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李琪: 作品数：10 被引量：17H指数：3; 供职机构：安徽医科大学更多>>; 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”教育部科学技术研究重点项目安徽省高校青年教师科研资助计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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tau蛋白的过度表达对非神经源细胞生长与分化的影响被引量：10: 2008年; 目的观察外源性tau蛋白的过度表达对非神经来源的293T细胞生长与分化的影响。方法构建带有GFP标签的表达人全长tau蛋白的质粒pEGFP-C1-tau,并转染293T细胞,通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察及免疫印迹等方法,观察tau的过度表达对293T细胞的生长与分化的影响。结果在瞬时转染的293T细胞中可以观察到,GFP全细胞分布,而GFP-tau主要定位于胞质。tau的过量表达可引起细胞形态改变,如突起减少或消失,细胞分裂受阻及多核巨细胞的形成等,最后导致细胞死亡。在稳定转染细胞中,tau蛋白的过度表达可诱导细胞出现凋亡的特征性改变。结论tau蛋白在非神经源性细胞中的过度表达可影响细胞的分裂、分化,并诱导细胞凋亡,提示tau蛋白有直接的细胞毒作用。; 李琪冯利杰王海萍梁燕沈玉先; 关键词：TAU蛋白转染细胞形态

ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：3: 2009年; 目的制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法判断融合蛋白的表达量及纯度。将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株。体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定。结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5～1×10-7之间,且均有较好的特异性。结论已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础。; 王法财王海萍李琪方圣云沈玉先

泛素连接酶Hrd1介导的tau蛋白降解: 神经细胞中的tau蛋白异常聚集是许多神经退行性疾病共有的病理特征，例如在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)，进行性核上瘫(progressivesupranuclear palsy)及第17号染...; 李琪; 关键词：TAU蛋白神经细胞神经退行性疾病; 文献传递

人tau融合蛋白的原核表达及纯化: 2007年; 目的构建人His-tau和GST-tau融合蛋白表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达及纯化。方法以质粒pEGFP-tau为模板通过PCR扩增出人tau全长cDNA,并构建到原核表达载体pET28a和pGEX-5X-1中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE染色及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。分别使用His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B与融合蛋白结合来纯化融合蛋白。结果成功构建原核表达质粒pET28a-tau和pGEX-5X-1-tau并在大肠杆菌BL21中诱导其大量表达。经His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B纯化后,可以得到较纯化的His-tau和GST-tau融合蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗tau单克隆抗体(tau-5)所识别的融合蛋白分子量与理论值相近。结论构建了人tau两种原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该蛋白,为进一步的tau与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础。; 梁燕王海萍冯利杰李琪沈玉先; 关键词：质粒

内质网应激在脑损伤中的作用: 内质网(endoplasmic reticulum,ER)是蛋白质修饰、折叠和钙贮存的场所。ER 内未折叠或错折叠蛋白的积聚和钙平衡失调均可导致 ER 应激(ER stress)。早期的 ER 应激或未折叠蛋白反应(un...; 梁燕李琪沈玉先; 关键词：内质网应激未折叠蛋白反应神经退行性疾病; 文献传递

泛素连接酶Hrd1介导的tau蛋白降解促进细胞存活: 目的调查泛素连接酶(E3)Hrd1是否影响 tau 蛋白的代谢,并进一步观察 Hrd1促进 tau 蛋白降解后细胞活性是否改善。方法构建人全长的 tau 蛋白真核表达质粒并转染293T 细胞,观察 tau 蛋白的过度表达...; 李琪梁燕沈玉先; 关键词：泛素连接酶 TAU 神经退行性疾病; 文献传递

tau蛋白的直接细胞毒作用被引量：1: 2007年; 结果发现,在瞬时转染的293T细胞中GFP全细胞分布,而GFP-tau主要定位于胞浆。tau的过量表达可引起细胞形态改变,如突触减少或消失,细胞分裂受阻及多核巨细胞的形成等,最后导致细胞死亡。在稳转细胞中,tau蛋白的过度表达可诱导细胞出现凋亡的特征性改变。在培养细胞的上清液中加入纯化的tau蛋白,可直接诱导细胞的凋亡。在原代培养的神经细胞中加入纯化的tau蛋白还可以上调内质网应激标志性蛋白CHOP的表达。上述结果提示,非修饰的tau蛋白有直接的细胞毒作用。; 李琪梁燕张晶晶冯利杰王海萍沈玉先; 关键词：TAU 基因表达融合蛋白细胞毒性

tau蛋白的直接细胞毒作用: tau 蛋白过度磷酸化形成的神经元纤维缠结在 tau 蛋白病中广泛存在。本研究利用基因重组技术,将人的全长 tau 基因插入到 pEGFP-Cl 表达载体中,构建成带有绿色荧光蛋白(GFP) 标签的 tau 融合蛋白真核...; 李琪梁燕张晶晶冯利杰王海萍沈玉先; 关键词：TAU 基因表达融合蛋白细胞毒性; 文献传递

泛素连接酶Hrd1促进α1-抗胰蛋白酶Z型突变体降解及细胞存活: 2008年; 目的：α1-抗胰蛋白酶（AAT）缺乏症是一种常染色体隐性遗传病，其特征是错误折叠的AAT突变体在肝细胞内质网内聚集及血清AAT水平降低，并由此引发肝脏及肺部疾病。AAT的Z型突变（ATZ）是造成AAT缺乏的最常见突变类型。有研究已经证实泛素-蛋白酶体通路参与ATZ的降解。Hrd1是一种定位于内质网膜的泛素连接酶（E3），本文旨在研究Hrd1是否可以通过内质网相关降解通路促进ATZ的降解。; 王海萍李琪孙爱民沈玉君王法财方圣云沈玉先; 关键词：Α1-抗胰蛋白酶突变体降解细胞存活泛素-蛋白酶体通路 Z型

非神经源性细胞中tau蛋白的稳定表达及磷酸化被引量：5: 2007年; 目的建立稳定表达tau蛋白的稳转细胞系，并观察tau蛋白的过度磷酸化对稳转的非神经源性细胞形态和活性的影响。方法构建pEGFP-C1-tau真核细胞表达质粒，建立稳转和表达融合蛋白GFP-tau的293T细胞系，并用不同浓度的蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸（OA）处理细胞以诱导其过度磷酸化，通过荧光显微镜观察细胞形态的变化，用MTT法监测细胞的活性及免疫印迹法检测tau蛋白的表达及磷酸化水平。结果成功地建立了稳定表达GFP-tau蛋白的非神经源性稳转细胞系，该细胞系在稳转后3—4周，细胞生长状态良好，细胞形态和突起生长基本正常。用OA处理后，细胞突起消失、变圆，贴壁性能差，死亡的细胞数量也增多，这些变化随着OA作用时间的延长或浓度的增加更加明显；MTT法显示细胞的增殖活性明显下降；免疫印迹法提示，100nmol／L OA作用8h后，磷酸化tau水平增加。结论对于稳定表达tau蛋白的非神经源性细胞，OA可降低其增殖活性，该作用可能与OA抑制细胞内去磷酸化过程有关。; 冯利杰李琪方辉王海萍粱燕沈玉先; 关键词：过度磷酸化

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