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胡萝卜DcPAB基因的分离及其结构与功能分析被引量：5: 2004年; 运用改进的减法杂交技术分离到胡萝卜Poly(A)结合蛋白基因DcPAB .其cDNA编码区长度为 1 977bp ,编码 6 5 8个氨基酸和 1个终止密码子 .基因组转录序列区长度为 4 6 1 6bp ,包含 9个外显子和 8个内含子 .DcPAB在胡萝卜基因组中为单拷贝基因 .该基因在胡萝卜体细胞胚中特异性表达 ,且其表达活性在调控解调控前后有明显差异 .体外结合实验表明 ,在大肠杆菌中表达并纯化的DcPAB蛋白具有与oligo(A) 2 0 特异性结合的性能 .酵母突变体互补实验进一步证明。; 林慧馨张雷杨志攀黄美娟吴乃虎

利用改进的cDNA RDA技术分离胡萝卜(Daucus carota L.)体细胞胚根发育相关的基因被引量：10: 2000年; 根据链霉亲和素与生物素之间的结合作用及磁性吸附分离的原理 ,发展出改进的cDNA代表性差式分析 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)技术 ,并用来检测在调控和解调控培养 1 2h的胡萝卜体细胞胚中特异表达的基因 .结果显示 ,在解调控 1 2h的胡萝卜体细胞胚中 ,存在 4条特异表达的cDNA片段 ,命名为NR_1 ,NR_2 ,NR_3和NR_4.将这些片段分别克隆在pBS噬菌粒载体中 .DNA序列同源性比较表明 ,片段NR_3和NR_4分别与植物的DnaJ和木质葡聚糖内转糖基化酶 (xyloglucanendo_transglycosylase)的编码基因有很高的同源性 ,而片段NR_2中有一段序列与LEA蛋白 (lateembryogenesisabundantproteins)基因有一定的同源性 .NR_1则可能来自新基因 .用3 2 P标记NR_1作探针 ,与cDNA片段群体进行杂交证实 ,从解调控 1 2h的胡萝卜体细胞胚中克隆到一种与胚根发育相关的新基因序列 .Southern杂交表明。; 刁丰秋张雷黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜 CDNA RDA 体细胞胚

cDNA文库的差异筛选与抑制性减数杂交相结合分离胡萝卜体细胞胚根发育相关基因被引量：24: 2002年; 应用cDNA文库差异筛选与抑制性减数杂交相结合的技术程序,并通过反向Northern分析进一步验证,成功地从解调控12 h的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库中,分离到7个在解调控12h特异表达的基因.其中4个含有完整的编码框,分别编码木质葡聚糖内转糖基化酶、脂肪酸去饱和酶、一种poly(A)结合蛋白和一种酰基转移酶.另外3个是5＇端部分缺失的cDNA基因片段,分别编码三磷酸甘油醛脱氢酶、一种糖蛋白和一种与单链RNA/DNA结合的蛋白.对其中部分基因的Northern分析结果显示,它们的表达量在蔗糖调控下的胡萝卜体细胞胚根发育的不同时期均有显著变化,说明它们都是与胚根发育相关的基因.; 张雷杨志攀刘一鸣黄美娟吴乃虎; 关键词：CDNA文库基因克隆基因分离基因表达

蔗糖对胡萝卜体细胞胚根早期发育调控的分子机理研究: 该文进一步研究了蔗糖调控培养的细胞学效应,确证了蔗糖信号对胚根发育所起的特异的调控作用.同时,利用不同的基因分离方法分离了与胡萝卜体细胞胚胚根发育相关基因,并对其中若干基因进行了初步的结构、功能和表达分析.主要内容包括:...; 张雷; 关键词：胡萝卜蔗糖转运蛋白 CDNA 基因克隆

胡萝卜LEA基因家族新成员DcLEA1的克隆及其结构与表达特性分析被引量：8: 2004年; 利用改进的cDNA代表性差示分析 (RDA)技术 ,从调控状态的胡萝卜体细胞胚中分离到LEA基因片段 ,以该片段为探针筛选调控状态的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库及用控渗法构建的基因组文库 ,获得了胡萝卜LEA基因家族的一个新成员DcLEA1(GenBank注册号 :AF30 8739) .该基因转录区由 5′UTR区、两个外显子、一个内含子及 3′UTR构成 ,启动区长 1.2kb ;开放阅读框为 4 80bp ,编码 15 9个氨基酸和一个终止密码子 .Northern杂交分析表明 ,DcLEA1基因在胡萝卜成体中无表达活性 ;在调控状态的胡萝卜体细胞胚中具有高表达活性 ;在解调控 12h的胡萝卜体细胞胚中 ,转录本含量急剧下降 ;随着解调控时间的延长 ,胡萝卜体细胞胚根开始延伸 ,DcLEA1基因的表达活性又有所增加 .这一现象与LEA基因在种子休眠和萌发过程中表达活性的变化规律相似 .由此推测 ,可以利用胡萝卜体细胞胚蔗糖调控解调控体系 ,来模拟种子休眠与萌发的过程 ,研究植物胚根发育相关基因表达调控的分子机理 .; 刘一鸣刁丰秋张雷黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜 LEA基因克隆基因表达

胡萝卜体细胞胚DnaJ同源基因的分离及其表达特性分析被引量：5: 2003年; DuaJ/Hsp40蛋白是DnaK/Hsp70的辅助分子伴侣,它通过调节DnaK/Hsp70的ATPase活性来影响蛋白复合体的合成与组装。运用改进的cDNA代表性差示分析方法从解调控胡萝卜体细胞胚中分离出Dnal基因同源区段,进而以它为探针筛选解调控12h的胡萝卜体细胞胚cDNA文库,从胡萝卜中分离得到DuaJ蛋白同源基因DcJ1.序列分析表明它的编码区为1257bp,编码418个氨基酸和1个终止密码子,包含3个保守的特征结构域。Southern杂交分析表明,DcJ1基因在核基因组中以单拷贝或低拷贝形式存在;而Northern杂交则显示该基因仅在根中特异表达,其表达强度随着胡萝卜体细胞胚的调控-解调控过程发生明显的变化,并且不受热激的诱导。由此可见,DcJ1基因的表达活性与胡萝卜体细胞胚根的早期发育之间存在着明显的相关性。; 杨志攀张雷刁丰秋黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜体细胞胚基因分离热激蛋白

一种胡萝卜蔗糖转运蛋白基因家族新成员的分离及功能鉴定被引量：9: 2001年; 培养基中蔗糖浓度的变化可以调控胡萝卜体细胞胚根的发育进程．为了分析在此过程中蔗糖的转运与体细胞胚根发育的相关性，利用ＲＴ－ＰＣＲ获得胡萝卜蔗糖转运蛋白基因的探针，筛选蔗糖调控状态下的胡萝卜体细胞胚的ＣＤＮＡ文库，分离到蔗糖转运蛋白基因家族的一个新成员的全长ｃＤＮＡ，命名为ｃＳＵＴ基因（ＧｅｎＢａｎｋ注册号为ＡＢ０３６７５８）．对该基因的编码蛋白进行结构分析表明，其具有典型的１２个跨膜结构域．在酵母中的表达分析证明，ｃＳＵＴ基因的编码蛋白有转运蔗糖的功能，转运活性受ｐＨ值影响较大，Ｋｍ为９ｍｍｏｌ／Ｌ，且对蔗糖的运输具有专一性．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示其主要在根部表达，且在蔗糖调控与解调控的胡萝卜体细胞胚发育的不同时相存在显著表达差异，推测ｃＳＵＴ基因与蔗糖的信号转导以及胚根的发育密切相关．; 张雷刁丰秋杨志攀黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜蔗糖转运蛋白 CDNA文库基因分离基因鉴定

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张雷