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旋毛虫属分类的研究进展被引量：3: 2006年; 近年来,随着遗传学、生物学和生物化学的发展,已将旋毛虫属分为8个种和3个分类地位尚未定的基因型。文章就不同种和基因型的旋毛虫,分别具有的不同宿主、环境选择因素和世界性分布区域做一综述。; 崔国祯王学林刘明远夏慧卿邓洪宽杨志东孙磊谭业平; 关键词：旋毛虫病

旋毛虫T668基因转录及表达的时空特性鉴定被引量：3: 2008年; 采用RT-PCR和免疫荧光染色技术,分别检测T668基因mRNA及蛋白在旋毛虫不同发育时期中的时空表达情况。RT-PCR结果显示,该基因从旋毛虫新生幼虫出生即开始转录,随着日龄的增加,T668基因mRNA逐渐减少,在感染后11～14 d T668基因的转录趋于停止。免疫荧光染色结果表明,在感染后1d,旋毛虫虫体即有T668蛋白表达;感染后6～13d,T668蛋白分泌到肿大的肌细胞核上;14～20d,肿大的肌细胞核上基本观察不到T668蛋白,但整个虫体仍有很强的蛋白表达。这提示在旋毛虫的寄生过程中,T668基因的转录及表达呈一定的时空特点,这可能对旋毛虫包囊形成有着重要作用。; 王学林王心蕊吴秀萍孙磊于申业李文辉刘明远; 关键词：旋毛虫 RT-PCR 免疫荧光

大豆再生植株抗草铵膦的筛选方法研究被引量：4: 2010年; 为解决农杆菌介导的大豆子叶节转化试验中草铵膦筛选所得转基因后代假阳性高的问题,采用浸种法、根吸法、叶片涂抹法、叶片喷洒法4种筛选方法和多种筛选浓度对大豆再生植株及其后代抗性进行筛选。结果采用1∶200草铵膦浓度的叶片喷洒法效果最佳。叶片喷洒法筛选6802株转化植株,获得了9株抗性植株,其后代的分子检测表明均为阳性植株。因此,采用叶片喷洒法对大豆抗草铵膦植株进行筛选的方法简便可行。; 孙磊韩俊友李宏宇; 关键词：大豆再生植株草铵膦

鼠脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅱα)基因的克隆及原核表达: 2009年; 根据鼠脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNaseⅡ)基因设计引物,通过RT-PCR扩增出鼠DNaseⅡα基因片段,克隆到pMD-18T载体,然后转化至大肠杆菌JM109。经鉴定及序列测定,克隆基因与鼠DNaseⅡα基因序列完全一致,大小为1 008 bp。将重组质粒pMD-DNaseⅡα进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经PCR和双酶切鉴定及序列分析正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,然后进行初步纯化,Western-blot鉴定。结果表明,本试验成功构建了pET-28a-DNaseⅡα表达载体;表达产物以包涵体形式存在,相对分子质量约为38 800;初步纯化的目的蛋白在SDS-PAGE图谱上呈单一条带,Western-blot鉴定能与抗体发生特异免疫反应。; 王卫芳刘明远欧阳红生吴秀萍王学林刘玛峰杨勇孙磊王子见张瑞于艳玲; 关键词：克隆原核表达

噬菌体展示文库筛选技术的研究进展被引量：3: 2007年; 噬菌体展示技术是将编码外源蛋白或多肽的基因片段定向插入到噬菌体的外壳蛋白基因区,使外源蛋白或多肽通过与噬菌体外壳蛋白融合而表达并展示于噬菌体表面,进而筛选表达特异蛋白或多肽的噬菌体,已发展成为生物学后基因组时代一个强有力的实验技术.噬菌体展示文库的筛选是其关键环节.为了提高筛选效率,许多研究者对传统的筛选技术进行了改进,如选择性感染噬菌体、迟延感染性噬菌体、以DNA为基础的筛选方法、亲合力捕获和反复筛选和封闭筛选法等,用于筛选的靶标也越来越具有多样性,使得这一技术有了更加广阔的发展前景.; 夏慧卿邓洪宽孙磊崔国祯刘相叶于艳玲吴秀萍王学林刘明远; 关键词：噬菌体展示文库

猪副粘病毒感染的电镜诊断及病毒的分离被引量：1: 2008年; 采用电镜负染技术对长春市某猪场病死仔猪的肠道内容物、肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、脑等组织进行了观察。结果在肠道内容物中发现大量副粘病毒,同时在肾脏、肝脏和肺脏中也发现数量不等的副粘病毒,在脾脏和脑组织中未发现病毒粒子。取肾脏为病料,采用同步培养方法接种于PK细胞系进行病毒的分离培养。结果表明,电镜负染技术可对猪感染副粘病毒进行快速诊断,该方法操作程序简便,速度快,从取样到结果判定在1h之内即可完成。细胞分离培养结果证实此病例中的猪副粘病毒可在PK细胞中克隆增殖,并引起细胞典型的病变(CPE)。; 周玉王心蕊孙磊张茂林李金栋沈庆风柳增善池鹤松吴丹刘静秋; 关键词：副粘病毒电镜诊断病毒培养

GmCRY1基因转化大豆及功能鉴定分析: 大豆是我国五大作物之一,在国民经济中具有重要地位。隐花色素基因(CRY)广泛存在于动物、植物和微生物中,它对动植物及微生物的生命活动有着重要的作用。有研究报道隐花色素在植物的光形态建成、生物钟调控方面起重要作用。本研究...; 孙磊; 关键词：大豆; 文献传递

脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞心肌样分化特性的比较被引量：3: 2007年; 目的:骨髓间充质干细胞与脂肪干细胞均具有分化为心肌细胞的潜能。观察脂肪干细胞体外诱导分化为心肌细胞的特性及相关基因表达,比较骨髓间充质干细胞与脂肪干细胞心肌分化能力的差异。方法:实验于2006-08/2007-04在吉林省耳鼻咽喉研究所和教育部吉林大学人兽共患病重点实验室完成。①实验材料:脂肪组织标本来源于本院手术患者,所有患者知情同意,术中收集多余的皮下脂肪。②实验方法:分离培养人脂肪干细胞,用5-氮胞苷诱导传4～6代的脂肪干细胞分化,平行培养第5代骨髓间充质干细胞,诱导条件相同,对照组培养液不添加任何诱导因子。③实验评估:采用免疫荧光技术观察脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞表达结蛋白Desmin和肌钙蛋白Troponin T的阳性细胞率。通过即时RT-PCR的方法检测诱导过程中细胞内GATA-4和NKX2.5的mRNA水平。结果:脂肪干细胞经5-氮胞苷诱导后3周,肌性基因标志结蛋白desmin和肌钙蛋白Troponin-T阳性细胞明显增加。与骨髓间充质干细胞组比较,脂肪干细胞表达心肌特异蛋白的阳性细胞率在诱导后第14天明显升高,而在第21天时,两组细胞的阳性表达率均达到60%左右,无明显的统计学差别,未加任何诱导条件的脂肪干细胞对照组培养14d时有2.5%和1.6%的细胞表达Desmin,Troponin-T,在骨髓间充质干细胞对照组未见心肌标记蛋白的阳性表达。即时PCR检测结果发现,诱导组与未经诱导组的脂肪干细胞均表达GATA-4和NKX2.5,骨髓间充质干细胞组在诱导后第7天出现GATA-4和NKX2.5的转录活性。结论:体外培养的脂肪干细胞能够被5-氮胞苷诱导分化为心肌样细胞,并且具有自发分化的能力,与骨髓间充质干细胞相比,脂肪干细胞的早期分化特性更有利于心肌干细胞移植治疗。; 王苹王心蕊李叔强孙磊刘明远; 关键词：脂肪干细胞骨髓间充质干细胞心肌细胞分化

RNA干扰技术在寄生虫基因功能研究中的应用: 2007年; RNA干扰（RNAi）技术是近几年发现的一种基因沉默技术，已成为分析寄生虫基因功能的有效手段，它为基因治疗、药物阻断剂候选基因的筛选等方面的研究提供了新方法。该文对RNAi技术的发现、作用机制、分子特征及其在寄生虫基因功能研究中的最新进展作一综述。; 孙磊邓洪宽刘明远夏慧卿刘马峰崔国祯; 关键词：RNA干扰基因沉默寄生虫基因功能

DNA多态性分析技术在旋毛虫虫种分类上的应用: 2007年; 于艳玲刘相叶夏惠卿邓洪宽孙磊刘明远; 关键词：旋毛虫病多态性分析虫种

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