马巧丽
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- pEGFP-N1-omp25荧光真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的克隆布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因并构建荧光真核表达载体p EGFP-N1-omp25,检测其在大鼠脑内的表达。方法根据Genebank中omp25基因的核苷酸序列,设计并合成1对引物,以布鲁氏杆菌总基因组DNA为模板,进行PCR扩增得到omp25基因片段,并将omp25基因片段及质粒p EGFP-N1分别进行进行酶切、体外连接,使其定向重组,构建其重组质粒。将制备的重组质粒经侧脑室注射至大鼠,检测p EGFP-N1-omp25在大鼠脑内的表达。结果 PCR扩增出642bp大小的片段,挑取的LB固体培养基上的单菌落经菌液PCR、酶切、测序表明成功构建了p EGFP-N1-omp25荧光真核表达载体。质粒经大鼠侧脑室注射后,脑组织冰冻切片可见荧光表达。结论采用体外重组技术,成功构建了布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因的真核表达载体,且重组质粒在大鼠脑组织内成功表达。
- 马巧丽刘爱翠王妍柏汪超王振海
- 关键词：布鲁氏杆菌侧脑室注射
- 脑出血合并肺部感染的相关危险因素分析被引量：9
- 2015年
- 目的探讨与脑出血患者并发肺部感染相关的危险因素及其对预后的影响。方法对2012年12月至2013年11月宁夏医科大学总医院收治的304例脑出血患者相关临床资料进行回顾性分析。结果 1304例脑出血患者,并发肺部感染119例(39.14%)。脑出血合并肺部感染的发生与脑出血部位有关(P<0.05)。2单因素分析提示其相关危险因素有年龄、吸烟、意识障碍、吞咽困难、气管插管及气管切开、心脏病、慢性阻塞性肺病、糖尿病及低蛋白血症(P<0.05)。3多因素logistic回归分析结果显示合并吞咽困难、意识障碍、心脏病、糖尿病、吸烟及低蛋白血症为脑出血患者发生肺部感染的独立危险因素。4脑出血并发肺部感染组GCS评分低于无肺部感染组(P<0.05);死亡率和平均住院日高于无肺部感染组(P<0.05)。结论脑出血肺部感染发生与脑出血部位及多种因素相关,积极控制危险因素可降低其发生率及死亡率。
- 刘爱翠马巧丽王妍柏王振海
- 关键词：脑出血肺部感染预后
- 枸杞多糖通过调节热休克蛋白B8介导的自噬改善糖尿病神经病理性疼痛的研究被引量：4
- 2020年
- 目的探讨枸杞多糖(LBP)通过调节热休克蛋白B8(HSPB8)介导的自噬改善糖尿病神经病理性疼痛(DNP)及其作用机制。方法 62只SD大鼠随机选取10只为正常对照组(NC),其余腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组(DM)、LBP组、α-硫辛酸组(LA),每组各15只。每4周检测各组大鼠的机械缩足反射阈值(PWT)和热缩足反射潜伏期(PWL)。治疗12周后,采用Western blot、免疫组织化学法检测腰段脊髓神经中HSPB8、Bcl-2相关永生化基因3(BAG3)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、P62蛋白表达量。结果与NC组比较,DM组在4、8、12周时PWT、PWL降低(P<0. 05或P<0. 01)。与DM组比较,LBP组在4、8、12周时PWT、PWL升高(P<0. 05或P<0. 01)。Western blot法检测显示,与NC组比较,DM组HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ蛋白表达量降低[(0. 17±0. 04)vs(0. 13±0. 04)、(0. 35±0. 11)vs(0. 14±0. 04)、(0. 31±0. 03)vs(0. 17±0. 05),P<0. 05或P<0. 01],P62蛋白表达量升高[(0. 37±0. 03)vs(0. 63±0. 08),(P<0. 01)]。与DM组比较,LBP组HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ蛋白表达量升高[(0. 13±0. 04)vs(0. 21±0. 03)、(0. 14±0. 04)vs(0. 32±0. 09)、(0. 17±0. 05)vs(0. 34±0. 08),P<0. 01],P62蛋白表达量降低[(0. 63±0. 08)vs(0. 39±0. 14),(P<0. 01)]。免疫组织化学法检测显示,与NC组比较,DM组HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ蛋白表达量降低[(168. 24±10. 21)vs(144. 83±14. 53)、(146. 50±13. 48)vs(124. 83±9. 33)、(144. 33±7. 77)vs(127. 83±5. 92),P<0. 01],P62蛋白表达量升高[(146. 67±14. 10)vs(175. 83±9. 22),(P<0. 01)]。与DM组比较,LBP组HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ蛋白表达量升高[(144. 83±14. 53)vs(180. 0±7. 95)、(124. 83±9. 33)vs(155. 0±5. 76)、(127. 83±5. 92)vs(156. 32±5. 56),P<0. 01],P62蛋白表达量降低[(175. 83±9. 22)vs(139. 67±12. 68),(P<0. 01)]。结论 LBP可能通过提高糖尿病大鼠脊髓神经中HSPB8促进自噬缓解DNP。
- 刘思阳马巧丽李艳萍于晓莉张琪
- 关键词：枸杞多糖自噬
- 全基因组测序用于宁夏羊种3型布鲁氏菌毒力基因筛选的研究
- 2014年
- 目的从3株布鲁氏菌分离株的全基因组序列中筛选出可能导致脑损害的关键毒力基因,为后续筛选布鲁氏菌致脑损害毒力基因的研究奠定基础。方法通过BCSP31PCR、传统生化实验对3株分离于布鲁氏菌病患者外周血中的布鲁氏菌进行鉴定分型。利用Illumina Hiseq2000平台对3株布鲁氏菌进行全基因组测序与比较基因组学分析,根据文献报道分析筛选出布鲁氏菌的经典毒力基因,通过检索NCBI核酸数据库查找出所选毒力基因的参考序列,利用所选参考序列分别与3株布鲁氏菌全基因组序列做BLAT比对分析。结果3株布鲁氏菌经BCSP31PCR、传统生化实验鉴定为羊种3型;比较基因组分析显示3株布鲁氏菌与标准株参考序列的同源性比例均达到99.02%。BLAT比对分析发现所选毒力基因wbkA、pgm、hemolysin、hemolysin III和Omp25在这3株布鲁氏菌全基因组序列中的比对分数均达到99%以上。结论本研究所选取的3株羊种3型布鲁氏菌的全基因组中存在经典的毒力基因序列。
- 汪超刘爱翠马巧丽詹军王振海
- 关键词：布鲁氏菌毒力基因全基因组测序
- 羊布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的基因克隆、原核表达及其对小胶质细胞凋亡的影响
- 2017年
- 目的本研究旨在构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp31的原核重组质粒pET-30a-omp31,表达并纯化Omp31融合蛋白,初步探讨布鲁氏菌外膜蛋白Omp31对小胶质细胞凋亡的影响。方法对羊种布鲁氏菌Omp31基因进行PCR扩增,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a上,构建原核表达重组质粒pET-30a-omp31,表达、纯化布鲁氏菌Omp31融合蛋白,并用Omp31融合蛋白刺激小鼠小胶质细胞株BV2,利用流式细胞术分析其对小胶质细胞凋亡的影响。结果经过双酶切及测序验证证明成功构建了Omp31基因的原核表达载体pET-30a-omp31,将其进行蛋白的诱导表达、纯化,得到了较纯的Omp31融合蛋白,其融合蛋白的分子量为31kDa左右。将Omp31蛋白刺激小鼠小胶质细胞,发现不同浓度Omp31蛋白刺激组的细胞凋亡率均低于空白对照组(P<0.05)。结论通过基因克隆技术成功构建了Omp31基因的原核表达载体pET-30a-omp31,并对其进行蛋白诱导表达、纯化、复性后得到了Omp31融合蛋白,Omp31融合蛋白能够抑制小胶质细胞的凋亡。
- 刘爱翠刘静怡马巧丽王振海
- 关键词：布鲁氏菌原核表达载体
- 羊布鲁菌外膜蛋白31诱导不同时间对小胶质细胞自噬的影响被引量：1
- 2017年
- 目的确定羊布鲁菌外膜蛋白31(Omp31)引起小胶质细胞(BV-2细胞)明显自噬的时间,为进一步研究自噬与炎症的关系提供实验依据。方法用0.5μg·mL^(-1)的Omp31分别处理BV-2细胞0、6、12和24 h,收集细胞和上清液;采用透射电镜技术观察各组细胞自噬体;用RT-qPCR技术检测LC3B mRNA的表达;用Western blot法检测兔抗小鼠微管相关蛋白轻链3B(LC3B)Ⅱ蛋白的表达;ELISA法分别检测上清液中TNF-α、IL-6和IL^(-1)0的表达量。结果 0.5μg·m L^(-1) Omp31处理细胞6 h能形成较多自噬体,促进LC3B mRNA表达,且能明显增加LC3BⅡ蛋白的表达量;而处理细胞12、24 h则抑制LC3B mRNA表达;0.5μg·m L^(-1) Omp31能诱导BV-2细胞表达TNF-α、IL-6,且具有时间依赖性,但对IL^(-1)0的表达有抑制作用。结论 0.5μg·m L^(-1)Omp31处理BV-2细胞6 h能诱导小胶质细胞发生明显自噬。
- 王钊马巧丽王妍柏徐婷张吉高菲王振海
- 关键词：外膜蛋白小胶质细胞自噬
- pEGFP-N1-VirB8真核表达载体的构建及其在大鼠脑内的表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统VirB8蛋白的真核表达载体pEGFP-N1-VirB8,研究其在大鼠脑内的表达,为探讨VirB8蛋白的功能及在布鲁氏菌致脑损害中的作用奠定基础。方法利用从羊种布鲁氏菌中提取的总DNA为模板,从中扩增出羊布鲁氏菌VirB8全长序列,并克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEGFP-N1-VirB8真核重组载体。采用注射法将阳离子脂质体和重组质粒pEGFP-N1-VirB8混合后注入大鼠侧脑室,以空白质粒及生理盐水为对照组,转染1周后取脑组织制作冰冻切片,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(greenfluoerscentportein,GFP)的表达,并用Western blot检测融合蛋白的表达。结果经双酶切及测序鉴定证明pEGFP-N1-VirB8载体构建成功;荧光显微镜下观察可见转染pEGFP-N1-VirB8表达载体的大鼠脑组织有GFP的表达;Western blot结果显示,VirB8融合蛋白在大鼠脑组织中表达。结论 pEGFP-N1-VirB8载体构建成功,且阳离子脂质体介导的pEGFP-N1-VirB8重组质粒在大鼠脑内可成功表达VirB8融合蛋白。
- 马晓娟刘爱翠马巧丽王钊王振海
- 关键词：布鲁氏菌绿色荧光蛋白
- 不同剂量枸杞多糖对高糖诱导的RSC96 雪旺细胞增殖的影响比较被引量：1
- 2020年
- 目的研究不同剂量枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的RSC96雪旺细胞增殖的影响。方法分别采用不同葡萄糖浓度(12.5、25、50、100 mmol/L)的杜氏改良Eagle培养基(DMEM)培养大鼠RSC9648h,用四唑盐比色法(MTT)检测不同葡萄糖浓度对RSC96细胞活力的影响。确定下一步实验的正常对照组及高糖组的葡萄糖浓度,在此基础上给予不同剂量(100、200、400、800μg/mL)LBP培养48 h,用MTT法检测不同剂量LBP对RSC96细胞增殖的影响。结果在不同浓度的葡萄糖中,25 mmol/L葡萄糖浓度组RSC96细胞活力最高,100 mmol/L组RSC96细胞活力下降最为显著;与高糖组比较,200、400、800μg/mL的LBP均有促进RSC96细胞增殖的作用,LBP为400μg/mL作用最明显(P<0.05)。结论LBP为400μg/mL对高糖诱导的RSC96细胞增殖作用最佳。
- 刘思阳马巧丽
- 关键词：枸杞多糖高糖细胞增殖
- 脑卒中相关性肺炎病原菌分布及耐药性分析被引量：10
- 2014年
- 目的分析宁夏地区脑卒中相关性肺炎病原学分布情况及耐药特点,为临床合理应用抗感染药物提供参考依据。方法对2012年12月-2013年11月宁夏医科大学总医院收治的133例脑卒中相关性肺炎的痰培养结果进行回顾性分析,分析其病原菌分布及耐药情况。结果 73例患者痰培养结果阳性,培养阳性率为54.89%,共分离出118株致病菌,其中革兰氏阴性菌103株,占87.29%;革兰氏阳性菌8株,占6.78%;真菌7株,占5.93%.排名前三位的致病菌为肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌。肺炎克雷伯菌对亚安培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星高度敏感,而鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌对大部分头孢类抗生素完全耐药。结论肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌为卒中相关性肺炎的主要病原菌,耐药现象普遍,约有一半患者存在混合感染,临床医师用药时应根据其分布特点及耐药性合理选择抗菌药物,延缓细菌耐药性的不断增长。
- 刘爱翠王妍柏马巧丽王振海
- 关键词：卒中相关性肺炎病原菌药敏实验耐药性
- 脑卒中相关性肺炎病原菌分布及耐药性分析
- 目的：分析宁夏地区脑卒中相关性肺炎病原学分布情况及耐药特点，为临床合理应用抗感染药物提供参考依据。方法：对2012年12月至2013年11月宁夏医科大学总医院收治的133例脑卒中相关性肺炎的痰培养结果进行回顾性分析，分析...
- 刘爱翠王妍柏马巧丽王振海
- 关键词：卒中相关性肺炎病原菌药敏实验耐药性
