田霞
- 作品数：11 被引量：51H指数：4
- 供职机构：北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫原性和保护效率的比较研究被引量：1
- 2005年
- 对结核分枝杆菌两种DNA单价疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价和比较.将结核分枝杆菌抗原蛋白MPT70(22kDa)和PstS-3(40kDa)克隆到原核表达载体pET22b中,酶切和测序鉴定正确后转化入E.coli BL21(DE3)PLysS宿主菌株内中,通过诱导表达纯化获得目的蛋白用于DNA疫苗效价鉴定.用真核表达载体pJW4303构建了MPT70,PstS-3(包括信号肽的全基因)两种重组真核质粒(DNA疫苗),进行了酶切鉴定和序列分析, 确定含有正确的读码框.用上述DNA疫苗分别肌注免疫小鼠,三免小鼠后21天MPT70 和PstS-3抗体均达到为1∶12800.三免后21天小鼠的脾脏细胞诱导产生较高水平的MPT70和PstS-3特异性的细胞因子γ-干扰素,浓度分别为16872.82pg/ml和11460.98pg/ml.三次免疫后经静脉强毒攻击,两组DNA疫苗免疫鼠的肺脏和脾脏的载菌数均比阴性对照组少,表明这两种疫苗都能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,而且以前者为主.综合各项指标发现,DNA疫苗MPT70要优于PstS-3.
- 顾田园蔡宏田霞余大海朱玉贤
- 关键词：DNA疫苗结核分枝杆菌免疫原性免疫后强毒核质
- 结核分枝杆菌抗原MPT83和MPT64二价基因疫苗的研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨结核杆菌两种抗原MPT83和MPT64基因疫苗的免疫原性和免疫保护性。方法用成对引物扩增MPT83和MPT64两种抗原基因,构建到同一载体pJW4303中,测序正确和体外表达验证后免疫小鼠,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定3次免疫后小鼠的抗体滴度。对3次免疫后的小鼠脾细胞进行培养,抗原刺激,用夹心ELISA方法测定细胞因子IFN-γ和IL-4的含量。免疫小鼠攻毒,进行细菌培养,检测肺脏和脾脏的载菌量。结果每次免疫后抗原的滴度分别为1∶200、1∶800、1∶6400,而卡介苗(BCG)组的抗体滴度为1∶800,空载体组未检测到抗体滴度。融合的二价基因疫苗免疫小鼠,主要诱发Th1型细胞因子,IFN-γ占优势,二价组中的含量为7520pg/ml,IL-4的含量仅为ng级。H37Rv攻毒后,二价组小鼠的肺脏载菌量为(2.21±0.03)×105,比空载体免疫小鼠低103倍,比BCG免疫小鼠低10倍。结论抗原MPT83和MPT64二价基因疫苗有效提高了机体保护效力,对于结核病的防治具有一定的借鉴价值。
- 田霞蔡宏朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌抗原MPT64基因疫苗免疫保护性免疫原性
- 结核分枝杆菌核酸疫苗研究
- 结核病是严重危害人类健康的重要疾病,耐药菌株和免疫缺陷患者的增加,使结核病的防治变得更加困难.疫苗是控制结核病的有效方法.目前,BCG是预防结核病的唯一疫苗,但对成年人肺结核无效,因而,高效的新型疫苗可能是控制结核病蔓延...
- 田霞
- 关键词：结核病融合基因疫苗免疫原性免疫保护性
- 结核分枝杆菌四联核酸疫苗免疫原性和保护效率被引量：15
- 2003年
- 对结核杆菌四联DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价。用结核分枝杆菌Ag85B,MPT-64,MPT-63和ESAT-6等4个分泌蛋白基因的表达载体首次免疫小鼠21d后,Ag85B抗体滴度达到1:200,二次免疫后为1:102400,三次免疫后为1:1288。MPT-64和MPT-63的抗体滴度在首次免疫21d后即高达1:25600,二、三次免疫后呈下降趋势。三次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体。用该DNA四联苗免疫小鼠后,4种蛋白都诱导脾脏细胞产生较高水平的细胞应答(产生了特异性γ-干扰素)。三次免疫后经静脉强毒攻击,四联苗免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了99.8％,保护水平显著高于BCG疫苗组、对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体pJW4303的对照小鼠,肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的50％～70％,而四联苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,实质无肉芽肿,肺泡轮廓清晰。研究证实,Ag85B,MPT-64,MPT-63和ESAT-6四种分泌蛋白编码基因组成的四联DNA疫苗具有很高的免疫应答水平和保护效率。
- 蔡宏田霞呼西旦潘怡李国利庄玉辉朱玉贤
- 关键词：结核病结核分枝杆菌免疫原性免疫应答
- 结核分枝杆菌DNA三价苗的细胞与体液应答研究被引量：3
- 2003年
- 本文构建了含分枝杆菌抗原Ag85B(30kDa) ,MPT - 83(2 6kDa)和ESAT - 6 (6kDa)分泌蛋白的真核表达载体pJW 4 30 3,酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,证明上述三种重组质粒能在COS7细胞中表达出特异蛋白。三种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠 ,首免 ,二免和三免小鼠后 2 1dAg85B抗体平均滴度分别为 1∶32 0 0 ,1∶5 12 0 0和 1∶10 2 4 0 0 ,MPT - 83抗体平均滴度二次免疫和三次免疫后 2 1d测得为 1∶2 5和 1∶5 0 ,三次免疫后均未检测到ESAT - 6特异性抗体。在三免后 2 1dAg85B和MPT - 83的特异性细胞因子γ -干扰素的浓度分别 2 75 pg/ml±16 5 ,2 2 0 pg/ml± 19 8;而ESAT - 6的γ -干扰素浓度为 2 2 0 pg/ml± 9 9。本研究表明 ,多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答 ,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。
- 蔡宏田霞李淑霞胡勤朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌细胞免疫应答AG85BESAT-6
- 结核分枝杆菌ESAT-6 DNA疫苗的细胞和体液应答及保护效率研究被引量：2
- 2003年
- 构建了含分枝杆菌抗原ESAT_6( 6kDa)分泌蛋白 (结构基因 )的真核表达载体pJW43 0 3 ,进行了酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,收集表达细胞或浓缩上清液 ,进行SDS_PAGE电泳 ,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹检测 ,证明上述重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白。重组表达质粒肌注免疫小鼠 ,首免后 2 1d,未检测到特异性抗体 ,二免和三免 2 1d后ESAT_6的特异性抗体平均效价分别为 1∶40 0和 1∶80 0。三免后 2 1dESAT_6的特异性细胞因子γ_干扰素的浓度为 1 2 .8± 0 .4ng/mL,而阴性对照空载体DNA组三免后只诱导产生 <0 .1ng/mL的γ_干扰素。三免后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏的细菌数比对照空载体组减少了 90 %以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。
- 蔡宏田霞呼西旦李淑霞朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6DNA疫苗免疫原性
- 结核分枝杆菌四价DNA疫苗免疫原性和保护效率研究被引量：10
- 2005年
- 对结核杆菌四价DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价.用编码结核分枝杆菌Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3等4种抗原蛋白的基因分别构建的单价DNA疫苗混合成四价苗免疫小鼠.3次免疫后21天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到1:6 400、1:51 200、1:6 400、1:6 400.四种蛋白质均能诱导脾脏细胞产生较高水平的抗原特异性IFN-γ,浓度分别为10 582.14 ng/L、13 635.97 ng/L、14 213.15 ng/L和9 657.35 ng/L.三次免疫后经静脉强毒攻击,四价苗组小鼠肺脏和脾脏的载菌数分别减少到阴性组的1/650和1/130.对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体免疫的小鼠肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的70%～80%,而四价苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,肺泡轮廓清晰.研究首次证实,Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3 4种结核杆菌抗原蛋白编码基因组成的四价DNA疫苗,具有很高的免疫应答水平和保护效率.
- 顾田园蔡宏田霞余大海朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌抗原蛋白免疫原性
- DDA提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2
- 2006年
- 将编码结核杆菌的三种抗原Ag85B，MPT64，MPT83的基因片段分别插入到真核表达载体中，混合后作为组合疫苗免疫小鼠，DDA作为佐剂提高了三价疫苗的免疫原性和免疫保护效果。添加DDA后Ag85B，MPT64，MPT83抗原特异的IFN-γ的含量分别为（265．37±79．2）U／ml，（185．31±58．3）U／ml，（108．13±54．4）U／ml，分别比非佐剂组高16U／ml，45U／ml，2U／ml。IL-4的含量在各组中相差不多，仅为纳克级。攻毒后细菌计数结果显示，肺脏和脾脏的载菌量在添加佐剂的三价组中降低了三个数量级，都达到了未加佐剂组相应脏器的一半菌量。病理切片显示结果与载菌量一致，添加佐剂组肺部淋巴细胞相对较少，巨噬细胞增多。因此，DDA作为佐剂提高了组合疫苗的免疫效果。
- 余大海田霞蔡宏朱玉贤
- 关键词：结核分支杆菌免疫效果
- Ag85B核酸疫苗的免疫原性和保护性研究被引量：9
- 2004年
- 扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴度达到 1:10 2 4 0 0 ,(γ -干扰素测定表明 ,免疫动物的干扰素含量达到 116 0 3± 10 4 pg /ml。实验结果说明Ag85B核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答。三次免疫后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏和脾脏的细菌数比对照空载体组分别减少了 1 5和 15倍以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。
- 呼西旦蔡宏李淑霞田霞朱玉贤
- 关键词：核酸疫苗免疫原性
- 结核分支杆菌MPT83在真核、原核表达载体中的克隆、表达与鉴定被引量：3
- 2003年
- 为了克隆、鉴定和表达结核分支杆菌抗原蛋白 MPT83 ,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础。以结核分支杆菌标准菌株 H3 7RV基因组 DNA为模板 ,PCR扩增目的基因 mpt83 ,扩增产物酶切后分别克隆到真核、原核表达载体 p JW43 0 3和p ET2 2 b( +)中 ,构成重组真、原核表达载体 83eu和 MPT83。经酶切和序列鉴定为正确的重组真核表达载体 83 eu和重组原核表达载体MPT83 ,分别转染 COS7细胞和转化 BL2 1( DE3 ) plys S。结果表明 ,经 SDS-PAGE、Westernblotting检测显示 ,IPTG诱导的原核表达载体MPT83在 2 .6万处有正确而特异的蛋白条带 ;转染 COS7细胞的真核表达载体 83 eu。
- 田霞呼西旦潘怡朱玉贤蔡宏
- 关键词：分支杆菌真核原核克隆
