朱海洋
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒cccDNA巢式-实时荧光定量PCR法的建立及应用被引量：7
- 2011年
- 目的建立检测HBV共价闭合环状(cccDNA)的巢式-荧光定量PCR法,检测外周血单核细胞(PBMC)及骨髓单核细胞(MMNC)中cccDNA。方法根据HBV cccDNA与松弛结构DNA(rcDNA)结构上的差异,设计2对跨缺口的特异性引物及下游的特异性TaqMan探针。根据Mung Bean Nuclease对rcDNA与cccDNA作用的不同,使cccDNA扩增而使rcDNA降解,分别用外引物及内引物进行PCR反应,再用荧光探针进行实时荧光定量PCR,根据阳性参照物,计算出检测标本定量值。结果成功建立了HBV cccDNA巢式-荧光定量PCR的检测方法,线性范围为5.0×102～3.9×107拷贝/ml。用上述方法检测25例慢性乙型肝炎(CHB)及肝硬化血清HBV DNA阳性患者PBMC中cccDNA,7例MMNC中cccDNA,21例健康献血者PBMC cccDNA,骨髓标本中有3例cccDNA阳性,25例外周血标本中有9例cccDNA阳性。结论巢式-荧光定量PCR法可检测乙型肝炎患者PBMC及MMNC中的HBV cccDNA含量。PBMC及MMNC中可检测到HBV cccDNA。
- 许春海李兆申代俊英朱海洋于健武吕淑兰
- 关键词：聚合酶链反应单核细胞
- 单核细胞乙型肝炎病毒cccDNA检测方法及应用价值被引量：7
- 2011年
- 目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA（ cccDNA）的巢式-荧光定量PCR法，检测外周血单核细胞（ PBMC）及骨髓单核细胞（MMNC）中cccDNA。方法 根据HBV cccDNA与松弛结构DNA（rcDNA）结构上的差异，设计2对跨缺口的特异性引物及下游的特异性TaqMan探针。根据Mung Bean Nuclease对rcDNA与cccDNA作用的不同，使cccDNA扩增而使rcDNA降解，分别用外引物及内引物进行PCR反应，再用荧光探针进行实时荧光定量PCR，根据阳性参照物，计算出检测标本定量值。结果 成功建立了HBV cccDNA巢式-荧光定量PCR的检测方法，线性范围为5.0× 10２～3.9×107拷贝/ml。用上述方法检测25例慢乙肝及肝硬化血清HBV DNA阳性患者外周血单核细胞中cccDNA，7例骨髓单核细胞中cccDNA，21例健康献血者外周血单核细胞中cccDNA，骨髓标本中有3例cccDNA阳性，25例外周血标本中有9例cccDNA阳性。结论 巢式-荧光定量PCR法可检测乙肝患者PBMC及MMNC中的HBVcccDNA含量。PBMC及MMNC中可检测到HBVcccDNA.
- 许春海李兆申代俊英朱海洋于健武吕淑兰
- 关键词：肝炎病毒乙型DNA聚合酶链反应单核细胞
