吴秀萍 作品数:104 被引量:387 H指数:11 供职机构: 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 国家杰出青年科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
旋毛虫p46000抗原基因的转录及表达特性鉴定 被引量:5 2009年 根据旋毛虫p46000抗原基因和葡萄糖3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列设计特异引物,以不同发育时期旋毛虫总RNA为模板进行SYBRGreen染料法实时定量RT-PCR检测p46000基因转录情况。制作不同发育时期旋毛虫虫体及感染组织石蜡切片,采用免疫荧光染色技术检测p46000抗原的表达及定位情况。结果显示,p46000抗原基因在旋毛虫不同发育时期均有转录,但转录水平有明显差异,转录高峰集中于成虫和肌幼虫期,新生幼虫期明显低于其他时期。天然p46000抗原蛋白定位于杆状体和虫体表面,表达高峰集中于成虫、肠道期及成囊期肌幼虫。表明,p46000抗原基因的转录与表达具有一定的时空特异性,该基因在旋毛虫的寄生过程中尤其在早期感染中具有重要作用且可能与旋毛虫的免疫逃避有关。 于申业 吴秀萍 王学林 于录 王心蕊 杨勇 冯晓静 刘明远关键词:旋毛虫 实时定量RT-PCR 免疫荧光 喜树碱对NIH/3T3细胞TLR3表达及活化的影响 2012年 为研究喜树碱(CPT)对小鼠成纤维细胞NIH/3T3中Toll样受体3(TLR3)的表达及活化的影响,本实验利用CCK-8试剂盒测定了CPT在不同浓度下、不同作用时间对NIH/3T3细胞的毒性作用,并确定CPT对NIH/3T3细胞的基本无毒浓度为1μg/mL。通过流式细胞术检测CPT作用NIH/3T3细胞表明,TLR3平均荧光强度与对照组相比显著增强,表明TLR3表达增加。此外,ELISA试剂盒检测结果显示CPT作用后IFN-β表达量增加,并高于阳性对照组,差异极显著(p<0.01)。本研究表明CPT对NIH/3T3细胞的TLR3具有显著的激动作用。 刘学 张馨月 吴秀萍 白雪 李慧萍 郭恒 孙树民 王学林 刘明远关键词:喜树碱 激动剂 3种培养基中芽囊原虫生长状况观察 被引量:4 2016年 目的观察芽囊原虫在不同培养基中的生长状况,筛选合适的芽囊原虫培养方法。方法将10份芽囊原虫阳性粪便分别接种至Jone’s液、vitro液、1640 3种培养基中培养,选取生长情况良好、虫密度高的一份粪便传代培养后等量接种至3种不同的培养基中,每24 h计数虫体数量一次,连续观察10 d,并观察芽囊原虫的形态学变化和生长情况。结果10份粪便分别接种至3种培养基中培养,48 h后发现1640和Jone’s液中的虫密度高于vitro液。同一份粪便接种至3种不同培养基中连续观察10 d,结果表明3种培养基中虫体生长呈规律变化,均在接种后3、6、9 d出现生长高峰;Jone’s液中芽囊原虫密度最高。vitro液中观察到的虫体形态最清晰,且富有活力;Jone’s液中能观察到虫体多种繁殖状态。结论Jone’s液适于芽囊原虫的生长繁殖,可作为首选培养基;vitro液可作为观察芽囊原虫生长情况的首选培养基。 俞英昉 吴秀萍 储言红 陈家旭 田利光关键词:芽囊原虫 体外培养 培养基 VITRO 旋毛虫新生幼虫期特异性T668全长cDNA的克隆及序列分析 被引量:8 2002年 利用旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA片段 T6 6 8- SS2作为核酸探针 ,在新生幼虫 c DNA文库中筛选出 10个阳性克隆。序列测定及分子生物学软件分析表明 ,克隆 G10 - 6的 c DNA片段全长 16 0 0 bp,含 12 90 bp的开放阅读框架 ,编码 1个由 4 30个氨基酸残基组成的多肽 ,其相对分子质量理论推导值为 4 6 84 0 ,等电点 (PI)为 9.6 5。主导氨基酸为Ser(11.39% )和 Thr(10 .93% )。开放阅读框架中具有丝氨酸蛋白酶保守功能区及酶活性位点结构 ,其 N末端的信号肽及 2个糖基化位点表明 ,其为分泌性糖蛋白 ,预示其可能在细胞外起着重要作用。DNA同源性分析表明 ,该 c DNA为一新的 c DNA分子。 刘明远 付宝权 吴秀萍 卢强 任瑞文 姚春雨 牛廷献 张西臣 黎诚耀 P.Boireau关键词:旋毛虫 克隆 旋毛虫T668基因转录及表达的时空特性鉴定 被引量:3 2008年 采用RT-PCR和免疫荧光染色技术,分别检测T668基因mRNA及蛋白在旋毛虫不同发育时期中的时空表达情况。RT-PCR结果显示,该基因从旋毛虫新生幼虫出生即开始转录,随着日龄的增加,T668基因mRNA逐渐减少,在感染后11~14 d T668基因的转录趋于停止。免疫荧光染色结果表明,在感染后1d,旋毛虫虫体即有T668蛋白表达;感染后6~13d,T668蛋白分泌到肿大的肌细胞核上;14~20d,肿大的肌细胞核上基本观察不到T668蛋白,但整个虫体仍有很强的蛋白表达。这提示在旋毛虫的寄生过程中,T668基因的转录及表达呈一定的时空特点,这可能对旋毛虫包囊形成有着重要作用。 王学林 王心蕊 吴秀萍 孙磊 于申业 李文辉 刘明远关键词:旋毛虫 RT-PCR 免疫荧光 旋毛虫病诊断方法研究综述 被引量:9 2017年 旋毛虫病对畜牧业及人类健康造成了严重危害。本文对动物及人类旋毛虫病的诊断方法进行了综述,如病原学诊断方法(包括压片镜检法和集样消化法)、免疫学诊断方法(包括抗体检测、循环抗原检测和蛋白芯片技术)、分子生物学诊断方法(包括聚合酶链反应技术和环介导等温扩增技术)以及基因芯片技术,分析了现有研究方法的优点和不足,为后续寻找更快速、高效、便捷、准确的诊断方法提供理论参考。 翟铖铖 陈家旭 陈韶红 吴秀萍关键词:旋毛虫 旋毛虫病 云南省腾冲市住院患者人芽囊原虫感染情况及影响因素研究 被引量:12 2019年 目的了解云南省腾冲市住院人群人芽囊原虫感染情况及其影响因素。方法采用横断面调查的方法对云南省腾冲市人民医院的住院人群进行问卷调查,并采集粪便,提取核酸进行PCR检测。采用单因素分析和Logistic回归分析的方法对人芽囊原虫感染的影响因素进行分析。结果研究共招募507名研究对象,其年龄中位数为52岁(95% CI :51—55),其中男性260人,年龄中位数为53岁(95% CI :53—55),女性247人,年龄中位数为51岁(95% CI :49—54)。人芽囊原虫的感染率为9.47%(48/507,95% CI :7.13—12.44)。非水冲厕所( OR =3.248,95% CI :1.245—8.473)、饮用生水( OR =3.11,95% CI :1.557—6.213)和贫血( OR =2.601,95% CI :1.245—8.473)与人芽囊原虫的感染的有统计学关联。人芽囊原虫感染和腹胀( OR =0.284,95% CI :0.067—1.199)、食欲不振( OR =0.762,95% CI :0.330—1.758)、皮肤瘙痒( OR =0.82,95% CI :0.312—2.156)和便秘( OR =1.462,95% CI :0.621—3.419)都没有统计学关联。结论人芽囊原虫感染率较高,非水冲厕所和饮用生水是影响人芽囊原虫感染的主要因素。提高健康教育知识,改善卫生条件可降低人芽囊原虫的感染。 江涛 王加志 俞英昉 滕雪娇 储言红 吴秀萍 李伊婷 张顺先 陈家旭 田利光关键词:人芽囊原虫 住院人群 旋毛虫脱氧核糖核酸酶-Ⅱ酶活及酶活性位点的鉴定 被引量:3 2010年 以旋毛虫新生幼虫期(NBL)脱氧核糖核酸酶-Ⅱ(DNaseⅡ)基因家族中全长序列T31D4为研究对象,对其融合蛋白的核酸酶活性进行鉴定并摸索最佳酶切条件;通过序列分析预测其关键活性氨基酸位点,同时利用基因点突变技术对所预测的位点进行验证。结果表明:旋毛虫的DNaseⅡ具有核酸酶酶切活性,最佳酶切pH为5.0,同时发现其在中性(pH 7.0)及偏碱性(pH 8.0)下仍具有活性。利用Maga2软件对包括旋毛虫在内的以及业已发现的来自38个物种的DNaseⅡ的94个氨基酸序列进行比对,发现一个所有物种DNaseⅡ均高度保守的组氨酸位点,该结果与目前国际上所预测的DNaseⅡ关键活性氨基酸位点不同,目前国际上所预测的组氨酸位点在旋毛虫的DNaseⅡ序列中并非组氨酸(H),而是丝氨酸(S)或赖氨酸(K);通过点突变技术进一步验证这个组氨酸位点才是所有物种DNaseⅡ真正的活性氨基酸位点。同时推测旋毛虫的DNaseⅡ可能为一种新类型的DNaseⅡ。 吴秀萍 于录 王学林 龙明慧 Boireau P 刘明远关键词:旋毛虫 酶活性 活性位点 旋毛虫不同发育时期基因差异表达分析 一步了解旋毛虫各个发育阶段的生理特征,并揭示与旋毛虫发育及宿主相互作用相关基因的表达特征,本实验通过采用高通量测序技术,对旋毛虫各个时期基因表达特征进行了深入研究,为发现新的药物作用靶点以及疫苗研发提供基础.构建高质量的... 刘晓雷 孙尧 王艳凤 白雪 吴秀萍 王学林 陈启军 刘明远关键词:兽医学 旋毛虫 高通量测序 基因差异表达 巴贝虫感染的免疫应答 被引量:2 2015年 巴贝虫的感染伴随着复杂的免疫应答过程,现有的研究显示机体的免疫力与巴贝虫感染的发生、发展、愈后有着密切的关系。该文主要是从巨噬细胞、自然杀伤细胞的固有免疫应答及B细胞、T细胞等的获得性免疫应答等方面来阐述机体感染巴贝虫后的免疫作用及其机制。 吴芬 陈韶红 吴秀萍 陈家旭关键词:免疫应答 固有免疫 获得性免疫