刘尊
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒A9株全长L片段cDNA克隆和核苷酸序列测定
- 2001年
- 目的 克隆我国分离的汉坦病毒A9株L片段全长cDNA ,并测定其核苷酸序列。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术分段扩增汉坦病毒A9株全部L片段 ,用T A克隆方法进行PCR产物克隆 ,测定PCR产物的核苷酸序列。通过亚克隆将分段的L片段连接成全长cDNA克隆。结果 A9株的基因组L片段长度为 6 5 33个核苷酸 ,腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富 (%A +U =62 47)。包含有一个单一的开放读码框架 (ORF) ,编码一个标准的质量为 2 46× 10 5 的蛋白 ,含有 215 1个氨基酸。A9株与 76 118、C1 1和C1 2株的同源性最高 ,达到 83 8%。与TULA病毒的关系较远 ,其核酸序列的同源性为 65 8%。将推导的A9株编码的氨基酸序列与其他 2 1种负链RNA病毒的依赖RNA的RNA聚合酶的氨基酸序列以及汉坦病毒几个代表株的L片段氨基酸序列进行比较 ,显示A9编码的RNA聚合酶也有 6个比较保守的区域以及几个极端保守的氨基酸残基。结论 汉坦病毒A9株L片段具有和其他汉坦病毒RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构 ,通过对推导的氨基酸分析 。
- 王晓芳李德新刘尊李川梁米芳张全福霍子威宋干
- 关键词：汉坦病毒
- 汉坦病毒84Fli株S和M片段基因克隆、序列分析及在真核细胞中表达的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 克隆汉坦病毒 84Fli株S ,M片段 ,测定这些基因的核苷酸序列 ,用瞬时表达了解S和M片段在真核细胞中的表达。方法 以我国分离的汉坦病毒 84Fli株感染的Vero E6细胞提取总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增其S及M片段的全长cDNA。然后将 84Fli株的S ,M片段cDNA基因分别克隆入pCR2 1 TOPO载体中 ,随机挑选其中的 3个克隆测定核酸序列 ,确定汉坦病毒 84Fli株S和M片段核苷酸序列。根据S和M片段核苷酸序列设计引物 ,PCR扩增S及M片段的编码区 ,构建了真核表达质粒pcDNA3 84SC及pcDNA3 84MC。用质脂体法把质粒转入COS7细胞 ,瞬时表达NP及G1和G2糖蛋白。用免疫荧光 (IFA)、Westernblot和免疫沉淀方法检测核蛋白及糖蛋白的表达。结果 汉坦病毒 84Fli株的基因组S片段长度为 16 88个核苷酸 ,编码 430个氨基酸。汉坦病毒 84Fli株的基因组M片段长度为 36 16个核苷酸 ,编码 1136个氨基酸。用免疫荧光 (IFA)检测S和M片段在COS细胞中的瞬时表达为阳性。Westernblot结果显示 ,存在有相对分子质量为 5 0 0 0 0左右的核蛋白表达 ,免疫沉淀法显示有核蛋白、G1和G2糖蛋白的表达。结论 84Fli株病毒和其他汉滩病毒在核苷酸序列上虽有差异 ,但在氨基酸水平上的同源性仍很高 。
- 刘尊李德新李川王晓芳孟祥芝梁米芳
- 关键词：汉坦病毒片段基因核苷酸序列分析克隆
