陈代雄
- 作品数：118 被引量：425H指数：13
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：贵州省科技计划项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- HL-60细胞培养上清液对人脐带血单个核细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的白血病细胞能够通过自分泌方式分泌细胞因子而作用于自身,使细胞大量的增殖;白血病细胞所分泌的细胞因子也能作用于人脐带血(UCB)单个核细胞(MNCs)中的CD34+/CD133+细胞亚群使之增殖。关于HL-60细胞(急性早幼粒白血病细胞)培养上清液能否使UCB-MNCs增殖尚未见报道,本实验主要目的是观察HL-60细胞培养上清液对人UCB-MNCs增殖的影响。方法实验分为①有HL-60细胞培养上清液+StemSpanSFEM组;②StemSpan誖SFEM组;③HL-60细胞培养上清液+高糖(HG)-DMEM组;④HG-DMEM组;⑤HL-60细胞培养上清液+低糖(LG)-DMEM组;⑥LG-DMEM组。收分离的人UCB-MNCs按2.5×106/瓶分别接种于6组培养液中,37℃,5%CO2,饱和湿度培养,分别于第3,第6,第9,第12天计细胞总数。结果①培养至第3天,HL-60细胞培养上清液+StemSpanSFEM组和StemSpanSFEM组MNCs数较培养前和其余各组明显升高(均P<0.05),至第9天细胞数维持在较高水平;②HL-60细胞培养上清液+StemSpanSFEM组和StemSpanSFEM组各时点上,前者MNCs数量较后者有所增加,但无统计学意义(P>0.05);③添加HL-60上清的高糖组和低糖组,各时点上的MNCs数均较相应的对照组升高(均P<0.05)。结论 HL-60细胞培养上清液对人UCB-MNCs具有一定的增殖作用,其有效生物活性物质有待进一步研究。
- 郑毅陈代雄
- 关键词：HL-60细胞上清液单个核细胞
- 人胎盘与脐动、静脉血造血干/祖细胞归巢相关粘附分子表达的研究
- ＜正＞目的比较胎盘组织与脐动、静脉血中造血干/祖细胞（HSPCs）含量及CD34+细胞表面归巢相关粘附分子表达的差异性,以评价其归巢能力。方法采用机械法制备人胎盘组织单个细胞悬液。用流式细胞术分析胎盘组织及脐动、静脉血有...
- 龚芳泽陈琦陈代雄苏蕊方林
- 文献传递
- 人羊膜上皮细胞静脉移植治疗大鼠心肌梗死被引量：2
- 2012年
- 背景:人羊膜上皮细胞在体外适当诱导条件下可分化为心肌样细胞,可望成为细胞心肌成形术的种子细胞,但在心肌梗死原位是否能分化成心肌细胞值得探讨。目的:探讨人羊膜上皮细胞移植在心肌梗死原位的分化及对心肌梗死后心室重构和心功能的影响。方法:用胰酶消化分离人羊膜上皮细胞,行流式细胞仪检测和免疫组化染色以鉴定其表型特征。结扎SD大鼠左冠状动脉前降支以建立心肌梗死模型,实验分为人羊膜上皮细胞移植组、模型组及假手术组,人羊膜上皮细胞移植组于造模后1周经舌下静脉移植Brdu标记的人羊膜上皮细胞。移植后1,4,6周采用超声心动图检查心功能变化,应用苏木精-伊红和Masson染色观察心肌重构的变化,以免疫荧光双染色法检测人羊膜上皮细胞在心肌梗死区的植活与分化。结果与结论:①所分离的人羊膜上皮细胞表达CD29、CD166、CD73和CK19,不表达CD44、CD34、CD45、CD80、CD86和HLA-DR。②人羊膜上皮细胞移植后6周,心肌梗死区仍可见Brdu标记的阳性细胞,表达心肌特异蛋白连接蛋白43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。③移植组大鼠左心室纤维化程度明显低于模型组。④移植组大鼠射血分数、左室短轴缩短率显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也显著大于模型组(P<0.05)。提示人羊膜上皮细胞在心肌梗死原位可分化为心肌细胞,可减缓心室重构并改善心脏功能。
- 王钰莹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜上皮细胞心肌梗死分化心功能干细胞
- 人羊膜上皮细胞有向心肌样细胞分化的特性被引量：21
- 2008年
- 目的:通过体外诱导分化实验,评价人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力。方法:实验于2005-09/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成。①对象:经产妇知情同意,无菌采集健康足月剖宫产胎盘6份,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:采用机械法将羊膜从胎盘组织上剥离,D-Hank’s液冲洗后剪成碎片,加入含有0.2g/L乙二胺四乙酸的0.5g/L胰蛋白酶溶液,离心、消化、过滤,收集滤液,加入胎牛血清终止消化,重复消化2次。合并3次消化所得的细胞悬液,离心后将细胞沉淀悬浮于L-DMEM培养基中,按1.25×108L-1密度接种,常规培养3d后更换培养基,待细胞达80%～90%融合后用胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化,终止后离心弃上清,细胞沉淀用培养基重新悬浮,按1×107L-1密度传代。③实验评估:用流式细胞仪鉴定人羊膜上皮细胞表型;使用10μmol/L5-氮杂胞苷和1mmol/L抗坏血酸磷酸盐诱导第2代人羊膜上皮细胞,免疫荧光染色法检测诱导后细胞中特异蛋白结蛋白和α-辅肌动蛋白的表达,RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA-4和心肌特异性收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA的表达。结果:①人羊膜上皮细胞的免疫组化特征:人羊膜上皮细胞几乎不表达CD44,不表达波形蛋白,表达角蛋白19。②人羊膜上皮细胞α-辅肌动蛋白和结蛋白的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达肌系细胞标志α-辅肌动蛋白和结蛋白。③人羊膜上皮细胞Nkx2.5、GATA-4和α-肌球蛋白重链mRNA的表达:人羊膜上皮细胞经诱导分化后,表达心肌特异性转录因子Nkx2.5 mRNA和GATA-4 mRNA,心肌特异的可收缩蛋白α-肌球蛋白重链mRNA未见表达。结论:通过胰蛋白酶消化法分离获得的人羊膜上皮细胞具有向心肌样细胞分化的特性,可能成为细胞心肌成形术的候选供体细胞。
- 张路方宁陈代雄刘祖林万卫红刘金伟章涛
- 关键词：人羊膜上皮细胞心肌样细胞诱导分化
- 人胎盘CD133^+细胞具有LTC-IC集落启动细胞特性被引量：2
- 2009年
- 本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期培养体系中,以检测测试细胞中长期培养启动细胞(LTC-IC)的发生率及其增殖分化能力。结果表明:人胎盘CD133+细胞群中含有LTC-IC,其发生率为1/645;LTC-IC具有增殖分化为粒-单集落形成单位(CFU-GM)和混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;在所有LTC-IC阳性孔中,产生CFU-GM的孔占总阳性孔的71.4%,产生CFU-GM和CFU-Mix的孔占总阳性孔的28.6%。结论:人胎盘组织CD133+细胞群中存在LTC-IC,并具有造血早期祖细胞集落形成能力。
- 刘虹麟陈代雄方宁章涛刘祖林刘金伟万卫红祁莹
- 关键词：CD133^+细胞胎盘
- 一氧化氮合成酶mRNA在正常大鼠肾组织中表达的研究被引量：1
- 2001年
- 目的探讨正常大鼠肾组织一氧化氮合成酶mRNA(NOSmRNA)表达的特点。方法采用组织细胞原位杂交及图像分析技术 ,对正常大鼠肾组织中eNOS、nNOS及iNOSmRNA表达的定位及含量进行了检测 ,同时测定肾组织NOS总活性。结果eNOS、nNOS及iNOS在正常肾组织中均有表达 ;eNOS和nNOS主要分布于肾小球及血管内皮 ,其中eNOS表达最丰富 ,髓质明显多于皮质 ;iNOS含量较低 ,且仅分布于皮质远、近曲小管上皮。结论生理情况下 ,肾组织cNOS的表达量主要决定于eNOS的表达 ,其高表达对维持肾脏正常功能具有重要作用。
- 冯进梁国标沈寅初阎勇陈代雄
- 关键词：一氧化氮合成酶原位杂交MRNA肾组织
- 燃煤型砷中毒患者外周血淋巴细胞表型特征及临床意义被引量：4
- 2008年
- 目的探讨燃煤型砷中毒患者免疫功能改变及其规律，为肿瘤风险评估提供依据。方法70例患者均系贵州省黔西南州燃煤型砷中毒高发区既往经临床及实验室确诊的燃煤型砷中毒病例，其中男性44例。女性26例．年龄24-71岁，平均年龄41岁。接病程及是否癌变分为4组：〈10年组，23例；10～19年组，21例；≥20年组，20例；癌变组（病程≥20年），6例。对照组为健康职工和大学生自愿者，26例。采静脉血，流式细胞仪分析各组人群外周血淋巴细胞亚群CD3^＋（总T细胞）、CD3^＋CD4^＋（诱导性／辅助性T细胞）、CD3^＋CD8^＋（抑制性／细胞毒性T细胞）、CD19^＋（B淋巴细胞）和CD56^＋CD16^＋（自然杀伤细胞，NK）细胞组成比例，并对淋巴细胞膜人类白细胞组织相容性抗原-DR（HLA—DR）、细胞表面抗原（CD）25和CD38分子表达率进行检测。结果〈10年组、10～19年组、≥20年组和癌变组人群外周血CD3^＋细胞百分率分别为（63．76±9．32）％、（55．63±12．97）％、（51．00±12．23）％、（49．83±9．89）％，均低于对照组[（68．10±8．62）％]，组间比较差异有统计学意义（F=12．862，P〈0．05）。CD3^＋CD4^＋细胞比例上述各组分别为（31．35±6．62）％、（28．38±8．66）％、（24．13±6．46）％、（19．17±4．96）％，明显低于对照组[（34．28±7．32）％]，组间比较差异有统计学意义（F=10．455，P〈0．05）。≥20年组和癌变组CD19^＋细胞百分率[（9．00±5．32）％、（9．00±3．29）％]低于对照组和〈10年组[（11．80±3．43）％、（12．35±4．53）％]，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；其余各组之间两两比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。癌变组淋巴细胞CD25和CD38表达率[（17．96±4．98）％、（41．38±8．54）％]明显高于对照组[（13．10±3．38）％、（28．60±5．51）％]，组间�
- 方宁章涛万卫红胡锡阶祁莹张信江陈代雄
- 关键词：砷中毒淋巴细胞亚群
- 子宫内膜腺癌细胞系的凝集素受体表达
- 2001年
- 目的观察子宫内膜腺癌细胞系 (JEC)凝集素受体的表达。方法用ABC免疫组化技术检测JEC瘤源细胞第 72代、第 2 75代及裸鼠移植瘤细胞的WGA、ConA、PSA、PNA、PHA、DBA、LCA、SBA、USA、BSL、RCA、SJA等 12种凝集素受体。结果JEC的不同代次及裸鼠移植瘤细胞的 6种凝集素(WGA、ConA、PSA、PHA、RCA、LCA)受体呈阳性反应 ,而对PNA、DBA、SBA、UEA、BSL和SJA则呈阻性。结论JEC12种凝集素受体的显色反应是稳定的 ,并不因培养、冻存、传代及异种移植等因素影响而发生改变。
- 刘祖林刘金伟陈代雄吴中明
- 关键词：免疫组织化学子宫内膜癌
- 人胎盘造血干/祖细胞及淋巴细胞亚群表型的研究被引量：13
- 2004年
- 目的 探讨人胎盘组织中是否含有造血干 祖细胞 (HSPC) ,并分析其淋巴细胞亚群的表型特征。方法 将新鲜胎盘制成单个细胞悬液 ,用流式细胞仪分析其有核细胞中HSPC、淋巴细胞及其亚群的表型特征 ,并用流式细胞术 (FCM)或MiniMACS分选胎盘CD34 + 细胞。结果 胎盘CD34 + 细胞百分率是脐带血的 8.8倍 ,CD34+ CD38- 细胞和CD34+ CD38+ 细胞百分率分别为脐带血的 4 .6倍和 11.9倍 ;FCM分选胎盘CD34+ 细胞的回收率和纯度分别为 (6 3.0 5± 10 .14 ) %和 (86 .39± 11.2 7) % ;胎盘中的淋巴细胞总数、T细胞 (CD3+ CD2+ )、B细胞 (CD1 9+ )、Th(CD3+ CD4+ )细胞及Th Ts比值均明显低于脐带血 ,而CD8+ CD2 8- T抑制细胞则明显高于脐带血。结论 人胎盘富含HSPC ,在胎儿期具有重要的造血功能 ,可望成为HSPC移植的重要资源。CD8+ CD2 8- T抑制细胞可能在胎 母免疫耐受中起重要作用。
- 陈代雄方宁刘祖林万卫红祁莹刘金伟肖建辉章涛
- 关键词：人胎盘组织淋巴细胞亚群造血祖细胞
- 大鼠失血性休克和回输血后重要器官组织脂质过氧化及腺苷酸代谢变化被引量：2
- 1994年
- 作者观察到大鼠失血性休克早期各脏器（小肠、肺、肝）ＭＤＡ含量变化不显著，甚或有减少（心、肾）；回输血后除肺外，其它脏器ＭＤＡ含量均显著增加。心、肝、肾组织ＡＴＰ及能荷回输血后仍低于对照组；ＳＯＤ、ＣＡＴ预处理后各脏器ＭＤＡ含量均显著减少，心、肝、行组织ＡＴＰ、能荷显著升高。结果提示：失血性休克回输血后多个器官组织氧自由基产生增加，能量代谢恢复亦发生障碍。ＳＯＤ、ＣＡＴ治疗可降低组织脂质过氧化反应，促进能量代谢的恢复。
- 黄茸耿则智陈代雄王力飞吴芹
- 关键词：出血性休克过氧化脂质腺苷酸
