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植物转录因子与发育调控被引量：30: 1998年; 近 1 0余年来 ,已发现了大量的植物转录因子 ,主要包括 :茎节转录因子家族 ,MADS_box转录因子家族 ,诱导花分生组织的转录因子以及控制植物细胞分化的转录因子 .这些转录因子不仅在植物的生长发育、形态建成以及代谢调控等方面起到重要的作用 ,而且通过其异位表达还可以对植物形态的发生进行修饰 .因此 ,植物转录因子有可能成为一种修饰植物性状的新型的生物技术工具 .; 吴乃虎刁丰秋; 关键词：植物转录因子发育调控

植物发育基因克隆技术的新进展被引量：32: 1998年; 过去２０年，人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化，然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列，并据此合成寡核苷酸探针，最终从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作，以前广泛应用的主要方法有ＤＮＡ标签法（ＤＮＡｔａｇｇｉｎｇ）［１，２，３］，作图克隆法（ｍａｐ－ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ）［４］，差别筛选法（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）［５］和扣除杂交法（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）［６，７，８］。这些方法虽然都取得了一定的成功，但由于各自的缺陷性，而限制了它们更加广泛的应用。近年来在ＰＣＲ技术的基础上，人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。１９９２年，ＬｉａｎｇＰ和ＰａｒｄｅｅＡ［９］首次提出并运用了ｍＲＮＡ差别显示技术（ｍＲＮＡｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ，ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）来进行基因的分离。实践表明，ｍＲＮＡ差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性，但同时它也存在?; 刁丰秋; 关键词：基因克隆

蔗糖调控培养对胡萝卜体细胞胚内源ABA水平的效应被引量：41: 1999年; 利用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术，分析了经不同浓度蔗糖调控的胡萝卜（ＤａｕｃａｓｃａｒｏｔａＬ．）体细胞胚及胚性器官的内源ＡＢＡ水平。结果表明，随着胚的生长发育，内源ＡＢＡ含量呈上升趋势，到子叶胚时，达到最高值。在胚的早期发育阶段，不同处理之间，ＡＢＡ水平只有较小的差异，而当子叶胚开始膨大时，这种差异则较明显。一旦将调控胚解调控，体细胞胚内源ＡＢＡ含量则明显下降。在两个月内，调控胚及胚性器官的ＡＢＡ含量基本维持不变。表明蔗糖浓度可导致体胚内源ＡＢＡ水平的变化，但这种影响依发育时期而异；高浓度的ＡＢＡ水平有利于胚性状态的维持。与此同时，比较研究了外源ＡＢＡ处理效应与高浓度蔗糖处理的差异，结果表明，蔗糖的调控效应与ＡＢＡ的调控相似又不尽相同。总之，在蔗糖调控胡萝卜体细胞胚发育的信号传递网络中ＡＢＡ可能是一个重要的中介信号因子。; 程玉兰刁丰秋吴乃虎黄美娟; 关键词：胡萝卜体细胞胚

高等植物胚胎发生的分子调控被引量：19: 2000年; Embryogenesis represents the critical transition from the fertilized egg to the new multicellular seedling. Considerable attention has recently been focused on the search for genes expressed during the embryogenesis of plant model systems, especially in Arabidopsis thaliana (L.) Heynh., to understand the regulation of plant development. This paper presents a brief description of gene expression and molecular regulation during embryogenesis. The molecular events to induce and determine cell fate and cell differentiation are reviewed, the gene regulation of shoot and root meristems are discussed and the molecular mechanisms of embryo maturation and dormancy would be followed as well.; 刁丰秋黄美娟吴乃虎; 关键词：胚胎发生细胞分化器官发生高等植物分子调控

胡萝卜LEA基因家族新成员DcLEA1的克隆及其结构与表达特性分析被引量：8: 2004年; 利用改进的cDNA代表性差示分析 (RDA)技术 ,从调控状态的胡萝卜体细胞胚中分离到LEA基因片段 ,以该片段为探针筛选调控状态的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库及用控渗法构建的基因组文库 ,获得了胡萝卜LEA基因家族的一个新成员DcLEA1(GenBank注册号 :AF30 8739) .该基因转录区由 5′UTR区、两个外显子、一个内含子及 3′UTR构成 ,启动区长 1.2kb ;开放阅读框为 4 80bp ,编码 15 9个氨基酸和一个终止密码子 .Northern杂交分析表明 ,DcLEA1基因在胡萝卜成体中无表达活性 ;在调控状态的胡萝卜体细胞胚中具有高表达活性 ;在解调控 12h的胡萝卜体细胞胚中 ,转录本含量急剧下降 ;随着解调控时间的延长 ,胡萝卜体细胞胚根开始延伸 ,DcLEA1基因的表达活性又有所增加 .这一现象与LEA基因在种子休眠和萌发过程中表达活性的变化规律相似 .由此推测 ,可以利用胡萝卜体细胞胚蔗糖调控解调控体系 ,来模拟种子休眠与萌发的过程 ,研究植物胚根发育相关基因表达调控的分子机理 .; 刘一鸣刁丰秋张雷黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜 LEA基因克隆基因表达

胡萝卜体细胞胚根发育的细胞分子生物学: 高等植物器官形态发生相关基因表达与调控研究,是细胞生物学及发育分子生物学的前沿课题.植物的营养器官(包括根、茎、叶)和生殖器官(花)发育分化过程中,其组织特异性基因时、空表达规律的研究具有同等重要的意义.但与花、叶等器官...; 刁丰秋; 关键词：胡萝卜蔗糖转运蛋白特异蛋白 CDNA RDA

利用改进的cDNA RDA技术分离胡萝卜(Daucus carota L.)体细胞胚根发育相关的基因被引量：10: 2000年; 根据链霉亲和素与生物素之间的结合作用及磁性吸附分离的原理 ,发展出改进的cDNA代表性差式分析 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)技术 ,并用来检测在调控和解调控培养 1 2h的胡萝卜体细胞胚中特异表达的基因 .结果显示 ,在解调控 1 2h的胡萝卜体细胞胚中 ,存在 4条特异表达的cDNA片段 ,命名为NR_1 ,NR_2 ,NR_3和NR_4.将这些片段分别克隆在pBS噬菌粒载体中 .DNA序列同源性比较表明 ,片段NR_3和NR_4分别与植物的DnaJ和木质葡聚糖内转糖基化酶 (xyloglucanendo_transglycosylase)的编码基因有很高的同源性 ,而片段NR_2中有一段序列与LEA蛋白 (lateembryogenesisabundantproteins)基因有一定的同源性 .NR_1则可能来自新基因 .用3 2 P标记NR_1作探针 ,与cDNA片段群体进行杂交证实 ,从解调控 1 2h的胡萝卜体细胞胚中克隆到一种与胚根发育相关的新基因序列 .Southern杂交表明。; 刁丰秋张雷黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜 CDNA RDA 体细胞胚

胡萝卜体细胞胚DnaJ同源基因的分离及其表达特性分析被引量：5: 2003年; DuaJ/Hsp40蛋白是DnaK/Hsp70的辅助分子伴侣,它通过调节DnaK/Hsp70的ATPase活性来影响蛋白复合体的合成与组装。运用改进的cDNA代表性差示分析方法从解调控胡萝卜体细胞胚中分离出Dnal基因同源区段,进而以它为探针筛选解调控12h的胡萝卜体细胞胚cDNA文库,从胡萝卜中分离得到DuaJ蛋白同源基因DcJ1.序列分析表明它的编码区为1257bp,编码418个氨基酸和1个终止密码子,包含3个保守的特征结构域。Southern杂交分析表明,DcJ1基因在核基因组中以单拷贝或低拷贝形式存在;而Northern杂交则显示该基因仅在根中特异表达,其表达强度随着胡萝卜体细胞胚的调控-解调控过程发生明显的变化,并且不受热激的诱导。由此可见,DcJ1基因的表达活性与胡萝卜体细胞胚根的早期发育之间存在着明显的相关性。; 杨志攀张雷刁丰秋黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜体细胞胚基因分离热激蛋白

一种胡萝卜蔗糖转运蛋白基因家族新成员的分离及功能鉴定被引量：9: 2001年; 培养基中蔗糖浓度的变化可以调控胡萝卜体细胞胚根的发育进程．为了分析在此过程中蔗糖的转运与体细胞胚根发育的相关性，利用ＲＴ－ＰＣＲ获得胡萝卜蔗糖转运蛋白基因的探针，筛选蔗糖调控状态下的胡萝卜体细胞胚的ＣＤＮＡ文库，分离到蔗糖转运蛋白基因家族的一个新成员的全长ｃＤＮＡ，命名为ｃＳＵＴ基因（ＧｅｎＢａｎｋ注册号为ＡＢ０３６７５８）．对该基因的编码蛋白进行结构分析表明，其具有典型的１２个跨膜结构域．在酵母中的表达分析证明，ｃＳＵＴ基因的编码蛋白有转运蔗糖的功能，转运活性受ｐＨ值影响较大，Ｋｍ为９ｍｍｏｌ／Ｌ，且对蔗糖的运输具有专一性．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示其主要在根部表达，且在蔗糖调控与解调控的胡萝卜体细胞胚发育的不同时相存在显著表达差异，推测ｃＳＵＴ基因与蔗糖的信号转导以及胚根的发育密切相关．; 张雷刁丰秋杨志攀黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜蔗糖转运蛋白 CDNA文库基因分离基因鉴定

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