桑甜甜
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- FOXO3a沉默或过表达对内皮祖细胞增殖的影响被引量：5
- 2013年
- 观察FOXO3a(forkhead box O3a)沉默或过表达对内皮祖细胞(endothelial progenitorcells,EPCs)增殖的影响。构建了沉默型Ad-shRNA-FOXO3a和突变型Ad-TM(triple mutant)-FOXO3a重组腺病毒载体。密度梯度离心法结合荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分离人脐血来源的EPCs(CD133+CD34+),并进行体外培养及免疫荧光鉴定。将上述重组腺病毒载体转染EPCs并观察转染效率与细胞形态学改变;Western blot分析FOXO3a蛋白表达变化;细胞计数与MTT法分析FOXO3a沉默或过表达对EPCs增殖的影响。成功构建了Ad-shRNA-FOXO3a、Ad-TM-FOXO3a重组腺病毒载体并转染人脐血来源EPCs。Western blot提示,Ad-shRNA-FOXO3a转染EPCs后明显抑制了FOXO3a蛋白的表达;Ad-TM-FOXO3a转染EPCs后明显增加了FOXO3a蛋白的表达。结合细胞形态学改变、细胞计数与MTT法实验结果提示,有效沉默FOXO3a明显促进了EPCs增殖;FOXO3a过表达明显抑制了EPCs增殖。人脐血来源的EPCs中,FOXO3a参与了细胞增殖的调节。
- 黄黎亚王飞曹青刘芳桑甜甜陈书艳
- 关键词：FOXO3A基因沉默腺病毒载体内皮祖细胞细胞增殖
- 内皮祖细胞与沉默信息调节因子2相关酶1在心血管疾病中作用的研究进展被引量：3
- 2013年
- 冠心病在中国老年人中的发病率和死亡率迅速上升,其关键因素之一就是以血管内皮受损为基础的病理生理改变,内皮功能失调可导致血管收缩、血栓形成以及动脉粥样硬化。近年来,内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）移植促血管新生疗法作为一种重要的冠心病治疗手段开始应用于临床试验,并取得了一定的效果。
- 桑甜甜刘芳
- 关键词：心血管疾病内皮祖细胞
- FOXO3a过表达对内皮祖细胞周期相关蛋白的调控
- 2014年
- 目的:观察FOXO3a(forkhead box O3a)的活性改变对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖和细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:将携带突变激活FOXO3a基因的腺病毒载体Ad-TM(triple mutant)-FOXO3a和阴性对照腺病毒载体Ad-GFP体外感染人脐血来源的EPCs。观察EPCs形态学改变,CCK-8分析转染后EPCs增殖情况,Western blot检测FOXO3a蛋白、细胞周期相关蛋白p27kip1以及CDK2的表达水平。结果:构建了的2种腺病毒相关载体被成功转染。形态学改变方面,Ad-TM-FOXO3a组EPCs细胞生长缓慢,集落不明显;Western blot和CCK-8结果显示,Ad-TM-FOXO3a转染组与阴性对照组相比,EPCs增殖被抑制,FOXO3a与p27kip1蛋白过表达,CDK2表达下调。结论:FOXO3a可能通过上调p27kip1蛋白表达,下调CDK2表达,以抑制EPCs增殖。
- 桑甜甜曹青王飞黄黎亚王玉强陈书艳刘芳张建军
- 关键词：内皮祖细胞腺病毒载体细胞增殖
- 过氧化氢对内皮祖细胞凋亡相关蛋白表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:比较不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对人外周血来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生存能力的改变及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:采用密度梯度离心法和差速贴壁法从人外周静脉血中分离培养内皮祖细胞。选取传代后第3代EPCs作为研究对象,以终浓度分别为50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L、300μmol/L和400μmol/L的过氧化氢处理内皮祖细胞12 h,同时设立正常处理对照组。CCK-8法检测各组内皮祖细胞生存能力的差异;Western blot分析各组内皮祖细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和p53的蛋白表达情况。结果:与对照组相比,在浓度为50μmol/L、100μmol/L和150μmol/L过氧化氢处理组中细胞存活能力逐渐增强,促凋亡蛋白Bax、p53随之下调,抗凋亡蛋白Bcl-2则显著上调;在浓度为200μmol/L、300μmol/L和400μmol/L过氧化氢处理组中细胞生存能力相对于正常对照组逐渐减弱,促凋亡蛋白Bax、p53表达水平逐渐增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降。结论:过氧化氢对内皮祖细胞存活能力和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53表达的影响均呈双相性变化。
- 刘芳桑甜甜曹青王飞郑兴
- 关键词：内皮祖细胞过氧化氢细胞凋亡
- 人脐血内皮祖细胞的体外分离和培养被引量：1
- 2014年
- 目的建立一种稳定的体外分离和培养人脐血来源内皮祖细胞的方法。方法采用密度梯度离心法从人脐带血中分离单个核细胞,将其接种至人纤维连接蛋白包被的六孔板中,用EGM-2培养基诱导培养。通过形态学观察、细胞表面特异性抗原、摄取功能和体外血管形成能力对内皮祖细胞进行鉴定。结果细胞形态学观察发现,刚分离的单个核细胞较小,呈圆形,4 d后可见少量的圆形和梭形贴壁细胞,8 d后有明显集落形成,14 d后相邻集落相互融合,呈现出典型铺路石样改变。内皮祖细胞能摄取乙酰化低密度脂蛋白,结合荆豆凝集素1,表达CD34、CD133和血管内皮细胞生长因子受体2,并且具有体外血管生成能力。结论采用密度梯度离心法可从人脐带血中成功分离和培养出内皮祖细胞,以用于相关实验研究。
- 王玉强黄黎亚王飞曹青桑甜甜陈书艳
- 关键词：人脐血单个核细胞内皮祖细胞细胞培养
- VEGF165对过氧化氢诱导的内皮祖细胞增殖损伤的保护作用
- 2014年
- 目的 观察血管内皮生长因子-165（vascular endothelial growth factor-165,VEGF165）对过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）诱导的人外周血来源内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）增殖损伤及细胞周期相关蛋白表达的影响.方法 采用密度梯度离心法和贴壁培养法从人外周血中分离培养内皮祖细胞.在经MTT实验筛选出过氧化氢处理浓度后,对EPCs进行实验分组：正常对照组,不给予任何处理因素;VEGF165处理组,以终浓度为25ng/mL的VEGF165孵育24 h;过氧化氢处理,以终浓度200 μmol/L过氧化氢处理内皮祖细胞24 h;VEGF 165预处理组,经浓度为25 ng/mL的VEGF165预孵育30 min后,再与终浓度为200μmol/L的H2O2共孵育24 h.CCK-8法检测各组内皮祖细胞增殖活性的差异;Western blot分析各组内皮祖细胞中细胞周期相关蛋白cyclin D1和PCNA的蛋白表达情况.结果 与对照组相比,VEGF165处理组内皮祖细胞增殖活性增高（P＜0.05）;过氧化氢处理组内皮祖细胞增殖活性较对照组降低（P＜0.05）,且细胞周期相关蛋白cyclin Dl和PCNA下调（P＜0.05）; VEGF165预处理组中,EPCs增殖活性较过氧化氢处理组增高（P＜0.05）,且cyclin D1和PCNA蛋白表达上调（P＜0.05）.结论 VEGF165可促进人外周血来源的内皮祖细胞的增殖,对过氧化氢诱导的内皮祖细胞增殖损伤有一定的保护作用,其机制可能与细胞周期相关蛋白cyclin D1和PCNA表达升高有关.
- 刘芳桑甜甜曹青王飞黄黎亚郑兴
- 关键词：内皮祖细胞过氧化氢细胞增殖
