方宁
- 作品数：112 被引量：424H指数：12
- 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省科技计划项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 过敏性紫癜患儿外周血免疫学指标变化的意义被引量：21
- 2007年
- 目的探讨过敏性紫癜(HSP)患儿T细胞亚群、免疫球蛋白变化及其临床意义。方法采用全自动生化分析仪和流式细胞仪(FCM)对40例HSP患儿和15例健康对照组儿童测定血清IgA、IgM、IgG、C3和CD3、CD4、CD8、CD19。结果与健康对照组比较,HSP患儿血清IgA、IgM、水平明显增高,而IgG则明显降低(Pa<0.05),外周血CD3、CD4、CD19细胞水平明显降低(Pa<0.05)。结论HSP患儿存在免疫功能紊乱,表现在T辅助细胞功能低下,而体液免疫指标中IgA、IgM及C3异常增高。
- 张义谢新星冒青方宁周华
- 关键词：过敏性紫癜T细胞亚群免疫球蛋白
- 一种体外诱导人羊膜间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法
- 本发明公开了一种体外诱导人羊膜间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，将提取的hAMSCs经含10mmol/L尼克酰胺和N<Sub>2</Sub>补充物的无血清高糖-DMEM诱导培养基培养7天。经本发明方法诱导的hAMS...
- 方宁陈代雄赵玉洁
- 文献传递
- 静脉移植人羊膜间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能被引量：5
- 2013年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假手术组、模型组对照组和hAMSCs移植组,每组12只。成模后1周,移植组经舌下静脉注射2×106BrdU标记的hAMSCs。用超声心动图检查心功能,用HE和Masson染色观察心肌组织病理,用免疫荧光双染色检测hAMSCs在MI区的存活及向心肌细胞分化的标志物。结果 1)移植后1、4和6周,hAMSCs组射血分数和左室短轴缩短率均显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也都明显大于模型组(P<0.01,P<0.05);2)hAMSCs移植后6周,纤维化面积明显少于模型组(P<0.01);3)hAMSCs移植后6周,MI区BrdU阳性细胞表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。结论 hAMSCs静脉移植能改善心肌梗死后心功能和心室重构,在心肌梗死原位可分化为心肌细胞。
- 方宁王钰莹陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞心肌梗死分化心功能
- 人羊膜间充质干细胞对大鼠1型糖尿病模型的疗效及免疫调节作用被引量：6
- 2014年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对1型糖尿病的疗效及免疫调节作用。方法分离培养hAMSCs；建立大鼠1型糖尿病模型，分为正常组、模型组、培养基组、hAMSCs组和胰岛素组，每组6只。hAMSCs组经舌下静脉注射5x10。个hAMSCs，动态监测血糖水平，检测血浆胰岛素浓度，观察胰腺病理变化和hAMSCs在胰腺中的分布，分析hAMSCs表型和淋巴细胞亚群，测定血浆Thl、Th2型细胞因子。结果与模型组比较，hAMSCs组血糖水平明显下降，血浆胰岛素含量增加，胰腺病损程度减轻：移植后6周，hAMSCs组外周血Th1和Th17细胞百分比下降（均P〈0．05），而Th2细胞和FoxP3＋Treg细胞上调（均P〈0．01）；血浆Th1型细胞因子干扰素-1、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素（IL）-2的浓度下降（均P〈0．01），Th2型细胞因子IL4升高（P〈0．05）；hAMSCs组胰腺组织中未见由hAMSCs分化的胰岛素分泌细胞。结论hAMSCs能明显降低1型糖尿病大鼠血糖和减轻胰岛损伤，其作用机制可能主要与上调FoxP3＋Treg有关。
- 蒲莹峰方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞免疫调节
- 一种人羊膜间充质干细胞的分离纯化及鉴定方法
- 本发明公开了一种人羊膜间充质干细胞的分离纯化及鉴定方法，hAMSCs的分离方法为将人羊膜剪成碎片，用EDTA的胰蛋白酶，DNaseI的胶原酶分二步旋转消化，用钢网过滤，收集细胞滤液即为分离的原始hAMSCs；hAMSCs...
- 方宁陈代雄
- 文献传递
- 荧光原位杂交技术在性反转诊断中的应用价值(附3例46,XY性反转女性病例报道)被引量：2
- 2010年
- 目的评价荧光原位杂交技术(FISH)在性反转诊断中的应用价值。方法用常规G显带方法分析3例生殖器发育障碍的社会性别为女性患者的外周血染色体核型,并采用FISH分析其X、Y染色体。结果FISH结果与G显带核型一致,3例患者均为46,XY女性性反转。结论FISH对于性反转颇具诊断价值,对中期分裂相有限及分散不佳的染色体标本均可作出明确诊断。
- 方宁刘祖林万卫红祁莹陈代雄
- 关键词：性反转综合征荧光原位杂交染色体畸变
- HL-60细胞胞质体的制备
- 2013年
- 建立悬浮培养细胞胞质体制备及鉴定方法,为细胞重构奠定基础。采用密度梯度离心法和低速离心法纯化人白血病HL-60细胞,在单独细胞松弛素B(CB)和联合秋水酰碱介导下,分别于34℃和25℃,50%Percoll等密度梯度离心对HL-60细胞进行脱核,然后分别用38%和40%Percoll密度梯度离心纯化胞质体;采用Wright-Giem-sa染色和4,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)/羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染料双染色观察胞质体形态学变化;采用流式细胞术(FCM)检测胞质体表型和线粒体膜电位(MMP)以评价其活性。结果显示,CB联合秋水酰碱介导HL-60细胞脱核率为91.98%±4.29%,明显高于单独CB组(74.95%±3.02%)(P<0.01);34℃组的脱核率和直径≥5μm胞质体比例均明显高于25℃组(P<0.01,P<0.05);38%Percoll密度梯度离心纯化胞质体纯度高于40%Percoll组;纯化的HL-60胞质体表型无明显变化,12h内其活性达80%以上。结果表明,CB联合秋水酰碱介导下50%Percoll密度梯度离心脱核、38%Percoll密度梯度离心纯化、DAPI/CFSE双染鉴定、MMP检测是制备和鉴定悬浮培养细胞胞质体的适宜方案。
- 王丽丽喻皇飞方宁陈代雄
- 关键词：HL60细胞细胞松弛素B
- 小鼠PPARγ2基因表达载体pcDNA3-PPARγ2的转化扩增被引量：1
- 2007年
- 目的对含小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(mPPARγ2)基因载体pcDNA3-PPARγ2进行体外转化和扩增,为基于PPARγ2的相关研究提供高纯度、高丰度的表达载体。方法取pcDNA3-PPARγ2质粒转化DH5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选培养,挑取阳性克隆菌落进行培养后抽提质粒,紫外分光光度计测定提取质粒的纯度和浓度,并取样进行琼脂糖凝胶电泳验证。结果经转化后获得了大量抗氨苄青霉素的阳性克隆菌落,挑取阳性克隆并经培养后提取的pcDNA3-PPARγ2质粒其A260/A280=1.89,浓度为420 ng/μl。结论成功转化并扩增了pcDNA3-PPARγ2质粒,为PPARγ的相关研究提供了高纯度、高浓度的表达载体。
- 张潜章涛方宁陈代雄周岐新
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体Γ质粒转化
- 罗格列酮经PPARγ受体介导HL-60细胞成熟分化被引量：1
- 2009年
- 目的:研究人过氧化物酶体增殖物激活受体γPPARγ)在白血病HL-60细胞分化中的作用.方法:采用Li-pofectamine2000脂质体进行HL-60细胞质粒转染.实验分单纯HL-60细胞培养组,空载体pIRES2-EGFP转染组,10μmol/L罗格列酮干预组和10μmol/L罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组.荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达.流式细胞仪检测转染效率,并对转染细胞成熟粒-单细胞特异性标志CD11b和CD14的表达进行分析.结果:转染的HL-60细胞可见绿色荧光表达,phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染效率为55%.流式细胞仪检测结果表明,罗格列酮干预组和罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组的CD11b+和CD14+细胞检出率均显著高于未转染细胞组与空载体转染组(P<0.05),且罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染具有协同效应;而未转染细胞组与空载体转染组2种表型细胞百分率差异均无统计学意义(P>0.05).结论:罗格列酮可通过激活PPARγ促进HL-60细胞向粒-单细胞成熟分化,有望成为治疗白血病的候选药物.
- 章涛方宁万卫红祁莹刘祖林刘金伟陈代雄
- 关键词：HL-60细胞过氧化物酶体增殖物激活受体Γ罗格列酮
- 人VEGF基因腺病毒表达载体修饰大鼠骨髓间充质干细胞
- 2012年
- 目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因腺病毒表达载体Ad-VEGF转染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的可行性。方法采用贴壁培养筛选法富集大鼠BM-MSCs。将HEK293细胞中扩增并经效价分析后的Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs,通过对细胞转染效率、生长和活力的观察分析,以确定理想的感染复数(MOI)值。结果本实验经HEK293细胞扩增制备的Ad-VEGF的病毒效价达8×108pfu/ml;当MOI值为50时,Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs效率可达最高值53%;而MOI值高于50时,Ad-VEGF转染对BM-MSCs活性抑制明显。结论成功实现Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs,其最适MOI值为50。
- 刘艳枚刘小慧方宁刘金伟章涛
- 关键词：血管内皮细胞生长因子腺病毒骨髓间充质干细胞
