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姬朝霞
作品数:
4
被引量:3
H指数:1
供职机构:
新乡医学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
张延瑞
郑州大学人民医院
韩双印
郑州大学人民医院
陈雅宁
郑州大学人民医院
王春荣
郑州大学人民医院
杨玉秀
郑州大学人民医院
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2012
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Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导的重组腺相关病毒制备
被引量:1
2012年
目的建立高效的临床级重组腺相关病毒(rAAV)制备方法。方法将rAAV的反向末端重复序列(ITR)及目的基因表达框(2053bp)从pAAV—MCS剪切引入杆状病毒载体中构建顺式载体,rAAV血清型2的衣壳和复制蛋白基因在反式载体pFastBacDual中利用真核基因遗漏扫描原理表达,两者分别制备成杆状病毒,共感染昆虫细胞sf9包装rAAV。增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因验证其可行性。结果顺式和反式杆状病毒载体分别在DH10BacTM中转座形成杆粒bacmid、昆虫细胞sf9中制备成杆状病毒,病毒滴度可达1×10^8~3×10^8v.g./ml。二杆状病毒共感染昆虫细胞sf9,完成rAAV拯救、复制和包装过程,经rAAV—EGFP感染293T细胞测试具有良好的生物学活性。结论该系统具有高效、安全、简便等特点,为临床级rAAV制备和基因治疗奠定了基础。
陈雅宁
王春荣
杨宗灿
姬朝霞
张延瑞
韩双印
关键词:
腺相关病毒
SF9细胞
重组人INFα2b/igG4 Fe融合蛋白在杆状病毒昆虫系统中的表达
背景和目的 慢性乙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的常见病,全球目前约有3.5亿慢性乙型肝炎病毒感染者;慢性丙型病毒性肝炎亦影响着全球近1.8亿人,该病的危险性主要在于其高慢性化率和可能发生的严重并发症,包括肝硬...
姬朝霞
关键词:
慢性乙型病毒性肝炎
文献传递
重组人干扰素α-2b/免疫球蛋白G4 Fc融合蛋白在杆状病毒昆虫系统中的表达
被引量:2
2012年
目的利用杆状病毒昆虫系统表达人干扰素(IFN)α-2b/免疫球蛋白(Ig)G4Fc融合蛋白(IFN/Fc),为长效干扰素的抗病毒治疗探索新方法。方法利用分子克隆技术获得人IFNα-2b及IgG4Fc基因cDNA,构建杆状病毒穿梭载体,在DHIOBac菌株中转座获重组杆粒,转染昆虫细胞Highfive,Western blot检测目的蛋白表达,细胞病变抑制法检测生物学活性。结果穿梭载体在DHIOBac中转座成功,获得重组杆粒BacmidqFN/Fc;HighFive细胞在病毒感染后72h蛋白表达较好。病毒感染48h即有少量目的蛋白表达,72h表达量较高。Westernblot结果显示在45×10^3处有特异性蛋白条带,体外抗病毒活性为580IU/ml。结论利用杆状病毒昆虫系统成功表达重组IFN/Fc融合蛋白,为新型长效干扰素研制及慢性病毒性肝炎治疗提供实验依据。
姬朝霞
陈雅宁
张延瑞
杨玉秀
王春荣
韩双印
关键词:
干扰素类
融合蛋白质类
病毒
重组人IFNα2b/IgG4 Fc融合蛋白在杆状病毒昆虫系统中的表达
背景和目的慢性乙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的常见病,全球目前约有3.5亿慢性乙型肝炎病毒感染者;慢性丙型病毒性肝炎亦影响着全球近1.8亿人,该病的危险性主要在于其高慢性化率和可能发生的严重并发症,包括肝硬化和肝癌...
姬朝霞
关键词:
融合蛋白
病毒性肝炎
生物学活性
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