武远众
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BRD7逆转录病毒稳定系的构建及其功能评价
- 2013年
- 目的探索BRD7(bromodomain-containing protein7)是否具有抑癌基因的功能。方法根据NCBI提供的BRD7基因序列设计特异性引物扩增其编码区序列,经酶切、连接转化后进一步挑取单克隆菌落进行菌液PCR筛选及测序鉴定得到阳性重组质粒。共转293T细胞后收集浓缩病毒上清并感染U2OS细胞,24h后用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达BRD7的细胞株。结果菌落PCR扩增及DNA测序分析证明重组pMSCV-BRD7-GFP质粒克隆成功。GFP绿色荧光结果显示,绝大部分细胞成功整合了pMSCV-GFP或pMSCV-BRD7-GFP外源质粒;Western blotting检测发现感染重组质粒pMSCV-BRD7-GFP的细胞株中BRD7蛋白的表达水平显著高于对照组。功能结果显示,过表达BRD7显著抑制U2OS细胞的增殖,促进下游靶基因p21与MDM2的表达。结论本研究成功构建了针对BRD7基因的逆转录病毒稳定系,且初步证明了BRD7发挥抑癌基因的功能,为下一步深入研究其被调控的机制与功能奠定了基础。
- 张如华胡开顺武远众康铁邦
- 关键词：BRD7病毒载体抑癌基因
- 在乳腺癌中应用CRISPR/Cas9筛选发现一种动粒-微管依赖的Aurora-A抑制剂耐药机制被引量：1
- 2021年
- 背景与目的 Aurora-A(AURKA)在乳腺癌中过表达,并且与乳腺癌患者的不良预后相关。最近,选择性Aurora-A抑制剂alisertib(MLN8237)被证实在多种癌症的单药治疗中表现出令人鼓舞的抗肿瘤活性,但Ⅲ期临床试验却报道了失败的治疗结果,MLN8237未能明显延长患者的生存时间。因此,发现能够增强MLN8237活性的潜在分子,可为获得更好的治疗效果提供合理的联合用药方案。方法本研究中,我们在乳腺癌细胞中用MLN8237对507个激酶进行了系统的合成致死性CRISPR/Cas9筛选,鉴定出了一组与MLN8237具有合成致死活性相互作用、可作为药物靶标的激酶。随后,我们用竞争性生长分析、克隆形成实验、细胞活性分析、凋亡分析和异种移植瘤小鼠模型,评价了Haspin(GSG2)缺失或抑制与MLN8237的协同治疗效果。在机制研究方面,用免疫荧光法检测了微管状态及Aurora-B和有丝分裂着丝粒相关驱动蛋白(mitotic centromere-associated kinesin,MCAK)的定位。结果我们发现,Haspin缺失或抑制可轻微抑制癌细胞生长,却明显增强了MLN8237的细胞杀伤活性。机制研究表明,Aurora-A抑制剂与Haspin抑制剂共同给药,阻碍了Aurora-B与MCAK被招募到着丝粒,这与过度的微管解聚作用、动粒–微管(kinetochoremicrotubule,KT-MT)连接失败及严重的有丝分裂灾难相关。我们进一步发现,MLN8237与Haspin抑制剂CHR-6494联合给药,在降低乳腺癌细胞的活力方面发挥了协同作用,并显著抑制了体外和体内实验中的肿瘤生长。结论以上结果表明,Haspin可作为一个合成致死靶点,CHR-6494可作为一种潜在的联合用药,改善MLN8237对乳腺癌的疗效。
- 陈艾琳文石军刘芳张子健刘美玲武远众何斌严敏康铁邦林永辉王自峰刘强
- 关键词：AURORA-A乳腺癌异种移植瘤
- 新基因hSSB1逆转录病毒载体的构建、鉴定和稳定株的筛选被引量：1
- 2012年
- hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子。根据GenBank提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中,连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hSSB1阳性克隆。将阳性表达的pBABE-hSSB1和包装质粒转染到HEK293T细胞中,产生病毒液。将包装好的病毒感染细胞并用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达hSSB1的细胞株。重组pBABE-hSSB1质粒经双酶切,PCR扩增鉴定及DNA测序分析等方法证实克隆成功。Western blotting检测发现转染重组质粒pBABE-hSSB1的细胞株中hSSB1蛋白的表达水平高于对照组。该研究成功构建了针对hSSB1基因的逆转录病毒载体(pBABE-hSSB1),并得到了稳定高表达hSSB1的细胞株,为深入研究其功能奠定了基础。
- 张如华徐双兵武远众康铁邦
- 关键词：病毒载体
