周进明
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 局部皮肤免疫联合化疗治疗恶性黑色素瘤临床分析
- 周进明孙君重李晓松郝怡鑫付艳赵晖杜楠
- 化疗诱导Egr-1启动子调控造血因子基因表达的实验研究
- 2008年
- 目的探索化疗药物诱导Egr-1启动子调控GM-CSF基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用。方法将GM-CSF和EGFP双顺反子基因重组于携带Egr-1调控元件的pCIneo真核表达载体,构建Egr-EG载体,通过脂质体介导转染骨髓基质细胞HF-CL,即获得HFCL/EG细胞。MTT法测定顺铂(DDP)、氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他滨(GEM)和紫杉醇(PTX)对HFCL和HFCL/EG细胞存活率的影响,并计算各药物对细胞的IC50值。倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测化疗药物诱导后绿色荧光蛋白(EGFP)表达阳性的HFCL/EG细胞百分率。ELISA法检测活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对化疗药物诱导的Egr-1启动子调控的下游GM-CSF基因表达的影响。观察化疗诱导后HFCL/EG上清对粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。结果成功构建了Egr-Eg载体,其转染细胞HFCL/EG细胞对DDP、5-FU、GEM和PTX有不同的敏感性,且药物对HFCL/EG细胞IC50值均较HFCL组明显增加(P<0.05)。流式细胞仪检测显示DDP、5-FU、GEM和PTX均可以诱导调控Egr-1启动子调控的EGFP表达,HFCL/EG+DDP组、HFCL/EG+5-FU组、HFCL/EG+GEM组、HECL/EG+PTX组绿色荧光阳性的细胞百分率分别为35.06%±0.61%、65.12%±1.10%、44.47%±0.71%、37.56%±0.63%,与HFCL/EG组(10.02%±0.21%)相比明显增加(P<0.05)。化疗药物处理后,HFCL/EG细胞培养上清液中,GM-CSF含量和CFU-GM形成数量较未化疗组明显增高(P<0.05);但加入活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸后,培养上清中GM-CSF含量明显减少(P<0.05)。结论化疗药物诱导的Egr-1启动子调控下游基因表达与活性氧相关,且Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达可能对化疗后的造血损伤具有一定的保护作用。
- 杜楠裴雪涛周进明孙君重李秋文赵晖
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子造血干细胞
- 阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血因子GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血功能恢复的影响被引量：1
- 2009年
- 本研究探讨阿霉素(ADM)诱导早期生长因子(Egr-1)启动子调控的造血因子基因表达对荷瘤小鼠化疗后造血功能恢复的作用。将构建的携带有Egr-1启动子的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内。实验小鼠随机分4组:①ADM诱导的HFCL/EG组(HFCL/EG+ADM组),②ADM诱导的HFCL组(HFCL+ADM组),③单纯输注HFCL/EG组(HFCL/EG组)和④单纯输注HFCL组(HFCL组),每组6只动物。观察外周血象动态改变,用流式细胞术检测eGFP+人基质细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测GM-CSFmRNA及其蛋白的表达。结果表明:化疗组与未化疗组相比外周血白细胞降低,而且下降幅度较低,恢复加快;各组间CFU-GM数无显著性差异;肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达不相关;ADM处理后实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞;RT-PCR和Western blot显示GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强。结论:ADM诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法具有化疗后促进造血恢复作用。
- 杜楠裴雪涛周进明孙君重赵晖付艳郝怡鑫
- 关键词：启动子GM-CSF阿霉素
- 辐射与化疗诱导Egr-1启动子调控GM-CSF基因表达的实验研究
- 2009年
- 目的探讨辐照与阿霉素诱导早期生长反应因子（Egr-1）启动子调控造血生长因子基因表达对造血损伤的恢复作用。方法构建携带Egr-1启动子且下游连接GM-CSF和EGFP基因的真核表达载体（Egr-EG）；脂质体介导转染人骨髓基质细胞系HFCL；经^60Coγ源辐照2.5Gy或3μmol/L的阿霉素处理后，采用FACS检测转染细胞绿色荧光蛋白的表达，N-乙酰半胱氨酸（活性氧抑制剂）鉴定辐照及阿霉素处理诱导Egr-1调控下游基因表达的特异性；采用ELISA和RT-PCR检测辐照或阿霉素对HFCL／EG细胞GM-CSF蛋白及mRNA表达的影响；观察辐照及阿霉素处理后的细胞上清对CFU-GM形成的影响。结果在辐照和阿霉素处理的HFCL／EG细胞中均显示EGFP和GM-CSF表达较未处理组明显增强（t=5.11，P〈0.01），未处理组EGFP^＋细胞占1.2％，阿霉素组EGFP^＋细胞占15.2％，辐照组EGFP^＋细胞占18.2％；N-乙酰半胱氨酸明显减少辐照和阿霉素处理后细胞的绿色荧光蛋白表达强度，两组间差异无统计学意义（P〉0.05）；辐照和阿霉素处理组细胞上清促进CFU-GM增殖作用较未处理组明显增强（t=4.37，P〈0.01）。结论辐照和阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达可能对其所致的造血损伤具有一定的恢复作用。
- 杜楠裴雪涛周进明孙君重付艳赵晖
- 关键词：电离辐射阿霉素粒-巨噬细胞集落刺激因子
- 氟脲嘧啶诱导Egr-1启动子转录调控Flt3配基的基因表达
- 2009年
- 目的:探讨5-氟脲嘧啶(5-Fu)诱导Egr-1启动子调控造血生长因子基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用。方法:构建携带Egr-1调控序列启动的Flt3配基(FL)和EGFP双顺反子基因pCIneo真核表达载体(Egr-EF);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL并称为HFCL/EF;采用流式细胞术和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;采用RT-PCR、Western blot和ELISA检测5-Fu对HFCL/EF细胞FL表达的影响;流式细胞术检测经5-Fu处理的HFCL/EF细胞上清对CD34+细胞和CFU-GM的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性。结果:构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体(Egr-EF);经5-Fu处理后HFCL/EF细胞培养上清液较未加5-Fu组的FL含量明显增高并且对CD34+细胞和CFU-GM具有较强的扩增作用(P<0.01);在5-Fu处理的HFCL/EF细胞中,EGFP活性、FLmR-NA和FL蛋白表达增强,而且,N-乙酰半胱氨酸明显减少FL含量。结论:5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因子基因表达对化疗药物处理后的造血损伤具有一定的恢复作用。
- 杜楠裴雪涛周进明孙君重郝怡鑫
- 关键词：EGR-15-氟脲嘧啶FLT3配基骨髓基质细胞
- 化疗诱导Egr-1启动子调控的GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血损伤的作用
- 2008年
- 背景与目的:电离辐射可以通过产生活性氧激活Egr-1启动子高度保守序列CArG,Egr-EG为构建的上游含Egr-1调控序列CArG元件,启动TNF或GM-CSF的pcIneo表达载体,该机制可用于辐射所致的造血损伤或治疗肿瘤。化疗药物通常是通过产生活性氧和DNA损伤导致肿瘤细胞死亡,我们假设化疗药物可以产生活性氧,因此,化疗可以诱导Egr-1启动子调控下游造血因子基因表达,这种化疗诱导基因疗法针对化疗所致的造血损伤具有恰当的治疗效果。本文旨在探讨化疗诱导Egr-1启动子调控的造血因子基因表达对化疗后造血恢复的作用。方法:将构建的携带有早期生长因子(Egr-1)启动子的GM-CSF cDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP) cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入荷瘤(黑色素瘤)小鼠体内,对其实施5-FU化疗,观察外周血象动态改变、人基质细胞植入检测、外源基因eGFP、GM-CSFmRNA、蛋白表达以及对CFU-GM的增殖作用的检测。结果:实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组间CFU-GM差异无显著性,肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达无关:5-FU处理后72 h实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞,RT-PCR和Western印迹显示GH-CSF mRNA和G-CSF蛋白表达增强。结论:5-FU诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法对化疗后造血损伤具有促进造血恢复作用。
- 杜楠孙君重赵晖付艳李晓松周进明王希良
- 关键词：启动子化疗
