崔荣花 作品数:24 被引量:147 H指数:9 供职机构: 中南大学湘雅医学院附属海口医院 更多>> 发文基金: 海口市重点科技计划项目 海南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
FLAG Pull-down技术筛选人乳腺癌细胞中NGAL相互作用蛋白 被引量:1 2017年 目的构建含有NGAL基因的p3XFLAG-NGAL真核表达载体并对其进行鉴定,获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白。方法提取MCF7细胞中总RNA,反转录为c DNA后采用聚合酶链反应扩增NGAL基因,上下游分别引入NotⅠ和Eco RⅠ酶切位点,双酶切后将其插入p3XFLAG-CMV-14质粒中,构建p3XFLAGNGAL重组质粒,并进行双酶切和测序鉴定。采用脂质体法转染该质粒至MCF7细胞中,经Western blot检测FLAG-NGAL融合蛋白的表达情况。再使用FLAG pull-down技术和蛋白质谱测定获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白。结果经过NotⅠ和Eco RⅠ双酶切及DNA测序验证,本研究成功构建p3XFLAG-NGAL真核表达载体,免疫印迹法证实转染了p3XFLAG-NGAL载体的人乳腺癌细胞MCF7高表达FLAG-NGAL融合蛋白,并利用FLAG pull-down技术筛选出人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白,经蛋白质谱测定为角蛋白-1(Keratin 1,KRT1)。结论成功构建p3XFLAG-NGAL真核表达载体,并获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白KRT1,为下一步研究乳腺癌的发生、发展机制提供新的思路和靶点。 毛山山 程小珍 崔荣花 元建华 王美清关键词:乳腺癌 相互作用蛋白 PD-1抑制剂治疗晚期肺癌的疗效及对患者外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子水平的影响 被引量:15 2021年 目的:探讨PD-1抑制剂治疗晚期肺癌患者的疗效及其对患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子水平的影响。方法:选择2018年8月至2020年12月于海口医院就诊的肺癌患者50例,选取同期体检健康者50例作为对照,免疫组化法检测肺癌组织中PD-1的表达。肺癌患者均接受纳武利尤单抗(nivolumab)或帕博利珠单抗(pembrolizumab)治疗,于治疗前1天、治疗1周期结束、治疗4周期结束时进行静脉血采集,治疗4周期后进行CT或MRI检查评价肿瘤大小,将评价为完全缓解(complete response,CR)、部分缓解(partial response,PR)和疾病稳定(stable disease,SD)的患者归为免疫应答组,评价为疾病进展(progressive disease,PD)的患者归为免疫无反应组。评估PD-1抑制剂治疗对患者外周血中T淋巴细胞亚群(CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞、Treg细胞及Th1/Th2细胞)、NK细胞和细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5)水平的影响。结果:与对照组相比,肺癌患者外周血中CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞、Th1/Th2细胞、IFN-γ和IL-2水平明显下降,而CD8^(+)T细胞、Treg细胞、NK细胞、IL-4和IL-5水平明显升高(均P<0.05);与治疗前相比,治疗1周期和4周期后CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)T细胞水平明显升高,而CD8^(+)T细胞、Treg细胞和NK细胞明显下降(均P<0.05);治疗4周期后,40例入免疫应答组,10例入免疫无反应组,治疗有效率为80%。与治疗无反应组比较,免疫应答组血清CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞水平和Th1/Th2比值明显升高,而CD8^(+)T细胞、Treg细胞和NK细胞水平明显下降(均P<0.05);免疫应答组患者经4个周期治疗后,与PD-L1低表达(<50%)患者(8例)比较,PD-L1高表达(≥50%)患者(32例)血清CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)T细胞水平均明显升高(均P<0.05),而CD8^(+)T细胞、Treg细胞和NK细胞均明显下降(均P<0.05)。结论:纳武利 李兴 马丽娜 李迅 李建旺 崔荣花 张曙波 谢宗宙肝癌患者TACE治疗前后外周血PD-1、PD-L1的表达及临床意义 被引量:11 2019年 目的探讨原发性肝癌患者行肝动脉化疗栓塞术(TACE)前后外周血程序性死亡分子1(PD-1)、配体(PD-L1)的表达及临床意义。方法采集中南大学湘雅医学院附属海口医院28例中晚期肝癌患者(肝癌组)TACE治疗前后外周血及20例健康体检者(对照组)外周血标本,流式细胞仪检测CD4+T、CD8+T细胞及抗原提呈细胞(APC)表面PD-1、PD-L1的表达,并随访PD-1、PD-L1表达与肿瘤分化、疗效的关系。结果肝癌组外周血CD4^+T、CD8^+T细胞及APC表面PD-1、PD-L1表达与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),肝癌组均高于对照组;治疗前后肝癌组外周血CD4^+T、CD8^+T及APC表面PD-L1表达,差异有统计学意义(P <0.05),治疗后较治疗前下降;CD4+T、CD8^+T及APC表面PD-1表达也较治疗前下降,但差异无统计学意义(P>0.05);细胞分化差的肝癌组患者外周血PD-1、PD-L1表达较高;治疗效果差的肝癌组外周血PD-1、PD-L1表达较高。结论肝癌患者外周血PD-1、PD-L1表达升高,治疗前后监测PD-1、PD-L1表达可能预测患者预后状态。 程小珍 李晓东 王顺兰 谢宗宙 毛山山 朱燕兴 崔荣花 王美清KAI1/CD82和P27在胃癌中的表达及临床意义 被引量:5 2019年 目的:研究KAI1/CD82和P27蛋白与胃癌临床病理特征之间的关系。方法:运用免疫组织化学SP法检测58例胃癌组织与23例正常胃组织中KAI1/CD82、P27蛋白的表达。结果:在胃癌组织中KAI1/CD82蛋白和P27蛋白的阳性表达率分别为29.3%、34.4%,在正常胃组织中KAI1/CD82蛋白和P27蛋白阳性表达率分别为90%、85%,两组之间差异均有统计学意义(P<0.05);并且KAI1/CD82蛋白和P27蛋白的阳性表达率在肿瘤的浸润深度、组织的分化程度、临床分期和淋巴结是否转移间差别具有统计学意义(P<0.05);而与年龄、性别无关(P>0.05)。KAI1/CD82与P27蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.286,P<0.05)。结论:KAI1/CD82蛋白和P27蛋白可能参与了胃癌的发生发展过程,联合检测KAI1/CD82与P27可能成为胃癌诊断及预后评估的新的分子标记物。 崔荣花 王美清 毛山山 程小珍 元建华 李兴关键词:KAI1/CD82 P27 胃癌 免疫组化 IEX-1蛋白在胃癌中的表达及其意义 2017年 目的揭示即刻早期反应X-1(IEX-1)蛋白在胃癌组织及细胞系中的表达,探讨其对人胃癌细胞凋亡和增殖的影响。方法采用免疫组织化学法检测100例胃镜活检标本中IEX-1蛋白的表达,用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN28中IEX-1基因和蛋白的表达,同时转染IEX-1的过表达质粒pc DNA3-FLAG-IEX-1和干扰质粒p LL3.7-si-IEX-1,分别采用流式细胞术及四甲基偶氮唑盐比色法检测IEX-1对细胞周期、凋亡及增殖的影响。结果胃癌组织中IEX-1蛋白表达水平高于正常胃组织和慢性胃炎组织(P<0.05),且随着病情进展,IEX-1表达水平有逐渐升高的趋势。相对于人正常胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞MKN28中IEX-1基因和蛋白表达更高(P<0.05)。与对照组相比,IEX-1蛋白表达增高后S期细胞比例升高,G2期细胞比例降低,细胞增殖率升高,凋亡减少(P<0.05),而干扰IEX-1蛋白表达后,G1期细胞升高,G2期细胞比例下降,细胞增殖率下降,细胞凋亡增加(P<0.05)。结论 IEX-1蛋白在胃癌组织中呈高表达,在人胃癌细胞中上调IEX-1蛋白能促进细胞增殖,发挥抗凋亡能力,干扰IEX-1蛋白表达能阻滞细胞周期进程,并诱导凋亡。 毛山山 程小珍 崔荣花 元建华 王美清关键词:胃癌 增殖 凋亡 siRNA沉默livin基因对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶和奥沙利铂药物敏感性的影响 被引量:1 2019年 目的 探讨siRNA沉默livin基因对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)和奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)敏感性的影响。方法 构建含livin-siRNA序列的稳定表达质粒,通过Lipofectamine TM 2000转染至结肠癌CT-26细胞株,转染后筛选出稳定和低表达livin的结肠癌细胞(livin-siRNA组),同时设空白对照组(mock组)和转染阴性对照组(control siRNA组)。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测CT-26细胞中livin的mRNA和蛋白表达;流式细胞术检测各组CT-26细胞凋亡情况;MTT法检测CT-26细胞对5-Fu和 L-OHP 的敏感性。结果 转染livin-siRNA后,CT-26细胞中的livin mRNA和蛋白量较mock组和control siRNA组明显降低(P<0.05);转染48 h后,livin-siRNA组CT-26细胞凋亡率明显高于mock组和control siRNA组(P<0.05)。转染后livin-siRNA组的CT-26细胞较mock组和control siRNA组对5-Fu和L-OHP的敏感性显著增加(P<0.05)。结论 通过干扰RNA沉默livin基因可促进肿瘤细胞凋亡,增加结肠癌CT-26细胞对5-Fu和 L-OHP 药物的敏感性。 元建华 李建旺 张曙波 毛山山 崔荣花关键词:LIVIN基因 结肠癌 5-氟尿嘧啶 奥沙利铂 药物敏感性 CD4+CD25+调节性T细胞对晚期肺癌患者免疫抑制作用的研究 被引量:11 2017年 目的探讨Treg及Th1/Th2类细胞因子在晚期肺癌肿瘤免疫抑制中的作用。方法选取100例初治晚期肺癌患者及50例健康自愿者。采用流式细胞术检测其外周血中Treg、Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2、TNF-a)、Th2类细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)水平,同时分析CD4^+CD25^+Treg与Th1/Th2类细胞因子之间的相关性。结果 (1)晚期肺癌患者外周血中Treg为(11.12±5.83)%,高于健康对照组(7.46±3.07)%,差异有统计学意义(P=0.003);(2)化疗前肺癌患者外周血中Treg为(11.12±5.83)%,明显高于化疗后(6.45±3.74)%,差异有统计学意义(P<0.001);(3)晚期肺癌患者与正常对照组Th1/Th2类细胞因子水平分别为:IFN-γ(8.56±3.62 vs 10.79±3.27,P=0.049)、IL-2(8.48±2.87 vs10.22±4.03,P=0.03)、TNF-a(6.18±2.67vs8.14±2.87,P=0.007)、IFN-γ/IL-4(3.33±1.44 vs 4.09±1.00,P=0.028)、IL-4(3.17±1.19 vs 2.45±0.43,P<0.001)、IL-6(3.88±2.08 vs 2.33±0.88,P<0.001)、IL-10(3.64±1.73 vs2.54±1.08,P=0.008),其中Th2类因子水平明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05);(4)CD4^+CD25^+Treg与Th1类细胞因子IFN-γ、TNF-a、IL-2及IL-6无相关性(P均>0.05);与Th1/Th2(γ=-0.273,P=0.003)呈负相关;与Th2类细胞因子IL-4(γ=0.237,P=0.009)、IL-10(0.626,P<0.001)呈正相关(P均<0.05)。结论晚期肺癌患者CD4^+CD25^+Treg、Th2类细胞因子水平显著升高,Th1类细胞因子水平下降,它们共同导致肿瘤患者免疫抑制及肿瘤进展,监测其水平变化有助于判断肺癌患者疗效、预后,有效调控CD4^+CD25^+Treg及负性细胞因子水平可能是治疗肺癌的一个新策略。 程小珍 谢宗宙 崔荣花 张曙波 毛山山 王美清关键词:肺癌 CD4+CD25+调节性T细胞 TH1/TH2类细胞因子 免疫抑制 吉非替尼对晚期肺癌患者PD-L1、PD-1及Th1、Th17相关指标影响研究 被引量:9 2017年 目的:研究吉非替尼对晚期肺癌患者外周血PD-L1、PD-1及Th1、Th17相关指标的影响。方法:选取晚期肺腺癌患者66例,EGFR基因检测均有突变,按治疗方法不同将其分为对照组33例和观察组33例;对照组进行含铂两药联合化疗,观察组为含铂两药联合化疗加吉非替尼治疗。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测并分析两组治疗前后外周血PD-L1、PD-1及Th1、Th17相关指标变化。结果:治疗前两组患者的外周血PD-L1、PD-1及Th1、Th17相关指标对比无统计学差异(P均>0.05),但治疗后观察组的外周血PD-L1及PD-1均低于对照组,Th1及Th17相关指标也均显著地优于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:吉非替尼对晚期肺癌患者PD-L1、PD-1及Th1、Th17相关指标的影响较为积极,在晚期肺癌患者中的免疫调节作用明显。 程小珍 毛山山 谢宗宙 崔荣花 张曙波 王美清关键词:TH1细胞 榄香烯注射液联合盐酸羟考酮缓释片治疗中重度癌痛的效果及对患者免疫功能的影响 被引量:12 2019年 目的观察榄香烯注射液联合盐酸羟考酮缓释片治疗中、重度癌痛的疗效及对患者免疫功能的影响。方法将120例癌痛患者随机分为联合组(60例)和对照组(60例),分别给予榄香烯注射液联合盐酸羟考酮缓释片和盐酸羟考酮缓释片单药治疗。比较2组患者的镇痛效果、生活质量及免疫功能。结果联合组总疼痛缓解率为91.67%,对照组总疼痛缓解率为78.33%,联合组总疼痛缓解率明显高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组生活质量评分均较治疗前明显升高(P均<0.05),且联合组的生活质量较对照组改善更明显(P<0.05);治疗后2组CD4^+及CD4^+/CD8^+较治疗前显著上升(P均<0.05),联合组的CD4^+及CD4^+/CD8^+明显高于对照组(P均<0.05)。结论榄香烯注射液联合盐酸羟考酮缓释片可以有效地控制中重度癌痛,并能明显改善患者的生活质量及免疫功能。 元建华 廖燕 李建旺 张曙波 毛山山 崔荣花关键词:盐酸羟考酮缓释片 榄香烯注射液 癌痛 免疫功能 选择性COX-2抑制剂塞来昔布与消化道肿瘤的研究进展 被引量:2 2011年 环氧合酶(cyelooxygenase,COX)又称前列腺素过氧化物合成酶,参与了恶性肿瘤发生、发展、侵袭、转移的全过程,目前研究发现COX有3种类型:COX-1、COX-2和COX-3,其中COX-2是一种诱导酶,在大多数恶性肿瘤中均有表达.塞来昔布作为新型选择性COX-2抑制剂,具有抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡的作用.近年来结肠癌、胰腺癌、肝癌等消化系统恶性肿瘤在人群中的发病率有所上升,且呈年轻化趋势,预后差.对肿瘤的靶向治疗有可能实现对消化道肿瘤更为有效的控制,因此进一步研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布与各种消化道肿瘤之间的关系,对肿瘤的治疗和预后有非常重要的意义. 崔荣花 陈剑群关键词:环氧合酶 塞来昔布 消化道肿瘤 抑制剂