孙建富
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
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- 延边牛UCP1基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织mRNA表达被引量：2
- 2021年
- 旨在克隆延边牛解偶联蛋白-1(UCP1)CDS区序列,利用RT-PCR技术和基因克隆获得延边牛UCP1基因,与其他物种进行同源性比对及构建系统进化树,利用生物信息学方法预测UCP1编码蛋白质的理化性质、潜在的磷酸化位点等性质,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)方法检测UCP1基因在延边牛不同组织的表达丰度。结果显示,延边牛UCP1基因的CDS区全长749 bp,编码249个氨基酸。同源性比对发现延边牛UCP1基因与印度牛同源性为99.47%,系统进化树表明,延边牛与印度牛的亲缘关系最近,和南美羊驼亲缘关系最远。UCP1蛋白缺乏稳定性,脂溶系数是91.53,网状红细胞于体外的半衰期是30 h,总平均亲水性等于0.212,预测其具备一定亲水性。二级结构由α-螺旋(54.03%)、延伸链(12.90%)、无规卷曲(27.42%)和β-转角(5.65%)构成的混合型蛋白。磷酸化位点和糖基化位点分析结果表明,UCP1共有21个磷酸位点,4个潜在的O-糖基化位点,3个N-糖基化潜在位点。UCP1基因的编码产物无跨膜螺旋(TMHs)结构,跨膜螺旋氨基酸残基数量的预测值为19.00857,蛋白质前60个氨基酸的跨膜螺旋数预测值为10.98009,位于膜细胞质侧的总概率为22.995%且属于非分泌蛋白。经实时荧光定量PCR(RT-PCR)可知,延边牛脂肪与小肠内UCP1基因表达水平相对较高,而在肌肉、心脏中的表达水平较低。该试验结果可为进一步研究该基因的功能提供借鉴。
- 孙斌唐琳张军芳孙建富崔岩王英王恩泽李强李香子
- 关键词：延边牛克隆生物信息学
- 共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）的GP5蛋白是PRRSV最重要的结构蛋白之一，可诱导机体产生中和抗体并具有很强的...
- 孙建富
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒GP5蛋白E2蛋白免疫应答
- 文献传递
- PLIN2基因在油酸诱导延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化中的作用机制研究
- 脂滴作为脂肪细胞内的动态细胞器，它由疏水性中性脂核心组成，周围包裹着磷脂单层和围脂滴蛋白。PLIN2作为主要的围脂滴蛋白之一，通过抑制脂肪细胞TAG水解酶与脂滴表面的接触而充当脂滴的屏障保护剂。骨骼肌卫星细胞作为多能干细...
- 孙建富
- 关键词：延边牛骨骼肌卫星细胞细胞分化
- 文献传递
- 基于转录组测序的油酸诱导延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化差异表达基因的分析
- 2021年
- 本研究旨在研究油酸(OA)引起延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化途径的分子调控机制。对从12日龄延边牛中分离得到的骨骼肌卫星细胞进行体外培养,加入不同浓度OA的诱导分化培养液,进行分化处理,试验设1个空白对照组[CON组,5%马血清(HS)],3个不同浓度OA诱导组:OAL组(5%HS+50μmol/L OA)、OAM组(5%HS+100μmol/L OA)、OAH组(5%HS+200μmol/L OA),诱导96 h后,对延边牛骨骼肌卫星细胞进行了转录组测序及分析。结果表明:共得到13951条单基因,对4个组差异表达基因进行比较发现,与CON组相比,OAL组有3412个差异表达基因,OAM组有1045个差异表达基因,OAH组有1428个差异表达基因,各组之间共有278个差异表达基因。GO富集分析显示,差异基因参与了多种生物过程,包括代谢过程、细胞过程、生物调节过程等;在分子功能类别上,大多数的基因功能与结合活性、转录调节活性、催化活性等相关;在细胞组分范畴内,大部分的基因被富集到细胞、细胞器、膜等。KEGG富集分析表明,差异表达基因主要富集通路为单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路、脂肪酸代谢通路、脂肪酸降解通路等。不同浓度OA差异基因荧光定量PCR结果显示,所选的5个差异基因与转录组测序结果基本一致,表明了测序结果的可靠性。本试验完成了OA诱导延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化的转录组测序分析,获取差异基因的功能注释信息,初步揭示了OA诱导牛骨骼肌卫星细胞成脂分化的潜在基因和通路。
- 孙建富孙斌张军芳王英崔岩李强CHOI Seong HSHIN Jong S李香子
- 关键词：转录组测序成脂分化
- 共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答
- 为了获得新型双价'自杀性'DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(...
- 孙建富赵和平李娜孙元夏照和周艳君王煜祁巧芬鲁承仇华吉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒共表达
- 文献传递
- 不同浓度油酸对延边牛骨骼肌卫星细胞成脂转分化的影响
- 2021年
- 试验旨在探究油酸对延边牛骨骼肌卫星细胞成脂转分化的影响。试验设1个空白对照组(CON)和3个油酸(OA)诱导组:50、100、200μmol/L油酸组(OAL、OAM、OAH)。油酸诱导96 h后,通过测定细胞大小及活力评估油酸对细胞的影响。通过油红O染色和测定甘油三酯来验证脂滴的形成,通过实时荧光定量PCR测定相关成肌成脂基因的表达水平来验证脂肪细胞的生成。结果显示,与对照组相比,添加油酸后,延边牛骨骼肌卫星细胞内有脂滴生成,并且脂滴形成量、甘油三酯累积量与油酸呈剂量依赖关系;实时荧光定量PCR测定结果表明,成肌相关因子Pax3、MyoD显著下调(P<0.05),成脂相关因子C/EBPβ、PPARγ显著上调(P<0.05),脂肪酸代谢相关因子SCD显著下调(P<0.05),PLIN2基因显著上调(P<0.05)。综合上述试验结果,用油酸诱导处理延边牛骨骼肌卫星细胞可促进细胞的成脂转分化。
- 孙建富张军芳孙斌王英崔岩李强CHOI Seong HSHIN Jong S李香子
- 关键词：油酸延边牛骨骼肌卫星细胞成脂
- 延边牛PLIN2基因CDS区克隆、生物信息学分析及其表达规律研究被引量：3
- 2021年
- 本研究旨在克隆延边牛脂肪分化相关蛋白PLIN2基因完整CDS区,通过生物信息学分析PLIN2基因CDS区序列和蛋白质基本特性,探讨其在延边牛不同组织及前体脂肪细胞成脂过程中的表达规律。选取18月龄去势的延边牛为研究对象,利用RT-PCR和基因克隆获得延边牛PLIN2基因,与其他物种进行同源性比对及系统进化树构建,利用生物信息学方法预测PLIN2编码蛋白质的理化性质、潜在磷酸化位点及糖基化位点、二硫键分析、信号肽、亚细胞定位、蛋白高级结构,利用实时荧光定量PCR检测PLIN2基因在延边牛不同组织中的表达水平。结果显示,延边牛PLIN2基因CDS长1353 bp,编码450个氨基酸;同源性比对发现延边牛PLIN2基因与黄牛、水牛、绵羊、山羊、野猪、人、小鼠和野鸡的同源性分别为100%、98.7%、96.7%、97.1%、85.5%、86.3%、47.3%和49.1%;系统进化树表明,延边牛与黄牛、水牛的亲缘关系最近,与野鸡的亲缘关系最远。PLIN2蛋白为不稳定蛋白,具有一定亲水性,存在61个潜在的磷酸化位点、16个O-糖基化潜在位点、12个N-糖基化潜在位点,存在2个二硫键,不存在信号肽,主要分布于细胞核中,细胞质和线粒体中有少量分布。PLIN2蛋白高级结构预测该蛋白是由α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角组成,为混合型蛋白,通过无规则卷曲连接,以α-螺旋为主。实时荧光定量PCR结果显示,PLIN2基因在延边牛小肠组织中表达量最高,其次为背最长肌和肾脏组织。本研究结果可为进一步研究PLIN2基因的功能提供借鉴。
- 孙建富崔岩张军芳王英孙斌李强Seong H.ChoiJong S.Shin李香子
- 关键词：延边牛克隆生物信息学分析
- 延边牛骨骼肌卫星细胞的分离培养及诱导分化被引量：2
- 2021年
- 为建立体外研究延边牛肌肉分化及成脂相关调控过程的牛骨骼肌卫星细胞原代细胞模型,试验以12日龄延边牛犊牛背最长肌为材料,利用链霉蛋白酶消化和差速贴壁法对延边牛骨骼肌卫星细胞进行分离纯化,期间观察细胞形态变化;利用免疫荧光染色法对特异性标记基因配对盒基因7(Pax7)、结蛋白(Desmin)和成肌分化抗原(MyoD)进行检测鉴定分离细胞;绘制细胞生长曲线;细胞进行成肌诱导分化,利用荧光定量PCR鉴定Pax7和MyoD基因在诱导前后表达量的变化。结果表明:刚分离的骨骼肌卫星细胞贴壁生长后,细胞由圆形向梭形或纺锤形变化,随着培养时间的延长,细胞开始有序生长;骨骼肌卫星细胞特异性标记基因Pax7、Desmin、MyoD免疫荧光染色均呈阳性表达;骨骼肌卫星细胞符合正常的生长规律;细胞成肌诱导分化后,MyoD、Pax7基因在诱导成肌的各阶段均有表达,表明诱导后骨骼肌卫星细胞处于活化状态并向成肌细胞分化。说明本研究成功分离获得了延边牛骨骼肌卫星细胞,可为研究延边牛肌肉分化及成脂相关调控过程提供体外细胞模型。
- 孙建富张军芳唐琳孙、斌王英崔岩王恩泽李强李香子
- 关键词：延边牛骨骼肌卫星细胞诱导分化
- 共表达PRRSVGP5蛋白和CSFV E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答被引量：6
- 2008年
- 为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。
- 孙建富赵和平李娜孙元夏照和周艳君王煜祁巧芬鲁承仇华吉
- 关键词：共表达
- 延边黄牛DGATs基因克隆、生物信息学及组织表达分析
- 2021年
- 试验旨在克隆延边黄牛二酯酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase,DGATs)两种亚型(DGAT1和DGAT2)的CDS区核苷酸序列,并根据生物信息学对两种亚型的氨基酸序列进行分析,以及探讨其在延边黄牛各组织中的表达规律。采用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分别进行DGATs基因CDS区的扩增、克隆以及其在延边黄牛8个组织中mRNA表达量的检测,利用NCBI中BLAST将其与其他物种进行相似性分析,并构建系统进化树;通过在线工具对其编码蛋白的理化性质、一级结构及高级结构进行预测。结果显示,DGAT1和DGAT2基因CDS区序列长度分别为1470和1086 bp,分别编码489和361个氨基酸;二者均为稳定的疏水性蛋白。DGAT1存在25个潜在的磷酸化位点、1个N-糖基化位点和8个跨膜结构域;DGAT2存在28个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化位点和1个跨膜结构域。二者均不存在信号肽,即不属于分泌蛋白。DGAT1主要是通过α-螺旋和无规则卷曲连接,而DGAT2以α-螺旋、无规则卷曲和延伸链连接为主。延边黄牛DGAT1和DGAT2基因分别在延边黄牛小肠和脂肪组织中表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05)。本试验结果对进一步研究延边黄牛DGATs基因以及探究其在脂肪沉积过程中的作用机制具有重要意义。
- 郭盼盼金鑫孙建富李强李香子严昌国
- 关键词：延边黄牛克隆生物信息学
