杨沫
- 作品数：7 被引量：13H指数：3
- 供职机构：四川大学华西公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 苯并[a]芘诱导的细胞恶性转化对DNA甲基化转移酶的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究苯并[a]芘(B[a]P)诱导的小鼠胚胎成纤维细胞恶性转化过程对DNA甲基化转移酶(DNMTs)表达水平及活性的影响。方法以野生型小鼠胚胎成纤维细胞(polβ+/+)和BaP长期多次染毒构建的小鼠胚胎成纤维恶性转化细胞(polβ-T)为研究对象,采用RT-PCR和Western-blot分别检测两种细胞中dnmts(dnmt1、dnmt3a和dnmt3b)的mRNA及蛋白表达水平,同时用DNA甲基转移酶活性/抑制分析试剂盒检测DNMTs的酶活性。结果 polβ-T细胞dnmt1和dnmt3b的mRNA相对表达量分别为(0.940±0.033)和(0.905±0.062),均高于polβ+/+细胞[(0.560±0.031)和(0.666±0.041)],差异有统计学意义(P<0.05)。polβ-T细胞DNMT1和DNMT3b蛋白相对表达量分别为2.172±0.089和1.134±0.144,亦均高于polβ+/+细胞(1.311±0.050和0.820±0.106),差异具有统计学意义(P<0.05)。两种细胞DNMT3a蛋白和mRNA相对表达水平均无显著性差异。酶活性检测结果显示,与polβ+/+细胞[(329.48±52.11)OD·h-1·mg-1]相比,polβ-T细胞甲基化转移酶活性[253.70±20.56)OD·h-1·mg-1]降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 dnmt1和dnmt3b的异常表达以及DNMTs酶活性的改变可能参与苯并[a]芘诱导的细胞恶性转化过程。
- 邓雯文杨沫张遵真吴媚
- 关键词：苯并[A]芘恶性转化表观遗传
- 虾青素对^(60)Coγ射线所致小鼠氧化损伤的保护作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨虾青素对60Coγ射线诱导的小鼠氧化损伤的保护作用。方法 50只昆明种小鼠随机分为5组,即对照组、模型组和虾青素高、中、低剂量组(10.2、2.0和4.0mg/kg)。辐照前,各剂量组每日经口灌胃不同浓度的虾青素,模型组和对照组则给予等体积植物油,连续30天。30天后,除对照组外,其余各组给予8 Gy 60Coγ射线全身一次性照射。照射后第4天处死小鼠,取肝细胞进行彗星实验以观察细胞DNA损伤,制取肝匀浆测定MDA含量、SOD和GSH-Px活性,同时进行外周血粒细胞和骨髓有核细胞计数。结果与对照组相比,模型组MDA含量显著升高(P<0.01),SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,虾青素各组MDA含量显著降低(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),高剂量组GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。模型组DNA损伤指标均显著高于对照组(P<0.01),而虾青素各组DNA损伤显著低于模型组(P<0.01),且随着虾青素剂量的增加,细胞拖尾率和OTM逐渐减少。与对照组相比,模型组粒细胞和骨髓有核细胞计数显著降低(P<0.01),而虾青素各组粒细胞和中、高剂量组骨髓有核细胞显著高于模型组(P<0.01)。结论虾青素对于辐射诱导的氧化损伤具有保护作用。
- 赵巍蒋学君陈晨崔杰杨沫张遵真
- 关键词：虾青素彗星实验抗氧化
- DNA聚合酶β表达水平对苯代谢物氢醌致细胞凋亡及线粒体膜电位的影响
- 2011年
- 目的探讨DNA聚合酶β（DNA polymemsebeta，polβ）对氢醌（HQ）所致细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法以polβ野生型（polβ＋/＋）、polβ缺陷型（polβ-／-）及polβ高表达型（polpoe）小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象，以不同浓度的HQ溶液染毒后，采用流式细胞术分别检测HQ对细胞凋亡和线粒体膜电位（△ψm）的影响，试剂盒法测定细胞内活性氧（ROS）和羟自由基（·OH）含量；化学发光法分析细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活力。结果与对照组相比，各染毒组凋亡细胞率和△ψm降低的细胞比例明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与polβ＋/＋细胞比较，20．00、40．00、80．00μmol／L染毒组polβ-／-细胞凋亡率明显增高，10．00、20．00、40．00、80．00μmol/L染毒组polβ oe细胞凋亡率明显降低，差异均有统计学意义（P（0．05）。与polβ＋／＋细胞（20．60％±0．57％、37．95％±0．64％、44．50％±1．27％、57．55％±1．06％）比较，10．00、20．00、40．00、80．00μmol／L染毒组polβ-／-细胞△ψm降低的细胞比例（33．60％±1．55％、46．05％±1．77％、52．75％±2．05％、75．20％±0．56％）明显增高，polβ oe细胞△ψm降低的细胞比例（16．05％±1．20％、29．80％±1．21％、35．15％±1．06％、53．80％±0．85％）明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与polβ＋/＋细胞比较，各染毒组polβ-/-细胞产生的荧光强度明显增高，polβ oe细胞的荧光强度明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与pol β ＋/＋细胞相比，20．00、40．00μmol／L染毒组pol β-／-细胞内·0H含量明显增高，polβ oe细胞内·0H含量明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。在相同浓度HQ染毒剂量下，polβ-／-细胞内SOD和GSH-Px消耗最快，polβ oe细胞内的SOD和GSH-Px消耗�
- 陈晨杨沫张遵真吴媚邓雯文
- 关键词：DNA聚合酶Β膜电位过氧化物酶类
- DNA聚合酶β对苯并[a]芘致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响
- 目的研究DNA聚合酶β(Polβ)表达水平对苯并[a]芘(BaP)致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响。方法采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-...
- 杨沫吴媚陈晨刘蜀坤张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β苯并[A]芘
- 文献传递
- DNA聚合酶β对苯并[a]芘致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究DNA聚合酶β（polβ）表达水平对苯并【a]芘（BaP）致细胞遗传毒性及基因组遗传不稳定性的影响，为BaP的致癌分子机制提供实验依据。方法采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞[polβ野生型（polβ＋／＋）、polβ缺陷型（polβ-／-）和polβ高表达型（voe）】作为模型，检测BaP对细胞的氧化损伤作用，细胞遗传毒性和基因组遗传不稳定性。结果随着BaP浓度的增加，3种细胞的存活率和克隆形成能力均下降。5．00和20．00μmol／LBaP染毒时，polβ-／-细胞产生的ROS荧光强度均大于polβ＋／＋和polβoe细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在5．00和20．00μmol／L时，polβ-／-细胞SOD活力为（76．56±2．84）和（62．78±4．28）U／mgpro，低于对照组[（84．85±3．59）U／mgpro]和polβ＋／＋细胞【（85．21±3．20）和（76．90±3．38）U／mgpro]，20．00μmol／LBaP染毒组polβoe细胞SOD活力【（82．59±4．64）U／mgpro]低于对照组[（88．58±6．77）U／mgpro]但高于相同浓度染毒的polβ＋／＋细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。1．25、5．00和20．00μmol／LBaP染毒组的polβ-／-细胞的微核形成率明显高于polβ＋/＋细胞，5．00和20．00μmol／LBaP染毒组的polβoe细胞的微核形成率明显低于polβ＋，＋细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。5．00和20．00μmol／LBaP染毒组polβ-／-细胞的HPRT基因突变频率为26．16×10^-6和37．51×10^-6，polβoe细胞为27．68×10^-6和38．63×10^-6，均明显高于polβ＋／＋细胞（19．76×10^-6和24．78×10^6），差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论polβ在保护细胞免受BaP造成的细胞毒性和遗传毒性方面具有积极的作用，其正常表达对于维持细胞基因组遗传稳定性具有重要的意义。
- 杨沫吴媚崔杰陈晨张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β微核试验
- 苯并[a]芘诱导的恶性转化细胞中DNA聚合酶β高表达的机制研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨苯并[a]芘(BaP)诱导的恶性转化细胞中DNA聚合酶β(polβ)表达增加的可能机制。方法采用RT-PCR-单链构象多态性(RT-PCR-SSCP)分析及基因测序检测BaP诱导的恶性转化细胞(polβ-T细胞)中polβ基因外显子序列;基因测序检测polβ基因启动子序列。采用RT-PCR和Western blot检测polβ-T细胞和未经BaP处理的对照细胞(polβ细胞)中蛋白精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)mRNA及蛋白质表达水平。结果RT-PCR-SSCP和基因测序未发现polβ-T细胞中polβ基因外显子序列改变,但其启动子区域经基因测序证实5′端上游-10位和-61位分别存在插入突变(插入G)和点突变(C→A)。此外,polβ-T细胞中PRMT6mRNA和蛋白表达量均较对照polβ细胞增高(P<0.05)。结论 BaP诱导的恶性转化细胞中polβ基因的高表达不伴随其外显子序列的突变,但与启动子序列遗传学突变密切相关,PRMT6还可能通过表观遗传学途径导致polβ的高表达。
- 赵巍吴媚杨沫张遵真
- 关键词：DNA聚合酶Β
- DNA聚合酶β表达水平与^(60)Coγ射线放射敏感性的研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究DNA聚合酶β(polβ)表达水平与60Coγ射线放射敏感性的关系,为增加临床放疗效果提供理论依据。方法以polβ野生型(polβ+/+)、polβ缺陷型(polβ-/-)及polβ高表达型(polβoe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐(MTT)比色法和细胞集落形成实验探讨3种细胞对60Coγ射线的敏感性;同时通过2’,7’-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针测定不同剂量60 Coγ射线照射后细胞内活性氧(ROS)含量。结果 MTT实验结果显示6,0Coγ射线照射后继续培养72h,3种细胞的存活率均随照射剂量的增加而下降,具有良好的剂量-效应关系(r+/+=-0.976、r-/-=-0.977、roe=-0.982,P均<0.05);相同剂量中,细胞存活率polβ-/-polβ+/+>polβoe(P<0.05)。结论 60 Coγ射线引起的细胞死亡可能与ROS的产生及其导致的DNA氧化损伤有关,polβ高表达具有更强的DNA氧化损伤的修复作用,从而减少细胞死亡,增加细胞的辐照抗性,而polβ缺陷则可能增加细胞对60Coγ射线的敏感性。
- 崔杰徐昕杨沫陈晨赵巍吴媚张遵真
- 关键词：活性氧DNA聚合酶Β敏感性
