王晓芳
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒A9株全长L片段cDNA克隆和核苷酸序列测定
- 2001年
- 目的 克隆我国分离的汉坦病毒A9株L片段全长cDNA ,并测定其核苷酸序列。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术分段扩增汉坦病毒A9株全部L片段 ,用T A克隆方法进行PCR产物克隆 ,测定PCR产物的核苷酸序列。通过亚克隆将分段的L片段连接成全长cDNA克隆。结果 A9株的基因组L片段长度为 6 5 33个核苷酸 ,腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富 (%A +U =62 47)。包含有一个单一的开放读码框架 (ORF) ,编码一个标准的质量为 2 46× 10 5 的蛋白 ,含有 215 1个氨基酸。A9株与 76 118、C1 1和C1 2株的同源性最高 ,达到 83 8%。与TULA病毒的关系较远 ,其核酸序列的同源性为 65 8%。将推导的A9株编码的氨基酸序列与其他 2 1种负链RNA病毒的依赖RNA的RNA聚合酶的氨基酸序列以及汉坦病毒几个代表株的L片段氨基酸序列进行比较 ,显示A9编码的RNA聚合酶也有 6个比较保守的区域以及几个极端保守的氨基酸残基。结论 汉坦病毒A9株L片段具有和其他汉坦病毒RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构 ,通过对推导的氨基酸分析 。
- 王晓芳李德新刘尊李川梁米芳张全福霍子威宋干
- 关键词：汉坦病毒
- 汉坦病毒84Fli株S和M片段基因克隆、序列分析及在真核细胞中表达的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 克隆汉坦病毒 84Fli株S ,M片段 ,测定这些基因的核苷酸序列 ,用瞬时表达了解S和M片段在真核细胞中的表达。方法 以我国分离的汉坦病毒 84Fli株感染的Vero E6细胞提取总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增其S及M片段的全长cDNA。然后将 84Fli株的S ,M片段cDNA基因分别克隆入pCR2 1 TOPO载体中 ,随机挑选其中的 3个克隆测定核酸序列 ,确定汉坦病毒 84Fli株S和M片段核苷酸序列。根据S和M片段核苷酸序列设计引物 ,PCR扩增S及M片段的编码区 ,构建了真核表达质粒pcDNA3 84SC及pcDNA3 84MC。用质脂体法把质粒转入COS7细胞 ,瞬时表达NP及G1和G2糖蛋白。用免疫荧光 (IFA)、Westernblot和免疫沉淀方法检测核蛋白及糖蛋白的表达。结果 汉坦病毒 84Fli株的基因组S片段长度为 16 88个核苷酸 ,编码 430个氨基酸。汉坦病毒 84Fli株的基因组M片段长度为 36 16个核苷酸 ,编码 1136个氨基酸。用免疫荧光 (IFA)检测S和M片段在COS细胞中的瞬时表达为阳性。Westernblot结果显示 ,存在有相对分子质量为 5 0 0 0 0左右的核蛋白表达 ,免疫沉淀法显示有核蛋白、G1和G2糖蛋白的表达。结论 84Fli株病毒和其他汉滩病毒在核苷酸序列上虽有差异 ,但在氨基酸水平上的同源性仍很高 。
- 刘尊李德新李川王晓芳孟祥芝梁米芳
- 关键词：汉坦病毒片段基因核苷酸序列分析克隆
- 麻疹病毒CC-47株非编码区核苷酸序列测定与比较被引量：2
- 2001年
- 目的 测定麻疹病毒疫苗株长 47(CC 47)的非编码区核苷酸序列 ,并和其他麻疹病毒比较 ,为利用疫苗株病毒进一步研究奠定基础。方法 用RT PCR分段扩增并克隆麻疹病毒CC 47株基因组全序列 ,用基因特异引物测定非编码区的核苷酸序列。结果 CC 47疫苗株非编码区在基因组上为 7个不连续的片段 ,总计 1791个核苷酸。与其他野毒株及Edmonston衍生 5株疫苗株非编码区序列比较发现 ,CC 47疫苗株具有与Edmonston疫苗株系列相同的 4个特征性的核苷酸替代位点 ,分别位于基因组 3′末端第 2 6位 (U→A)、42位 (U→G)和M F基因间隔区FmRNA 5′非翻译区的 4978位(A→G)、5 34 9位 (A→G) ,这些位点的改变可能会影响病毒mRNA的合成、加工和翻译效率以及基因组的复制和包装。结论 不同基因型麻疹病毒具有同样的位点改变可能与病毒在半许可细胞中适应或减毒有关 。
- 胡孔新林崇哲王晓芳李川孟祥芝李德新
- 关键词：麻疹病毒非编码区核苷酸序列
- 汉坦病毒A9株L片段部分核苷酸序列分析
- 2000年
- 目的 测定我国分离的汉坦病毒A9株L片段的部分核苷酸序列。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增我国分离的汉坦病毒A9株部分L片段cDNA ,测定PCR产物的核苷酸序列。结果 PCR扩增产物为L片段 40 0 6nt 44 5 41nt(根据 76 118株序列 ) ,和已发表的汉坦病毒L片段序列比较 ,A9株和汉滩病毒 76 118株同源性最高 ,为 85 .2 % ,和其他不同型别汉坦病毒代表株HR80 39、CG182 0、Sotkoma、NHR11、TulaL片段的同源性分别为 76 .8%、72 .3%、71.0 % ,71.7%和 70 .8%。比较推测的氨基酸序列 ,和 76 118株同源性为 96 .7% ,和HR80 39、CG182 0、Sotkoma、NHR11、TulaL片段的同源性分别为 88.3%、78.6 %、74.7% 74.0 %和 76 .0 %。遗传进化分析显示A9株L片段的进化和同为亚洲黑线姬鼠分离的 76 118株较密切 ,和从欧洲、美洲其他动物分离病毒相差较远 ,提示汉坦病毒的进化和宿主动物密切相关。结论 汉坦病毒A9株和其他不同型别汉坦病毒L片段核苷酸序列的同源性在 85 %～ 70 .8%之间 ,和汉坦病毒原型株 76 118株的同源性最高。
- 李德新梁米芳王晓芳李川张全福霍子威抗长寿宋干
- 关键词：汉坦病毒基因碱基序列
- 长－47麻疹病毒非编码区和P、M基因序列及载体构建
- 本发明提供了麻疹病毒长春－47疫苗株的所有非编码区和P、M编码区序列及其结构，P、M编码区编码的蛋白质氨基酸序列及其结构以及其非编码区序列在构建该疫苗病毒载体中的用途和载体构建方法。这些序列数据和方法可应用于使用该疫苗株...
- 李德新胡孔新王晓芳李川孟祥芝梁米芳
- 文献传递
