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何湘: 作品数：69 被引量：135H指数：5; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划山东省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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乙肝病毒感染导致Mrell下调及基因组断裂被引量：3: 2008年; 【目的】乙肝病毒的持续感染与肝细胞癌的发生密切相关。本文探讨了乙肝病毒感染后导致宿主蛋白Mre11的变化,并研究这种蛋白的变化可能导致肝癌发生的机制。【方法】本文通过Western blot检测了乙肝病毒感染HL7702细胞及肝癌组织标本的Mre11蛋白的变化,并且通过RNA干涉的方法干扰了Mre11的表达,用连接介导PCR检测基因组的变化。【结果】本研究发现乙肝病毒感染细胞导致Mre11表达下调,肝癌组织也可以发现Mre11表达下调;下调Mre11表达可以导致细胞基因组的断裂增多。【结论】HBV感染导致Mre11表达下调导致基因组不稳定,这可能与HBV感染导致细胞恶性转化相关。; 刘煜杨小丽侯宁波赵帆张艳红袁静何湘钟辉; 关键词：乙肝病毒肝细胞癌 DNA损伤修复

一种预防接种车: 本实用新型公开了一种预防接种车。包括依维柯客车本体；该客车本体内包括相对设置的若干个座椅和至少一个折叠座椅；所述座椅沿所述客车本体的车头至车尾的方向上的后面设有水槽和接种台，所述水槽与所述接种台相连接；所述折叠座椅沿所述...; 黄留玉刘京梅刘治平王萍郭金鹏孙走南何湘苏文莉杨益

人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选被引量：1: 2008年; 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。; 贾永侠赵帆马红芳李力黄蓓郑子瑞宋婷魏从文何湘张艳红钟辉; 关键词：MAVS 转录活性

线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达: 2008年; 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。; 倪才飞赵帆郑子瑞黄蓓马红芳李力宋婷魏从文何湘张艳红钟辉; 关键词：MAVS IFN-Β 荧光素酶报告基因

肠道病毒71型的GFP示踪系统及其应用: 本发明公开了一种肠道病毒71型的GFP示踪系统及其应用。本发明所提供系统为重组肠道病毒71型，是将野生型肠道病毒71型基因组RNA进行替换或插入得到的重组病毒；所述替换为将所述野生型肠道病毒71型基因组RNA中的片段a中...; 常国辉刘京梅孙走南杨益苏文莉唐玥何湘

蛋白质磷酸化修饰的研究进展被引量：76: 2009年; 蛋白质磷酸化是最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式,它参与和调控生物体内的许多生命活动。通过蛋白质的磷酸化与去磷酸化,调控信号转导、基因表达、细胞周期等诸多细胞过程。随着蛋白质组学技术的发展和应用,蛋白质磷酸化的研究越来越受到广泛的重视。我们介绍了蛋白质磷酸化修饰的主要类型与功能、磷酸化蛋白质分析样品的富集及制备、磷酸化蛋白的鉴定及磷酸化位点的预测、蛋白分离后磷酸化蛋白的检测,及蛋白质磷酸化的分子机制,并综述了近年来国内外的主要相关研究进展。; 姜铮王芳何湘刘大伟陈宣男赵红庆黄留玉袁静; 关键词：磷酸化修饰

肠道病毒71基因修饰系统的建立及其应用: 本发明公开了一种肠道病毒71型突变株及其应用。本发明所提供肠道病毒71型突变株，是将野生型肠道病毒71型基因组RNA中编码2C蛋白的第25位氨基酸Ile的密码子替换为编码Val的密码子后得到的重组病毒。实验证明，本发明以...; 常国辉刘京梅孙走南杨益苏文莉唐玥何湘

ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用被引量：3: 2009年; 目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。; 马红芳何湘王可王芳焦新安张艳红章金刚钟辉; 关键词：丙肝病毒报告基因

CARP1基因克隆、表达及其泛素连接酶活性的鉴定: 2013年; 目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-κB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)引起的NF-κB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFα引起的NF-κB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。; 张睿苏文莉孙走南杨益刘京梅何湘; 关键词：CASPASE 真核表达泛素连接酶细胞生长

RNF34调控天然免疫的初步研究: 2017年; 目的研究环指蛋白34(RING finger protein 34,RNF34)对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID和pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒,并在HEK293T细胞中瞬时表达;利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒(SeV)和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒;发现在SeV刺激下,RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用,RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性,RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。; 朱永杰张萍萍周鹏宇王鹏皓陈健康田茵茵何湘钟辉; 关键词：NF-ΚB 干扰素Β

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