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免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗细胞免疫检测方法的建立: 2011年; 目的建立免疫复合型增效乙型肝炎疫苗细胞免疫检测方法并与常规乙型肝炎疫苗进行比较。方法增效乙型肝炎疫苗肌内免疫BALB/c小鼠，Elispot方法检测小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞频数（SFC），优化实验条件：免疫剂量、检测时间和特异性刺激物及刺激浓度。同时将增效乙型肝炎疫苗与常规乙型肝炎疫苗进行比较。结果5μg免疫组IFN-γ SFC明显高于2μg免疫组，初次免疫后3周IFN-γ SFC开始下降，多肽刺激IFN-γ SFC高于蛋白刺激，多肽浓度为2μg即可充分刺激斑点形成；增效乙肝疫苗免疫组IFN-γ SFC高于常规乙型肝炎疫苗组。结论初步建立了免疫复合型增效乙型肝炎疫苗细胞免疫检测方法并证明其重复性良好，其细胞免疫水平高于常规乙型肝炎疫苗。; 王娟吴刚赵莉李计来许丽锋徐静; 关键词：乙型酶试验

不同乙型肝炎表面抗原配制的免疫复合物的免疫原性被引量：1: 2007年; 目的研究不同乙型肝炎表面抗原配制的免疫复合物(IC)的免疫原性,并进一步优选治疗性乙型肝炎疫苗最佳抗原。方法用不同重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与不同的乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)制备IC,分别免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫及细胞免疫应答水平。结果IC诱生的抗-HBs效价、抗-HBsIgG2a/IgG1的比值及IFN-γ形成细胞数,YHB-IC组总体上略高于CHO-IC组,但差异无显著意义。结论IC的免疫效果优于单独HBsAg;不同乙型肝炎表面抗原配制的IC之间免疫原性差异无显著意义。; 许丽锋徐静王娟赵莉吴刚; 关键词：乙型肝炎表面抗原乙型肝炎表面抗体免疫复合物体液免疫细胞免疫

乙型肝炎免疫复合物检测方法的建立和优化: 2007年; 目的建立和优化直接检测乙肝免疫复合物（IC）的方法。方法建立补体Clq固相ELISA、鼠抗-HBs固相ELISA、补体消耗试验等三种检测乙肝IC的方法，并对试验条件进行优化。结果三种方法均可检测出乙肝IC，都有较高灵敏度和重复性。结论选择鼠抗-HBs固相ELISA作为直接检测乙肝IC的最佳方法。; 许丽锋王娟徐静石男吴刚; 关键词：肝炎乙型免疫复合物病酶联免疫吸附测定补体结合试验

免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法的建立被引量：1: 2011年; 目的建立免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法。方法分别应用酸性缓冲液Gly-HCl、HAc-NaAc、Na2HPO4-CA、CA-NaCA和表面活性剂DEA-T处理免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗,采用ELISA法检测处理后疫苗中的HBsAg和HBIG,筛选最佳缓冲液;对鉴别试验的反应条件(pH值、反应时间、反应温度)进行优化;并对鉴别试验的精密性进行验证。结果选择CA-NaCA缓冲液作为免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验的样品处理缓冲液,其既具有解离抗原抗体复合物的作用,又能使铝佐剂与吸附的蛋白质解离;鉴别试验最适pH值为3.0,最佳反应温度为25℃,最佳反应时间为30 min;该鉴别试验方法精密性良好。结论建立了免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗鉴别试验方法,为该疫苗的检定方法提供了必要的补充。; 王娟赵莉吴刚许丽锋徐静; 关键词：抗原抗体复合物

乙型肝炎病毒核心抗原与前S1抗原融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性: 2011年; 目的原核表达、纯化乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)(1～155)与前S1抗原(PreS1)(3～55)融合蛋白,并分析其免疫原性。方法从HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,以其为模板,PCR分别扩增HBcAg和preS1部分基因片段及融合基因CS1,将CS1基因亚克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET-CS1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经纯化后进行SDS-PAGE、HPLC和Western blot等分析。将纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用竞争抑制法检测血清Anti-HBc水平,间接ELISA法检测Anti-PreS1水平,并检测抗体亚类;ELISPOT法评价其细胞免疫效果。结果重组原核表达质粒pET-CS1经双酶切证明构建正确;电镜分析表明粗纯的CS1可自行组装成病毒样颗粒(VLP),直径约为30 nm;SDS-PAGE和HPLC分析显示,CS1蛋白纯度分别为98.2%和93%;纯化的CS1蛋白可与兔抗人HBcAgr多抗和鼠抗人PreS1单抗特异结合,并能诱导小鼠产生Anti-HBc和Anti-PreS1抗体,抗体亚类以IgG2a为主,并能够诱生小鼠脾细胞产生HBcAg特异性的IFNγ。结论已成功原核表达并纯化了融合蛋白CS1,纯化的CS1纯度较高,能诱导机体产生较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫反应。; 吴刚李计来王娟赵莉徐静; 关键词：前S1抗原重组融合蛋白质类体液免疫细胞免疫

乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒在疫苗研究中的应用被引量：3: 2011年; 乙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis B core antigen,HBcAg）病毒样颗粒（virus like particles,VLP）具有独特的颗粒型结构和免疫学特性.近30年来,人们利用其自身免疫原性、载体蛋白特性和免疫佐剂特性,对HBcAg-VLP在疫苗领域的应用进行了深入的研究.本文就上述研究进展进行综述.; 吴刚徐静; 关键词：乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒疫苗免疫学特性免疫原性免疫佐剂

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吴刚

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