李新涛
- 作品数：36 被引量：184H指数：9
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划卫生行业科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术文化科学更多>>
- miR-223在肾透明细胞癌中的表达与功能被引量：10
- 2015年
- 目的探讨mi R-223在肾透明细胞癌中的表达与功能。方法用real-time RT-PCR法检测mi R-223在肾透明细胞癌组织和瘤旁组织中的表达以及细胞系中mi R-223的表达量。用transwell迁移实验和划痕实验测转染mi R-223模拟物的786-O细胞的迁徙能力,MTS法测其增殖情况,流失细胞仪分析其细胞周期。并用SPSS统计软件分析其临床数据与mi R-223表达量的关系。结果 mi R-223在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达量高于瘤旁组织和正常肾小管上皮细胞(P=0.0003),其mi R-223的表达量与肿瘤的大小有关,肿瘤直径大于4 cm的肿瘤mi R-223表达量升高(P=0,0028)。转染mi R-223模拟物的786-O细胞transwell细胞迁移数比对照组多(P<0.0001),划痕实验显示实验组愈合能力比对照组快,增殖实验表明实验组增殖速度快于对照组(P=0.006),细胞周期显示实验组细胞G1期减少,S期细胞增加,提示处于增殖的细胞数多(P<0.05)。结论 mi R-223可能起着促进肾透明细胞癌发生发展的作用,可能是抗肾透明细胞癌治疗的新的抗癌靶标。
- 牛少曦马鑫张瑜巩会杰高宇李新涛沈东来王雷姚远新张旭
- 关键词：肾透明细胞癌迁移增殖
- VHL慢病毒表达和干扰载体的构建及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的构建人VHL重组慢病毒表达载体及干扰载体,建立稳定转染细胞株,观察VHL对肾癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法构建p Zs Green1-VHL及p LL3.7-sh VHL重组慢病毒载体,与3质粒包装系统用脂质体法共同转染293T细胞,包装成病毒颗粒,分别感染A498、Caki-1细胞,并进行RT-PCR和Western blot检验细胞中VHL的表达。用MTS法和流式细胞仪检测VHL对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响。结果重组慢病毒载体及稳定转染细胞株构建成功,转染后VHL在细胞中表达明显变化;VHL过表达细胞的增殖速度明显低于各对照组,而凋亡率明显高于各对照组;VHL干扰细胞的增殖速度明显高于各对照组,而凋亡率明显低于各对照组(P<0.05)。结论 VHL对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。
- 沈东来马鑫张瑜高宇李新涛顾良友巩会杰牛少曦张旭
- 关键词：慢病毒载体VHL基因肾肿瘤
- 机器人辅助腹腔镜肾上腺肿瘤切除术不同手术入路疗效对比与典型病例分析被引量：9
- 2017年
- 目的:比较经腹腔入路与经腹膜后入路达芬奇机器人辅助腹腔镜肾上腺切除术的疗效,结合典型病例分析不同手术入路的选择依据。方法:2015年5月~2017年5月在我科接受机器人辅助腹腔镜肾上腺肿瘤切除术的患者共49例,回顾性分析其临床基本资料,比较两组患者在性别、年龄、BMI、手术史、肿瘤大小、手术时间、术中失血量、术后是否留置引流管等方面的差异。结果:两组患者在年龄、性别、BMI、肿瘤直径、手术时间、术中出血量、是否留置引流管等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者既往手术史的差异有统计学意义,对于有同侧腹膜后既往手术史的患者均采用经腹腔入路,而存在上腹部手术史的患者80%(4/5)采用了腹膜后入路(P=0.000)。结论:经腹腔与经腹膜后途径机器人辅助腹腔镜肾上腺肿瘤切除术都是安全可行的,二者之间具有相似的手术效果。根据患者既往手术史以及肿瘤的解剖位置特点合理选择手术入路可降低手术难度,达到最佳治疗效果。
- 倪栋马鑫李宏召唐露高宇李新涛张旭
- 关键词：肾上腺肿瘤切除术手术入路
- 腹腔镜肾部分切除术的多模培训模式被引量：5
- 2016年
- 目的:介绍腹腔镜肾部分切除术的多模培训模式,包括腹腔镜模拟器、动物模型和手术培训三部分,并评价其安全性、可行性和有效性。方法:邀请5名具有初步腹腔镜基本操作技术或没有腹腔镜手术经验的住院医师参与培训,在腹腔镜模拟器、小型猪模型和人体上进行肾部分切除术的模拟训练,收集培训过程中学员完成训练的手术时间,手术数量和围手术期数据并进行评价。结果:5位学员均成功接受所有培训,接受腹腔镜模拟器、小型猪动物模型训练,并最终独立完成4~6例肾部分切除术。所有患者均未中转开放手术,无输血及死亡病例发生,平均热缺血时间分别为29.8、30.8、29.7、32.3、30.0 min,平均手术时间分别为109.2、104.8、115.7、112.8、112.6min。5位学员独立完成手术的手术时间、失血量、术后住院时间和围手术期并发症均差异无统计学意义。结论:该多模培训模式安全可行,效果良好,适合于没有腹腔镜经验和肾部分切除术经验的学员进行学习培训。
- 王保军黄庆波李新涛张旭
- 关键词：腹腔镜手术肾部分切除术
- 人微管蛋白辅助因子A基因真核表达载体的构建鉴定及对肾癌细胞株786—0增殖的影响
- 2014年
- 目的构建含有人微管蛋白辅助因子A（TBCA）的真核表达载体并观察其对。肾癌细胞株786-0增殖的影响。方法构建真核表达载体pcDNA3．0．Flag-TBCA和pCMV-TBCA—IRES—EGFP，并进行酶切、测序检验、脂质体转染细胞后利用Western blot法检测蛋白表达。以四唑氮化合物（MTS）法绘制细胞生长曲线。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3．0-Flag—TBCA和pCMV—TBCA—IRES-EGFP。转染后TBCA在细胞中表达明显升高（P〈0．05）。但在转染后第3、4、5、6天，重组质粒组吸光度值分别为0．52±0．04、0．85±0．04、1．20±0．08、1．61±0．11；与对照组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论TBCA的过表达载体构建成功，但在786-0细胞中过表达TBCA后对并不能对细胞增殖产生明显影响。
- 逄海港张鹏宋尔霖李新涛马鑫张旭
- 关键词：肾癌增殖
- TD—IκBα病毒包装及其对肾癌细胞株ACHN增殖和侵袭的影响被引量：3
- 2014年
- 目的构建pLVX-TD—IκBα—IRES—ZsGreenl慢病毒表达载体及包装病毒，观察稳定转染TD-IκBα对肾癌细胞株ACHN增殖和侵袭的影响。方法从pCFG5-IEGZ—TD—IκBα质粒上获得的目的基因片段克隆入pLVX-IRES—ZsGreenl载体，并进行测序。将慢病毒载体与包装质粒delta8．91和p-VSVG以4：3：2比例共转染293T细胞，收集病毒上清并感染肾癌细胞株ACHN，5d后采用Western blot检测TD-IκBα蛋白的表达，使用四唑氮化合物（MTS）和Transwell侵袭实验方法检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建pLVX—TD—IκBα—IRES—ZsGreenl慢病毒表达载体，包装病毒后成功感染ACHN细胞株，感染组细胞株中的TD—IκBα蛋白显著表达增高。感染组细胞在490nm处吸光度值明显下降（P〈0．05）。细胞迁移和侵袭实验中，相对于阴性对照组穿膜细胞数[（361．400±42．379）个和（328．500±27．031）个]，感染组穿膜细胞数[（252．200±26．142）个和（127．300±35．572）个]显著减少（P〈0．05）。结论成功构建pLVX—TD—IκBα-IRES—ZsGreenl重组慢病毒表达载体并包装病毒，过表达TD—IκBα蛋白可显著降低ACHN细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。
- 李新涛马鑫逄海港高宇范阳张旭
- 关键词：IΚBΑ肾透明细胞癌增殖
- KCNJ5基因148dupT突变对H295R细胞醛固酮分泌的影响
- 2014年
- 目的:研究KCNJ5基因148dupT突变对H295R细胞醛固酮分泌的影响及相关机制。方法:构建KCNJ5基因148dupT突变和非突变型质粒,选取H295R肾上腺腺瘤细胞系和293T人胚肾细胞系,应用jetPRIME转染试剂将突变和非突变以及对照质粒转染H295R细胞系以及293T细胞系,使用DiSBAC2染料检测293T细胞膜电位的变化、放射免疫分析法检测H295R细胞醛固酮的合成以及实时定量PCR检测CYP11B1和CYP11B2基因的表达。结果:148dupT突变型KCNJ5基因转入293T细胞可以导致膜电位去极化;转入H295R细胞可以导致醛固酮分泌增加,和CYP11B1和CYP11B2基因的表达增加。结论:148dupT突变型KCNJ5基因可能通过细胞膜电位去极化使得醛固酮合酶基因表达增加,进而导致H295R细胞醛固酮分泌增多和醛固酮瘤的发生发展。
- 李新涛王保军马鑫吕香君逄海港范阳高宇艾青张旭
- 关键词：醛固酮瘤基因突变
- 后腹腔入路机器人肾部分切除术:手术效果与技术现状被引量：8
- 2016年
- 后腹腔入路机器人肾部分切除术是近几年逐渐发展起来的手术技术。与经腹腔入路相比,经后腹腔入路更适于有腹腔手术史或腹膜炎病史的患者,更方便处理肾脏背侧和上极肿瘤,能够更快更直接的显露肾动脉,从而减少手术时间,同时减少对肠道、肝脏、脾脏等腹腔脏器的干扰和损伤风险。后腹腔入路机器人肾部分切除术结合机器人操作系统和经后腹腔入路两者的优势,并于近5年相关研究报道逐渐增多。随着手术操作经验的积累,后腹腔入路机器人肾部分切除术将成为处理肾脏背侧和上极肿瘤的更优势选择。
- 李新涛张旭吕香君
- 关键词：机器人肾部分切除术
- 双特异性磷酸酶-1过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭的影响被引量：1
- 2015年
- 目的构建携带人双特异性磷酸酶-1(dual specificity phosphatase-1,DUSP-1)基因的过表达慢病毒载体并包装病毒,感染人肾癌细胞株A498后观察DUSP-1的过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭能力的影响。方法从p CMV6-XL5-DUSP-1质粒上获得目的基因片段,采用DNA重组技术将DUSP-1基因插入到慢病毒表达载体质粒Plv-EGFP(2A)Puro中,获得重组plv-EGFP(2A)Puro-DUSP-1载体。重组慢病毒表达质粒及辅助包装质粒p H1、p H2共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒上清并感染肾癌细胞株A498,利用Western blot检测细胞DUSP-1蛋白的表达情况。用MTS法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭能力的变化。结果成功构建携带DUSP-1过表达载体。包装病毒后成功感染A498细胞株,DUSP-1蛋白表达较对照A498细胞株显著上调。重组质粒组细胞在490 nm吸光值明显上升(P<0.05);细胞侵袭试验中,重组质粒组的穿膜细胞数明显高于空载体组(P<0.05)。结论成功构建了人DUSP-1基因的重组慢病毒表达载体p LV-EGFP(2A)Puro-DUSP-1,进行病毒包装后成功培养稳定高表达DUSP-1基因的肾癌细胞株;DUSP-1基因的过表达具有促进肾癌细胞株A498增殖和侵袭的作用。
- 巩会杰牛少曦李世超沈东来顾良友李新涛高宇张瑜马鑫姚远新张旭
- 人微管蛋白辅助因子A基因shRNA表达质粒的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建针对微管蛋白辅助因子A(TBCA)基因的shRNA载体并进行鉴定。方法:针对人TBCA基因mRNA序列,设计合成编码shRNA的两条寡核苷酸链,经退火形成发卡寡核苷酸模板片段,经双酶切克隆至pSilencer2.0-U6-neo和pGCsi-U6-neo-GFP载体,进行酶切测序鉴定,脂质体转染后进行western blot测定。结果:酶切测序证实成功构建干扰质粒,脂质体转染786-0细胞系后24小时可见绿色荧光蛋白。Western blot证实TBCA表达量降低。结论:成功构建了针对TBCA基因shRNA表达载体,为下一步进行RNAi的相关研究奠定了基础。
- 逄海港张鹏宋尔霖李新涛马鑫张旭
- 关键词：SHRNA基因沉默
