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HBV RNA上La protein结合位点的缺失对自身稳定性的影响: 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA上的突变所造成HBVRNA上Laprotein结合位点的缺失对HBVRNA在宿主细胞内稳定性的影响,评价HBVDNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点.方法...; 林园园林菊生王晓燕谢娜周秀敏宋宇虎; 关键词：肝炎病毒突变; 文献传递

乙型肝炎病毒RNA上La蛋白结合位点缺失对S基因mRNA稳定性的影响被引量：4: 2006年; 目的研究乙型肝炎病毒(HBV):RNA上La蛋白结合位点的缺失对S基因mRNA在细胞内稳定性的影响,评价HBV RNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点。方法构建HBV突变载体, 使其转录出来的HBV RNA缺失La蛋白结合位点;计算机预测突变后这个位点所在的HBV RNA片段的二级结构;将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染HepG2细胞;半定量逆转录聚合酶链反应法检测HBV S基因的 mRNA,酶联免疫吸附法检测乙型肝炎表面抗原。结果酶切鉴定和测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的HBV突变载体——pHBV—mLa;突变后的HBV RNA二级结构同突变前的比较,完全改变;转染细胞后半定量逆转录聚合酶链反应法检测发现,突变后HBV S基因的mRNA水平显著降低(t'=12．703,P<0．05);酶联免疫吸附法检测发现突变引起乙型肝炎表面抗原表达明显下调(f=4_4．648,P<0．01)。结论HBV RNA上La蛋白的结合位点以及局部特殊二级结构的形成,影响着自身转录后的稳定性,对于HBV的生命周期至关重要。; 林园园林菊生谢娜周秀敏宋宇虎; 关键词：LA蛋白

人遗传印记基因PEG10重组真核表达质粒的构建及其在转染细胞株中的表达被引量：5: 2007年; 目的构建人遗传印记基因PEG10的全长表达基因质粒,观察PEG10的过表达对人正常肝细胞及其非肝脏来源的对照细胞的作用。方法将PEG10基因全长cDNA直接连入真核细胞表达质粒pcDNA3．1hisC中,以脂质体介导的方法将该表达质粒pcDNA3．1hisC-PEG10转染入人正常肝细胞及其对照细胞,采用RT-PCR、Western blot、MTT、TUNEL等方法分析PEG10基因在正常人肝细胞及其对照细胞中的表达和功能。结果限制性酶切及DNA测序结果均说明所构建质粒为PEG 10全长表达质粒。该质粒经过稳定筛选后稳定表达于细胞内,促进人肝细胞的生长,抑制其凋亡,但对非肝脏来源的对照组细胞没有明显影响。结论PEG10全长表达质粒的构建为进一步研究PEG10基因的效应和机制提供了有利的工具,研究结果显示PEG10基因可以促进人正常胚肝细胞增殖并抑制其凋亡,但对非肝脏来源的对照组细胞人胚肾细胞株293细胞没有明显效应。; 张琼谢娜王晓燕常莹林园园林菊生; 关键词：转染质粒

APOBEC3G体外抗乙型肝炎病毒的研究被引量：1: 2007年; 目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide like3G,APOBEC3G)(也称为CEM15)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用及其机制。方法脂质体转染pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis、pcDAN3.1/His-C进入HepG2.2.15细胞,转染后,RT-PCR证实转染基因的表达,Western Blot证实蛋白的表达。通过ELISA方法检测细胞上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)及乙型肝炎e抗原(HBeAg),RT-PCR分析APOBEC3G对HBV mRNA转录的影响。结果APOBEC3G基因与蛋白在HepG2.2.15细胞都有表达,与空质粒转染组相比,pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis转染组HBsAg含量下降70.38%,HBeAg含量下降62.88%,未转质粒细胞为空白对照组。结论APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗乙肝病毒感染。; 韩思源林菊生林园园常莹姚津剑; 关键词：乙型肝炎病毒 HEPG2.2.15细胞 APOBEC3G 抗病毒作用

重型乙型肝炎预后荟萃分析被引量：4: 2011年; 目的荟萃分析重型乙型肝炎预后的影响因素。方法检索截至2009年11月公开发表的重型乙型肝炎相关的论文,提取其中反映预后相关的临床资料,包括总胆红素(TBil)、凝血酶原活动度(PTA)、甲胎蛋白(AFP)、肌酐水平、临床生化指标及肝性脑病情况。用随机模型分析以标准化均数差(SMD)和相对危险度(RR)为效应量进行异质性检验和统计量合并。结果 13项研究共包含重型乙型肝炎患者2429例。生存组和死亡组中,TBil、PTA、AFP、肌酐水平在荟萃分析中均存在明显差异(P<0.001)。研究中除肌酐和肝性脑病异质性差异无统计学意义,其他预后变量存在较大异质性,且异质性不能通过荟萃回归和分层降低。结论在荟萃分析中TBil、PTA、AFP、肝性脑病及肌酐在重型乙型肝炎病程中具有良好的预后判断价值。肝性脑病和肌酐水平在各研究中对预后判断的结果一致。然而TBil、PTA、AFP对预后的判断仍然存在较大的异质性。异质性可能来源于研究样本排除标准的差异,对于重型乙型肝炎的诊断需要一个纳入标准(PTA≤40%,TBil>10倍正常值上限),同时也需要相关的排除标准。这将对预后判断的准确性和诊断模型的效能有重要价值。; 彭新国姚津剑于伟玲刘丽凤常莹林园园林菊生; 关键词：预后因素

乙型肝炎病毒核心蛋白c／e1表位处TC标签的基因标记对S和e抗原表达的影响: 2009年; 目的研究乙型肝炎病毒核心蛋白c／e1表位处TC标签的基因标记对S和e抗原表达的影响，探索TC标签标记HBV病毒体的可行性。方法以含有1．3倍HBV基因组的载体为模板，在HBVC基因中插入编码TC标签的碱基序列，得到重组的突变型HBV载体，其编码的核心蛋白的c／e1表位处嵌入了TC标签。将野生型和突变型HBV载体分别瞬时转染HepG2细胞，Western blot检测野生型和各种TC嵌合型核心蛋白的表达，酶联免疫吸附法分析病毒S和e抗原的表达。多组间比较用单因素方差分析。结果Western blot显示各种嵌合型核心蛋白在细胞内成功表达，并且同野生型蛋白的表达水平无显著差别，酶联免疫吸附法检测表明各组细胞S和e抗原表达水平没有明显差别。结论HBV核心蛋白c／e1表位处TC标签的基因标记不会明显影响突变HBV载体表达病毒蛋白。; 林园园程晓明宋宇虎常莹姚津剑林菊生

乙型肝炎病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：10: 2006年; 目的研究乙型肝炎病毒(HBV)启动子(含增强子)调控下的增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 报告基因在肝癌细胞中的表达。方法用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出HBV的4个启动子,载入 T载体,测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1,构建出HBV不同启动子调控的EGFP基因表达载体,经酶切、测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将4种构建好的载体转染肝癌细胞株H e p G 2,用倒置荧光显微镜观察各重组体转染细胞中EGFP的表达。结果各目的片段测序正确并成功插入表达载体中, 转染了各质粒的阳性细胞克隆均可检测出E G F P的表达,不同启动子调控下的蛋白表达量有所不同。结论 H B V启动子调控下的E G F P报告基因能够在肝癌细胞中特异表达,不同启动子表达效率之间存在一定的差异性,从而为肝脏疾病的基因治疗提供了一个新的选择。; 谢娜王晓燕张琼林园园林菊生; 关键词：启动区增强型绿色荧光蛋白

La蛋白结合位点缺失的HBeAg mRNA在细胞内的稳定性: 2009年; 目的观察乙型肝炎病毒e抗原mRNA(HBeAg mRNA)上La蛋白结合位点的缺失对其细胞内稳定性的影响,从而进一步研究这个位点在乙肝病毒生命周期中的作用。方法针对HBeAg mRNA上La蛋白结合位点,在HBV DNA水平上利用PCR定点突变技术,构建突变型HBV载体,使其转录出来的HBeAg mRNA缺失La蛋白结合位点,将其命名为pHBV-mLa;应用脂质体将突变型HBV载体瞬时转染HepG2细胞,同时将转染了野生型HBV载体的细胞作为对照组;在各组中,用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测HBeAg mRNA,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中HBeAg。结果酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的突变型HBV载体—pHBV-mLa。转染后半定量RT-PCR检测发现,突变后HBeAg mRNA水平明显低于未突变的对照组,ELISA检测发现突变组中HBeAg表达下调。结论HBV-DNA上引入的突变可以破坏HBeAg mR-NA上La蛋白结合位点,影响HBeAg mRNA在细胞内的稳定性。HBeAg mRNA上La蛋白结合位点对乙肝病毒生命周期至关重要。; 林园园程晓明黎培员常莹宋宇虎林菊生; 关键词：LA蛋白稳定性

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