒液及SND1 shRNA(1~4)慢病毒液,用嘌呤霉素筛选CasKi细胞稳定株。分别用Western blotting技术、RT-PCR技术检测CasKi细胞内SND1蛋白、mRNA表达,确认转染效率。用CCK-8法检测CasKi细胞增殖活力(OD_(450)值),用细胞划痕实验检测CasKi细胞相对迁移距离。结果空白对照组细胞全部死亡,阴性对照组及干扰1~4组细胞部分存活,证明细胞稳定株转染构建成功。干扰1~4组SND1蛋白、mRNA相对表达量与空白对照组、阴性对照组比较,P均<0.05;干扰3、4组与其他组比较,P均<0.05。干扰3、4组OD_(450)值、相对迁移距离与空白对照组、阴性对照组比较,P均<0.05。结论成功构建了SND1低表达的CasKi细胞稳定株;SND1低表达的CasKi细胞增殖和迁移能力降低。; 孟浩付晓张春燕辛灵彪任媛媛杨洁何津岩; 关键词：子宫颈肿瘤 CASKI细胞细胞迁移

Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建: 2011年; 目的实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段（SN5α、SN5β）的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.; 钱宝鑫朱梦瑜高星杰刘欣苏超付晓王保亚王鑫廷杨洁; 关键词：PEGFP-C2 重组质粒

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付晓

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