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钟辉: 作品数：81 被引量：190H指数：8; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划山东省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

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恶性疟原虫多抗原表位基因表达载体的构建及其在大豆幼胚中的表达被引量：4: 1999年; 疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。AWTE基因编码恶性疟原虫多种抗原表位基因 ,CTB基因编码霍乱毒素 B亚基 ,是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。把 AWTE- CTB融合基因构建到植物表达载体 p BVG- ny2上 ,通过基因枪导入法 ,转化大豆幼胚分生组织。 X- glu染色检测到 GUS基因的表达 ;抗原性分析实验结果表明 ,特异表达的融合蛋白可与 CTB和 AWTE抗体结合 ,具有 CTB抗原性。这个实验结果。; 李霞钟辉李军陈杭马清钧; 关键词：疟疾

鲑鱼降钙素与骨生长肽融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：7: 2002年; 降钙素 (Calcitonin ,CT)和骨生长肽 (Osteogenicgrowthpeptide ,OGP)是两种治疗骨质疏松症的药物 ,设想通过这两种基因的融合表达来达到治疗骨质疏松的目的。体外合成OGP和sCT的基因 ,经过DNA体外重组构建酵母表达质粒 ,实现了在毕赤酵母中的表达 ,通过纯化后进行氨基酸N端测序 ,证明表达的蛋白序列正确。; 钟辉彭英芳李平李平袁志刚马清钧; 关键词：鲑鱼降钙素融合基因骨质疏松症毕赤酵母基因克隆

ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用被引量：3: 2009年; 目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。; 马红芳何湘王可王芳焦新安张艳红章金刚钟辉; 关键词：丙肝病毒报告基因

The Hepatitis B Virus X Protein disrupts innate immunity by downregulating mitochondrial antiviral signaling protein: Previous studies show that both HAV and HCV disrupt innate immunity by cleaving the mitochondrial antiviral si...; 钟辉; 文献传递

RNF34调控天然免疫的初步研究: 2017年; 目的研究环指蛋白34(RING finger protein 34,RNF34)对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID和pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒,并在HEK293T细胞中瞬时表达;利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒(SeV)和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒;发现在SeV刺激下,RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用,RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性,RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。; 朱永杰张萍萍周鹏宇王鹏皓陈健康田茵茵何湘钟辉; 关键词：NF-ΚB 干扰素Β

疟疾多抗原表位基因表达载体的构建及其在烟草中的表达被引量：15: 1999年; 本文首次报道疟疾多表位抗原基因在转基因烟草中表达成功。疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。过去的研究表明，ＡＷＴＥ基因编码的疟疾多种抗原表位是有效的抗疟表位，ＣＴＢ基因编码的霍乱毒素Ｂ亚基，是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。本研究把ＡＷＴＥ－ＣＴＢ融合基因构建到植物表达载体ｐＢＶＧ－ｎｙ１上，采用共转化的方法，通过基因枪导入转化烟草。经ＰＣＲ扩增ＡＷＴＥ－ＣＴＢ基因片段检测，证实了疟疾多表位抗原基因在转基因烟草中的整合。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳结果显示转基因烟草中表达了ＡＷＴＥ－ＣＴＢ融合基因分子量相同的特异蛋白。经抗原性分析实验和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹实验结果表明，特异表达的融合蛋白可与ＣＴＢ和ＡＷＴＥ抗体结合，具有ＣＴＢ和ＡＷＴＥ抗原性。; 李霞陈杭李晓东钟辉钟辉马清钧; 关键词：疟疾转基因烟草

一种新型疟疾核酸疫苗生产工艺的初步研究被引量：5: 2005年; 疟疾是危害人类健康和生命的主要寄生虫病之一,寻找合适的疫苗一直是该病控制的重要方向。在疟疾核酸疫苗方面作了系列尝试,取得较好研究结果,并最终构建了以胸腺嘧啶合成酶基因为筛选标记的、具有大肠杆菌平衡致死特征的新一代疟疾核酸疫苗pThyAAWTE。对影响工程菌高密度发酵的几个因素进行了分析,所优化程序可使工程菌发酵密度达OD60 0 60以上;此外,还对质粒初步纯化过程中的几个重要参数进行了分析,初步结果表明,悬浮液体积(ml) :菌体湿重(g)在2 :1以上,对质粒的得率没有明显影响;碱裂解时间在一定范围内不影响质粒的质量;合适的悬浮液体积/裂解液/中和液比能明显提高质粒产量;用优化程序所提取的质粒其产量与试剂盒提取的量相当。为pThyAAWTE的大规模纯化打下了基础。; 胥全彬任冽张艳红黄维靳彦文李晓荣李平钟辉刘传暄马清钧曹诚; 关键词：疟疾核酸疫苗生产工艺高密度发酵

pcD-awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件的探索被引量：2: 2007年; 探索pcD—awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件，为该疫苗制备工艺的建立做准备。通过摇瓶和5L发酵罐水平，考察不同培养基组成及来源、补料变化和温度转换对工程菌生长及质粒产量的影响。结果表明在TB培养基组分中添加Mg^2＋、微量元素复合物、核苷等成分，补料培养基由葡萄糖代替甘油，对数中期温度由37％升至42℃等条件，能提高工程菌株pcD—awte质粒的产量。在优化的培养条件下pcD—awte质粒产量可达125—130mg／L培养液。; 汪永信钟辉曹诚张艳红张部昌马清钧; 关键词：疟疾 DNA疫苗

雌激素受体α磷酸化位点突变体T224A和S559A的构建及其转录激活活性检测: 2015年; 目的:构建雌激素受体α(ERα)T224A和S559A磷酸化位点突变体载体,在HEK293T细胞中检测其表达及突变体生物活性的改变。方法:以pc DNA3-Flag-ERα为模板,通过重组PCR技术扩增目的基因片段并突变碱基,插入pc DNA3-Flag载体;将构建的质粒转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western印迹检测融合蛋白的表达,采用萤光素酶报告基因方法检测ERα突变体的活性改变。结果:T224A和S559A磷酸化位点突变体在HEK293T细胞中得到表达,相对分子质量为66×103。在无雌激素(E2)时,野生型ERα及T224A和S559A突变体的转录活性分别为空载体的1.94、1.49和1.84倍;在雌激素存在时,野生型ERα活性增强了1.57倍,T224A和S559A突变体活性分别增强了0.54和0.61倍。结论:224位Thr磷酸化修饰对ERα的活性起重要作用,且2个磷酸化位点突变体受雌激素调控减弱。; 陈伟周鹏宇朱永杰马胜利曹叶张萍萍何湘魏从文钟辉吴飞翔; 关键词：雌激素受体Α 磷酸化突变体雌激素转录激活活性

霍乱毒素B亚基与疟原虫多表位构建的DNA疫苗与亚单位疫苗的免疫保护作用研究: 目的:由于疟疾本身的抗原性弱并且不高度变异,给疟疾疫苗的研究带来了很大的困难。我们认为要研制有效的疟疾疫苗必须寻求有效的免疫增强途径,提高机体对抗原的免疫应答水平。我们选用了恶性疟原虫红内期及红外期T、B细胞表位组成的合...; 钟辉曹诚李平张艳红马清钧; 文献传递

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