刘存宝
- 作品数：38 被引量：25H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金云南省应用基础研究计划面上项目云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 外膜蛋白Omp22作为鲍曼不动杆菌疫苗靶点的应用
- 本发明涉及分子生物学及免疫学领域，具体的说，本发明提供了一种鲍曼不动杆菌的亚单位疫苗抗原蛋白与其应用方法。鲍曼不动杆菌外膜蛋白Omp22的基因核酸序列如序列表SEQ？IDNO:1所示，其编码的蛋白即为鲍曼不动杆菌亚单位疫...
- 马雁冰黄惟巍姚宇峰杨旭孙文佳刘存宝白红妹
- 新型纳米级基因工程疫苗构建的关键技术及应用
- 马雁冰黄惟巍刘存宝孙文佳杨旭白红妹姚宇峰龙琼褚晓杰
- 传统的基于病原体灭活或减毒活疫苗具生产成本高、含毒性致病物质、减毒株突变及部分疾病用传统的疫苗防治收效甚微等缺点，且一些不能体外培养或具免疫病理作用的病原体无法研制减毒及灭活疫苗，另外还有很多危害严重的传染性疾病无法通过...
- 关键词：
- 关键词：基因工程疫苗传染性疾病
- 一种带状疱疹疫苗组合物及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种带状疱疹疫苗组合物及其制备方法和应用，属于疫苗领域。所述疫苗组合物中包含水痘‑带状疱疹糖蛋白E、聚乳酸‑聚羟基乙酸共聚物（PLGA）、双链聚胞嘧啶核苷酸片段（Poly I:C）和富含GC的单链寡聚脱氧核苷...
- 刘存宝曹晗齐家龙王云飞
- 一种基于新型冠状病毒突刺蛋白S1区域预防新型冠状病毒感染的亚单位疫苗
- 本发明提供了一种基于新型冠状病毒突刺蛋白S1区域预防新型冠状病毒感染的亚单位疫苗，属于疫苗领域。所述亚单位疫苗包括新型冠状病毒突刺蛋白S1区域抗原和佐剂，通过皮下或肌肉注射施用2‑3次，用于预防新型冠状病毒。本发明所述的...
- 刘存宝曹晗王云飞王丽春
- 在毕赤酵母中使用甲醛脱氢酶启动子指导人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1表达的方法
- 本发明涉及在甲醇营养型毕赤酵母宿主细胞中表达人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的方法，其中人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的表达受毕赤酵母甲醛脱氢酶启动子的控制，本发明主要包含：i）构建毕赤酵母甲醛脱氢酶启动子指导的毕...
- 马雁冰金晓媚姚宇峰杨旭黄惟巍刘存宝孙文佳龙琼李杨褚晓杰
- 文献传递
- 主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法
- 本发明提供一种主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法，包括以下步骤：从小鼠提取IL-33总RNA，通过逆转录得到IL33总cDNA，用设计的特异性引物将得到的总cDNA通过PCR扩增，得到编码IL-33...
- 马雁冰龙琼黄惟巍姚宇峰杨旭孙文佳金晓媚李杨褚晓杰刘存宝
- 文献传递
- 水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析被引量：4
- 2019年
- 目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High Five^TM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。结果:构建了pFastbac-VZV gE1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高gE蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。结论:成功获得了杆状表达系统表达的gE蛋白并且纯化和鉴定了蛋白质的性质及免疫原性,为进一步研发具有自主产权的VZV亚单位疫苗研究奠定了基础。
- 齐家龙高瑞雨靳输梅高福兰杨旭马雁冰刘存宝
- 关键词：水痘带状疱疹病毒免疫原性
- 主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法
- 本发明提供一种主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法，包括以下步骤：从小鼠提取IL-33总RNA，通过逆转录得到IL33总cDNA，用设计的特异性引物将得到的总cDNA通过PCR扩增，得到编码IL-33...
- 马雁冰龙琼黄惟巍姚宇峰杨旭孙文佳金晓媚李杨褚晓杰刘存宝
- 文献传递
- 一种水痘-带状疱疹mRNA疫苗组合物及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种水痘‑带状疱疹mRNA疫苗组合物及其制备方法和应用，所述疫苗组合物中包含编码水痘‑带状疱疹病毒糖蛋白E的信使核糖核酸（mRNA）序列及其衍生序列和脂质纳米颗粒（LNP），通过微流控设备制备为直径20‑40...
- 刘存宝曹晗王云飞栾宁
- 利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白被引量：2
- 2014年
- 目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。
- 金晓媚姚宇峰黄惟巍杨旭孙文佳刘存宝龙琼马雁冰
- 关键词：启动子毕赤酵母绿色荧光蛋白人乳头瘤病毒16L1蛋白
