宋广忠
- 作品数：20 被引量：34H指数：3
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- 结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的表达、纯化及其免疫反应性分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌rpstS1-hspX（rph）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）-rpstS1-hspX[pET-23b（＋）-rph]，表达、纯化rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白，并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将PstS1和HspX编码基因通过多肽接头（GSGSG）的DNA序列进行连接，构建融合基因rph。将融合基因定向克隆人原核表达载体pET．23b（＋），构建重组原核表达质粒pET-23b（＋）-rph。将重组质粒转化大肠杆菌E-coli BL21（DE3）pLysE感受态细胞，IPTG诱导融合蛋白表达。SDS—PAGE和Western印迹法鉴定其表达情况。用镍离子鳌合亲和层析柱纯化融合蛋白，Western印迹法初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因rph及其原核表达载体pET-23b（＋）-rph构建成功。融合蛋白rPH主要以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为51000，表达量约占菌体总蛋白的23％。经亲和层析后得到了纯度达92％的融合蛋白。Western印迹证实融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫反应。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-rph，获得了rPH融合蛋白，为rPH融合蛋白在结核病诊断中的应用提供了依据。
- 宋广忠石君帆泮结超漏磊君李召东
- 关键词：结核分枝杆菌融合基因融合蛋白纯化免疫反应性
- 结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的制备及其血清学诊断价值被引量：4
- 2010年
- 目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,评价rEC诊断的特异性及灵敏度.结果 rEC融合蛋白在大肠埃希菌中以可溶性非包涵体形式表达,表达浓度为0.19 mg/mL.rFC检测抗结核抗体在PPD阳性健康人群中的特异性为100%（30/30）,在痰涂片或细菌培养阳性和两法均阴性的结核病患者中灵敏度分别为75.56%（34/45）和67.3]%（35/52）.结论 结核分枝杆菌rEC融合蛋白以可溶性形式高效表达,具有较强的免疫反应性和较高的血清学诊断价值.
- 石君帆宋广忠泮结超漏磊君杨明瑾李召东
- 关键词：血清学诊断
- 结核分枝杆菌rESAT6-CFP10和rPstS1-HspX融合蛋白的血清学诊断价值
- 2013年
- 目的 探讨结核分枝杆菌rESAT6-CFP10（rEC）和rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白用于结核病血清学诊断的价值.方法 以rEC和rPH融合蛋白为抗原,用金标免疫渗滤法（DIGFA）检测370份血清中的抗结核抗体,其中肺结核患者血清131份,非结核肺病患者血清114份,健康人群血清125份.结果 rEC和rPH融合蛋白单一或联合检测肺结核患者血清抗结核抗体的的灵敏度分别为70.23％、71.76％和84.73％.联合检测的灵敏度显著高于rEC或rPH单一检测,且差异有统计学意义（x2=1.181,P＜0.01 ;x2=0.036,P＜0.05）.3种方法用于检测非结核肺病患者和健康人血清的特异性差异均无统计学意义（x2=0.527、0.097,P＞0.05）.结论 rEC和rPH融合蛋白均有较高的灵敏度和特异性,联合检测有助于进一步提高结核病血清学诊断的灵敏度.
- 李召东宋广忠赵爱桔徐美华张艳范大鹏
- 关键词：血清学
- 结核杆菌可溶性细胞壁抗原与重组38Kd蛋白用于结核病血清学诊断的价值被引量：5
- 2009年
- 目的探讨结核杆菌CW抗原和rTPA38蛋白用于结核病血清学诊断的价值。方法以CW和rT-PA38蛋白为抗原,LAM为对照,用DIGFA检测血清中的抗结核抗体。结果191例肺结核病人血清,用CW、rT-PA38和LAM检测的敏感性分别为78.0%、65.5%和72.3%,特异性分别为95.9%、98.4%和95.9%。统计分析显示CW和rTPA38检测肺结核病人血清抗结核抗体的敏感性差异有非常显著性(χ2=16.230,P<0.01)。两者检测健康人和非结核组病人血清的特异性差异有显著性(χ2=3.972,P<0.05)。检测痰涂片阳性血清86例,发现CW和rTPA38与痰阳的一致率分别为84.9%和69.8%,CW抗原与痰涂片的阳性反应明显高于rTPA38。结论CW抗原有较好的敏感性和特异性,且与痰涂片有较高的符合率,有助于结核病的血清学诊断。
- 张萍曾肖芃丁建祖陈水芳宋广忠楼涤邢文鸾樊晋江
- 关键词：血清学诊断
- 结核杆菌重组抗原的克隆表达及其
- 石君帆曾肖芃宋广忠丁建祖闻礼永杨明瑾漏磊君严晓岚泮结超楼涤
- 简要技术说明本研究通过克隆表达及纯化结核杆菌H37Rv重组抗原及蛋白ESAT-6、Pst-S1、CFP10、KatG、CW、LAM等作为靶抗原，对其免疫原性进行鉴定，检测结核病人TB患者血清，观察其在免疫学诊断中的敏感性...
- 关键词：
- 关键词：抗原
- 结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的制备及其血清学诊断价值被引量：1
- 2012年
- 目的表达、纯化结核分枝杆菌rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白，评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法异丙基．陆D一硫代吡喃半乳糖苷（帆）诱导rPH融合蛋白表达，并用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。Western印迹分析纯化后融合蛋白的免疫反应性。最后用ELISA法检测194份血清抗体样本，其中来源于肺结核患者94份，非结核肺部疾病患者52份，健康对照者48份。结果rPH融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为51000。经亲和层析后得到了浓度为0．62ng／mL，纯度达92％的融合蛋白。Western印迹实验证实纯化后融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫应答。重组蛋白rPH血清检测的灵敏度为77．6％（73／94），特异性为92．0％（92／100）。结论成功表达和纯化了rPH融合蛋白，其用于结核病血清学诊断具有较好的灵敏度和较高的特异性，是ELISA的可靠抗原。
- 宋广忠石君帆李召东杨明瑾漏磊君李涛王秀芝
- 关键词：结核分枝杆菌血清学诊断
- 结核杆菌重组抗原的克隆表达及其免疫学诊断价值的研究
- 石君帆曾肖芃宋广忠丁建祖闻礼永杨明瑾漏磊君严晓岚泮结超楼涤
- 该研究通过克隆表达及纯化结核杆菌H37Rv重组抗原及蛋白ESAT-6、Pst-S1、CFP10、KatG、CW、LAM等作为靶抗原，对其免疫原性进行鉴定，检测结核病人TB患者血清，观察其在免疫学诊断中的敏感性和特异性。并...
- 关键词：
- 关键词：免疫学诊断基因工程
- 结核杆菌H37Rv株重组蛋白的表达、纯化及诊断价值研究
- 目的：表达纯化结核杆菌H37Rv株重组蛋白rESAT-6，用金标免疫渗滤法(DIGFA)评价其用于结核病血清学诊断的价值。
方法：以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，构建原核表达载体pET23b-ESAT...
- 宋广忠
- 关键词：结核杆菌重组蛋白表达血清学诊断结核病
- 文献传递
- 结核分枝杆菌融合蛋白ELISA方法检测被引量：1
- 2012年
- 目的探讨融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa对结核病的血清学诊断价值,并与脂阿拉伯甘露糖抗原(LAM)及结核蛋白芯片方法的检测结果进行比较,评价其应用价值。方法表达、纯化重组目的蛋白,分别以此蛋白和LAM为抗原包板,以酶标抗体为二抗,采用ELISA间接法检测肺结核患者血清、肺外结核患者血清及正常人血清,比较敏感性、特异性等,评价其对结核病的诊断价值。结果融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa、LAM、血清及酶标抗体的最佳工作稀释度分别为1、0.5μg/mL,1∶100、1∶4 000;分别用ESAT6-38kDa-16kDa和LAM检测761份结核病人血清,敏感性分别为76.9%、77.4%,特异性为89.2%、89.5%,差异均无统计学意义;ELISA法检测68份肺结核病血清标本融合蛋白,阳性检出率和阴性符合率与芯片检测结果有极高一致性。结论融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa作为抗原对结核病血清学诊断具有一定应用价值。
- 泮结超石君帆丁建祖漏磊君宋广忠杨明瑾范超明
- 关键词：融合蛋白酶联免疫吸附试验
- 寄生蠕虫副肌球蛋白研究进展被引量：1
- 2006年
- 宋广忠石君帆
- 关键词：副肌球蛋白寄生蠕虫无脊椎动物结构蛋白软体动物节肢动物
