杭赛宇
- 作品数：11 被引量：16H指数：3
- 供职机构：苏州大学医学部生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国防基础科研计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 共刺激分子B7-H3与糖基化相关性的初步探讨被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨共刺激分子B7-H3与N-乙酰氨基半乳糖转移酶之间的相关性。方法:采用RT-PCR的方法检测同一细胞系上B7-H3和N-乙酰氨基半乳糖转移酶(T1-T7)的表达,从而探讨它们之间可能的相关性。结果:成功地检测到了B7-H3与N-乙酰氨基半乳糖转移酶(T1-T7)表达的差异性和一致性。结论:共刺激分子B7-H3和N-乙酰氨基半乳糖转移酶(T1-T7)在T1、T2存在可能的结合点,为进一步的研究提供了线索。
- 蒲仁芳马震宇杭赛宇周迎会吴士良
- 关键词：B7-H3
- 花粉、中药、西药(D860)对糖尿病小鼠血糖、血脂影响的对比研究
- 本文进行了花粉、中药、西药对糖尿病小鼠血糖、血脂影响的对比分析。文章使用腹腔一次性注射四氧嘧啶,制备糖尿病小鼠，分为生理盐水对照组、花粉组、中药组及西药四组并分别灌胃后0、3、7、24小时尾部取血,分别进行血糖及血脂测定...
- 蒋滢孔庆胜杭赛宇
- 关键词：植物花粉糖尿病治疗
- 文献传递
- 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测
- 2006年
- 目的:以人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)为研究对象,利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌(E.Coli)BL21中原核表达其编码序列,并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法:首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,形成重组表达质粒pGEX-5X-3/T2。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,测序鉴定后转化BL21,异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导后,表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白。对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖(G lutath ione-Sepharose)4B亲和层析柱进行纯化。然后根据ppGalNAc-T2的催化功能,设计底物,建立酶促反应体系,利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活分析。结果:成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3/T2,通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达,利用亲和层析得到纯化的酶蛋白,并经W estern印迹得以验证。反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰。结论:成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3/T2,ppGalNAc-T2全长编码序列被成功表达、纯化及复性,检测到具有酶活性。
- 贾伟杭赛宇史宁周迎会吴士良
- 关键词：原核表达GST融合蛋白
- 人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究
- 2006年
- 目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论:各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化。
- 杭赛宇吴士良
- 关键词：结构域系统进化树
- 多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在SGC7901细胞中同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊(英文)被引量：4
- 2009年
- 多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)在高尔基体中催化粘蛋白型O-糖基化的第一步.首先进行了人ppGalNAcT2多克隆抗体的制备和鉴定,进一步通过对分离的亚细胞结构进行蛋白质印迹分析,免疫细胞化学后共聚焦显微镜观察此抗体和两个高尔基体标记GS28(顺面高尔基体的分子标志)和TGN38(反面高尔基体的分子标志)来研究ppGalNAcT2在SGC7901细胞株中的亚细胞定位.结果表明:约有60%的ppGalNAcT2信号和GS28共定位,大约36%的ppGalNAcT2信号和TGN38共定位.约有34%的TGN38和ppGalNAcT2信号重叠,而约38%的反面高尔基体标志和ppGalNAcT2重叠.结论是:在SGC7901中,ppGalNAcT2同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊中,实验证实了在高尔基体中进行粘蛋白型O-糖基化的起始反应.
- 周迎会杭赛宇仇灏贾伟徐岚姜智吴士良
- 关键词：高尔基体
- 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族在不同发育阶段的小鼠脑中的mRNA表达差异
- 目的:为了观察三个不同发育阶段的小鼠脑中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide: N-acetylgalactosaminytransferase,ppGalNAc-T)的表达差异,以探讨多肽:N-乙...
- 胡鹤娟杨静杭赛宇吴士良
- 关键词：小鼠RT-PCR
- 文献传递
- 大鼠4-1 BBLcDNA的克隆、分析及染色体定位
- 2005年
- 目的克隆、分析并染色体定位肿瘤坏死因子配体超家族(Tumor Necrosis Factor Superfamily,TNFSF)成员4-1BBL分子。方法在对小鼠、人4-1BBL mRNA进行生物信息学分析的基础上,采用PCR扩增、T载体克隆测序等实验技术,并用软件对基因进行了拼接、序列分析及同源性比较,同时通过荧光原位杂交(FISH)技术对该基因进行了染色体定位。结果首次获得了具有完整开放阅读框的大鼠cDNA,GenBank登录号为No.AY259541,通过同源性比较分析,证明该基因与小鼠高度同源,编码区的核苷酸序列与小鼠、人的同源性分别为88%、37%。推导出的大鼠4-1BBL蛋白质由308个氨基酸分子组成,分子量为33469d,胞外区有三个潜在的N糖基化位点:AA138,AA160和AA292,是典型的Ⅱ型糖蛋白,与小鼠、人在氨基酸水平的同源性分别为83%、31%,其中胞质区为76%、32%,跨膜区为45%、40%,胞外区为87%、28%。该基因定位于大鼠染色体9q1(GenBank Uni-Gene登录号为No.Rn.46783)。结论大鼠4-1BBL胞内区的“SDAA”可能发挥着TNF家族中具有逆信号的其他成员的胞内区酪氨酸激酶Ⅰ磷酸化位点“SXXS”的作用。大鼠4-1BBLcDNA的成功克隆与定位为探讨4-1BBL在免疫共刺激中的作用机制以及TNF分子的进化研究打下了基础。
- 董秋明马力杰杭赛宇高磊张学光
- 关键词：4-1BBLCDNA克隆染色体定位
- 全反式维甲酸对HL60细胞株三种糖基转移酶家族表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的从mRNA水平检测HL60细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(polypeptide:Nacetylgalactosaminytra -nsferases,ppGalNAcTs)、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶家族(UDP-N-acetylglucosamine:beta-galactose betal, 3-N-acetylglucosaminyltransferases,β3GnTs)及O-连接乙酰氨基葡萄糖转移酶家族(O-linked GlcNAc transferase,OGnT)的表达情况,研究全反式维甲酸(All-transretinoic acid,ATRA)培养对不同糖基转移酶表达水平的影响。方法采用Real time RT- PCR方法从mRNA水平上研究ppGalNAcTs、β3GnTs、OGnT的表达以及加入ATRA后表达水平的变化,用3H掺入试验检测加入ATRA对细胞增殖的影响,流式细胞仪观察细胞周期情况,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化。结果加入ATRA 后HL60细胞株中β3GnT1、ppGalNAcT2表达量急剧增加,细胞阻滞在G2／M期,细胞的生长增殖受到抑制,细胞向粒系分化。结论加入分化诱导剂后细胞发生显著变化,提示β3GnT1、ppGalNAcT2与白血病细胞株的分化可能有一定关系。
- 杨静赵凝郭向红胡鹤娟杭赛宇吴士良
- 关键词：全反式维甲酸糖基转移酶HL60诱导分化
- 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2酵母双杂交载体构建及激活检测被引量：1
- 2005年
- 目的:为探讨O糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用,构建pGADT7/ppGalNAc T2载体,并转化酵母AH109进行激活检测。方法:采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAc T2全长编码序列,亚克隆至酵母双杂交载体pGADT7,醋酸锂法转染酵母AH109,并进行激活检测。结果:酶切图谱分析和基因测序证实pGADT7/ppGal NAc T2载体构建成功。并转化酵母AH109,激活检测呈阴性。结论:成功构建了pGADT7/ppGalNAc T2载体,并进行了激活检测,为进一步研究ppGalNAc T2的功能奠定了基础。
- 沈宏杰杭赛宇孙其昌马珍妮吴士良
- 关键词：酵母双杂交半乳糖转移酶乙酰氨基PCR技术基因测序亚克隆
- 人类多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2抗原表位分析、抗体制备及亚细胞定位
- 为了研究人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)蛋白表达的亚细胞结构定位,制备特异性抗体。我们联合应用了多种方法对多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的二级结构和表面特性进行了细致地分析,发现其优势抗原...
- 杭赛宇胡鹤娟朱燕马震宇闫石吴士良
- 关键词：多肽抗原表位抗体亚细胞定位
- 文献传递
