刘晓辉
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 轴突导向分子Sema4D参与心肌梗死的基础与临床研究
- 目的:心肌梗死是冠状动脉粥样硬化血栓性疾病导致病人死亡的严重临床急性事件之一，其早期诊断、监控和治疗仍是目前广大临床和基础研究工作者的一项艰巨任务。本研究平台曾报道了Sema4D参与动脉粥样硬化血小板活化和血栓形成过程，...
- 刘晓辉
- 关键词：心肌梗死发病机制
- 脂肪分化相关蛋白促进RAW264.7细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1高表达被引量：2
- 2009年
- 目的观察高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的变化,阐明脂肪分化相关蛋白促进细胞内脂质蓄积的机制。方法构建的pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒。用病毒感染RAW264.7细胞,Puromycin筛选后获得稳定高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞株。应用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测经感染后细胞内脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。并应用阿托伐他汀处理高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞,观察酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的改变。结果用pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒感染RAW264.7细胞后,脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1 mRNA和蛋白表达明显升高,而对照组表达无明显变化。加入阿托伐他汀后,即在去除底物对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达影响的情况下,高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达仍升高。结论高表达脂肪分化相关蛋白可明显上调RAW264.7细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。
- 乔运成黄谙非田国平刘晓辉袁中华
- 关键词：脂肪分化相关蛋白RAW264.7细胞动脉粥样硬化
- Calphostin C抑制脂肪分化相关蛋白诱导的ACAT1表达被引量：1
- 2012年
- 目的我们已经发现adipophilin通过改变乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达来促进细胞内脂质蓄积,病理状态下形成泡沫细胞,成为动脉粥样硬化的始动因素。本研究旨在探讨该过程所涉及的信号通路,阐明adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制。方法通过克隆adipophilin基因,构建逆转录病毒载体pQCXIP-HA-Adi,使用siRNA技术构建pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体,包装病毒后,感染RAW264.7细胞,筛选后获得高或低表达adipophilin的细胞。将该细胞分别与300 nmol/L PKC抑制剂Calphostin C孵育16 h或同时再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,应用RT-PCR和Western blot检测细胞内ACAT1的表达。当低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育时,在不同的时间点取样,RT-PCR和Westernblot检测各时间点细胞内ACAT1的表达。结果高表达adipophilin细胞中ACAT1表达增加,低表达adipophilin细胞中ACAT1表达减少。无论在高或低表达adipophilin的细胞中,Calphostin C能够抑制ACAT1的表达,与不孵育Calphostin C组相比差别有显著性。与ox-LDL孵育使高表达adipophilin的细胞荷脂,同样能够发现Calphostin C抑制ACAT1的表达。低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育1 h后,ACAT1 mRNA开始下降;孵育8 h后,ACAT1蛋白开始下降;孵育16 h后ACAT1 mRNA及蛋白表达均明显下降,与对照组相比差别有显著性。高及低表达adipophilin或负荷脂质状态下,Calphostin C能够时间依赖性的抑制ACAT1的表达。结论 adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制可能是,PKC信号分子作用于adipophilin,并进一步影响ACAT1的表达,最终导致细胞内脂质积聚。
- 袁中华陶媛刘清南黄谙非刘晓辉田国平唐朝克易光辉王佐
- 关键词：脂肪分化相关蛋白乙酰辅酶A
- 脂肪分化相关蛋白通过蛋白激酶C和酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制。方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型。然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达。THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间,使细胞负荷胆固醇酯后,用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达,用PepTag assay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性。在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白,观察脂肪分化相关蛋白的表达,同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化。瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞,复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型。在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下,观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变。结果:与对照组相比,兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加。负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调,蛋白激酶C的活性升高。荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后,可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应,细胞内脂质增多;如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育,可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达,细胞内脂质减少。高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积。加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后,这些作用被减弱。结论:脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性,从而影响细胞内脂质的蓄积。
- 袁中华刘晓辉王中群贾薇Niu Xi-lin黄谙非刘录山易光辉王佐任重唐朝克田国平杨永宗
- 关键词：脂肪分化相关蛋白蛋白激酶C酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶THP-1细胞
