林建萍
- 作品数：12 被引量：26H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤微环境中过表达的IL-6对大鼠间充质干细胞恶性转化的影响被引量：10
- 2012年
- 目的分析肿瘤微环境中异常高表达的白介素6(IL-6)是否可导致间充质干细胞(MSCs)的恶性转化。方法 ELISA法检测肿瘤微环境与正常微环境中IL-6的表达差异。以肿瘤微环境中相应水平IL-6处理的MSCs为实验组,正常微环境中相应水平IL-6处理的MSCs作为正常对照组。采用免疫荧光法检测各组STAT3蛋白表达情况;通过细胞生长曲线观察各组MSCs增殖能力的变化;采用免疫荧光定量PCR和Western blotting检测p53和MDM2的蛋白及mRNA表达变化;通过裸鼠成瘤实验检测各组MSCs的体内成瘤能力。结果肿瘤微环境中IL-6的表达量为191.23±16.80pg/ml,明显高于正常微环境(0.82±0.12g/ml,P<0.01)。实验组90%±7%的MSCs表达STAT3蛋白,主要集中于细胞核,为激活状态,而对照组未检测到STAT3表达。细胞生长曲线显示,2个月后实验组MSCs生长接触抑制减弱。细胞培养2个月后,与对照组比较,实验组p53蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.01),MDM2蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。实验组MSCs培养2个月后,接种裸鼠皮下可形成肿瘤,而对照组接种后未见肿瘤形成。结论肿瘤微环境中过表达的IL-6具有促进MSCs恶性转化的作用。
- 刘建平朱静田杰刘官信鲁荣林建萍
- 关键词：间质干细胞白细胞介素6肿瘤微环境
- Islet-1诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞分化过程中对心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化的促进作用
- 目的 研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因GATA4,NKX2.5,MEF2c上组蛋白乙酰化水平的变化情况.方法 Islet-1基因慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞...
- 鲁荣林建萍尹耐靖朱静
- 关键词：乙酰化
- 小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒载体的构建被引量：3
- 2011年
- 目的构建高效沉默小鼠Islet-1基因的慢病毒载体。方法针对小鼠Islet-1基因设计3个RNAi靶序列,合成相应的短发卡RNA(shRNA)寡核苷酸序列(oligo):Sh1、Sh2、Sh3,分别插入经酶切后的PLVTHM载体。经PCR和测序方法筛选阳性克隆,抽提阳性克隆质粒经大肠埃希菌扩增后,与其辅助包装质粒共同感染293T细胞制备慢病毒载体,利用斑形成试验测定病毒滴度。感染C3H10T1/2细胞株,以流式细胞仪检测其感染效率、荧光定量PCR检测其干扰效率。结果与正常C3H10T1/2细胞比较,测序及PCR结果显示目的片段插入正确;病毒滴度值为3.87×108TU/ml;慢病毒载体对C3H10T1/2细胞感染效率达90.36%;3个靶点(抑制效率分别为76.8%5、5.1%和11.7%)均有干扰效果,与正常细胞比较,Sh1靶点干扰效果最为显著(76.8%,P<0.05)。结论成功构建高效沉默Islet-1基因慢病毒载体。
- 智深深朱静田杰刘官信鲁荣林建萍刘建平
- 关键词：慢病毒感染RNA干扰细胞分化
- Islet-1诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞分化过程中心肌特异性蛋白基因上组蛋白乙酰化水平的降低对其与Islet-1结合的影响
- 目的 本文将从表观遗传组蛋白乙酰化修饰的角度,来探讨心肌基因上组蛋白乙酰化水平的降低对其与Islet-1结合的影响.方法 根据Islet-1基因慢病毒对小鼠骨髓间充质干细胞C3H10的感染共分为三组：正常C3H10T1/...
- 鲁荣林建萍尹耐靖朱静
- 关键词：乙酰化
- Islet--募集组蛋白乙酰化复合体促干细胞特化心肌样细胞的研究
- 目的 筛选并鉴定转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞特化心肌样细胞过程中Islet-1募集的组蛋白乙酰化复合体；明确Islet-1在C3H10T1/2细胞特化乙酰化心肌样细胞调控网络中的关键枢纽作用.方法...
- 林建萍鲁荣尹耐靖朱静
- 关键词：心肌样细胞组蛋白乙酰化
- Islet-1募集组蛋白乙酰化复合体促干细胞特化心肌样细胞的研究
- 目的：筛选并鉴定转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞特化心肌样细胞过程中Islet-1募集的组蛋白乙酰化复合体;明确Islet-1在C3H10T1/2细胞特化乙酰化心肌样细胞调控网络中的关键枢纽作用。 ...
- 林建萍
- 关键词：C3H10T1/2细胞心肌样细胞
- lslet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌细胞分化
- 筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的MSCs转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的乙酰化酶(HATs)或去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键...
- 林建萍朱静田杰吕铁伟鲁荣邓兵刘建平智深深
- 关键词：慢病毒转染心肌样细胞乙酰化
- 文献传递
- 小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其诱导C_3H_(10)T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化被引量：8
- 2011年
- 目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位。结果 PCR及测序显示目的片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌早期发育相关基因GATA-4、MEF2C、NKx2.5在检测到荧光蛋白1周后升高,2周到达高峰,3周后可检测到心肌特异性蛋白cTnT(0.582±0.0576),其时序性表达呈随时间增强趋势;cTnT表达于胞质;肝脏系统特异性标志AFP及ALB、骨骼系统特异性标志BGP及BALP、神经系统特异性标志Nestin及GFAP均未表达。结论 Islet-1具有特异性促进干细胞向心肌样细胞分化的作用。
- 智深深田杰刘官信鲁荣林建萍刘建平朱静
- 关键词：慢病毒表达载体心肌样细胞
- lslet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌细胞分化
- 林建萍朱静田杰吕铁伟鲁荣邓兵刘建平智深深
- Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化被引量：4
- 2012年
- 目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs。结果诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞质表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高(0.782±0.015)。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。
- 林建萍田杰刘官信鲁荣刘建平智深深朱静
- 关键词：C3H10T1/2细胞心肌样细胞组蛋白乙酰化
