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Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导的重组腺相关病毒制备被引量：1: 2012年; 目的建立高效的临床级重组腺相关病毒（rAAV）制备方法。方法将rAAV的反向末端重复序列（ITR）及目的基因表达框（2053bp）从pAAV—MCS剪切引入杆状病毒载体中构建顺式载体，rAAV血清型2的衣壳和复制蛋白基因在反式载体pFastBacDual中利用真核基因遗漏扫描原理表达，两者分别制备成杆状病毒，共感染昆虫细胞sf9包装rAAV。增强绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告基因验证其可行性。结果顺式和反式杆状病毒载体分别在DH10BacTM中转座形成杆粒bacmid、昆虫细胞sf9中制备成杆状病毒，病毒滴度可达1×10^8～3×10^8v．g．／ml。二杆状病毒共感染昆虫细胞sf9，完成rAAV拯救、复制和包装过程，经rAAV—EGFP感染293T细胞测试具有良好的生物学活性。结论该系统具有高效、安全、简便等特点，为临床级rAAV制备和基因治疗奠定了基础。; 陈雅宁王春荣杨宗灿姬朝霞张延瑞韩双印; 关键词：腺相关病毒 SF9细胞

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杨宗灿