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许丽锋: 作品数：35 被引量：91H指数：4; 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

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免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗细胞免疫检测方法的建立: 2011年; 目的建立免疫复合型增效乙型肝炎疫苗细胞免疫检测方法并与常规乙型肝炎疫苗进行比较。方法增效乙型肝炎疫苗肌内免疫BALB/c小鼠，Elispot方法检测小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞频数（SFC），优化实验条件：免疫剂量、检测时间和特异性刺激物及刺激浓度。同时将增效乙型肝炎疫苗与常规乙型肝炎疫苗进行比较。结果5μg免疫组IFN-γ SFC明显高于2μg免疫组，初次免疫后3周IFN-γ SFC开始下降，多肽刺激IFN-γ SFC高于蛋白刺激，多肽浓度为2μg即可充分刺激斑点形成；增效乙肝疫苗免疫组IFN-γ SFC高于常规乙型肝炎疫苗组。结论初步建立了免疫复合型增效乙型肝炎疫苗细胞免疫检测方法并证明其重复性良好，其细胞免疫水平高于常规乙型肝炎疫苗。; 王娟吴刚赵莉李计来许丽锋徐静; 关键词：乙型酶试验

人巨细胞病毒gB基因真核表达载体的构建与鉴定被引量：4: 2004年; 目的　克隆人巨细胞病毒 (HCMV)gB基因并构建真核表达载体。方法　根据Genebank中HCMV核苷酸序列设计引物 ,并在引物的 5′端分别加入BamHⅠ、XhoⅠ限制性内切酶位点 ,特异性扩增gB编码基因片段。TA克隆后经双酶切、PCR、测序等鉴定重组质粒 ,再经双酶切、连接构建含HCMVgB编码基因的真核表达载体 ,转染COS7细胞 ,通过间接免疫荧光法 (IFA)检测该重组真核表达载体在COS7细胞中的表达。结果　重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切成大小为 5 0kb与 2 7kb的片段 ,表明表达载体pcDNA3 1中插入了HCMVgB基因片段 ,测序结果表明读码框正确。重组表达载体pcDNA3 1 gB转染COS7细胞后 ,经IFA检测胞浆中可见黄绿色荧光。结论成功构建了pcDNA3 1 gB真核表达载体。; 许丽锋张中洋李秀玲何薇薇; 关键词：人巨细胞病毒 GB基因真核表达载体重组质粒

治疗性乙型肝炎疫苗的免疫效应被引量：10: 2006年; 目的观察治疗性乙型肝炎（乙肝）疫苗（重组乙肝表面抗原和高效价抗乙肝免疫球蛋白组成的免疫复合物，简称乙肝疫苗）Ⅰ期临床研究中诱生的免疫应答作用。方法用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定乙肝疫苗诱生的抗乙型肝炎表面抗原（HBSAg）抗体免疫球蛋白亚类；用。HTdR掺入法进行非特异性和特异性淋巴细胞转化试验；用流式细胞术检测细胞因子，使用BD-CBA试剂盒。结果所有志愿者中，乙肝疫苗诱导产生抗HBSAg抗体，其IgG免疫球蛋白亚类结果显示，所有受试者（20／20）为IgG1、IgG3双阳性和IgG2和IgG4双阴性，IgG1、IgG3双阳性者中IgG1均强于IgG3，但每个受试者之间强弱程度有所不同。淋巴细胞转化试验结果显示，80％（4／5）的志愿者重组HBSAg特异性淋转刺激指数（SI）大于2．0，植物血凝素非特异性淋转刺激指数和重组HBSAg特异性淋转刺激指数无相关性。细胞因子检测结果显示，第一次注射乙肝疫苗后42d，干扰素v，白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子α和注射前相比，没有显著变化，而在71d时所有志愿者（8／8）干扰素γ和7名志愿者（7／8）IL-2高于注射前（P值〈0．01或P〈0．05）；而其他4种细胞因子在注射后71d没有显著性变化（P值均〉0．05）。结论治疗性乙型肝炎疫苗在健康受试者中有效地诱导出特异性体液免疫和细胞免疫。; 刘顺爱徐道振张剑平黄克林姚均许丽锋袁正宏闻玉梅; 关键词：乙型治疗性免疫应答

人乳头瘤病毒16型L1/E7嵌合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达: 2006年; 目的克隆人乳头状瘤病毒16型（HPV16）L1／E7嵌合蛋白基因，并在毕赤酵母中表达。方法 PCR扩增HPV16L1／E7基因，并克隆至毕赤酵母表达载体pPIC-3．5K和pPIC-9K中，构建含HPV16L1／E7基因的pPIC3．5K—HPV16L1／E7和pPIC9K—HPV16L1／E7重组表达载体，经测序证实插入的外源基因读码框正确后，分别转入GS115和KM71菌株中，筛选阳性转化菌株，经PCR鉴定，甲醇诱导表达HPV16L1／E7嵌合蛋白，经SDS—PAGE和Western blot鉴定，电镜观察，并经离心法纯化VLPs。结果 HPV16LI／E7基因已成功插入pPIC-3．5K和pPIC-9K载体中，共获得6株KM71HPV16L1／E7-pPIC3．5K、5铢GS115HPV16L1／E7-pPIC3．5K、1株KM71HPV16L1／E7-pPIC9K和2株GS115HPV16L1／E7-pPIC9K阳性转化菌株，并可表达相对分子质量约为69000的蛋白，与预期值一致。表达量约为0．35～1．04mg／ml。Western blot显示该蛋白可与抗-HPV16L1蛋白和抗-HPV16E7蛋白的单克隆抗体特异性结合。在透射电镜下可观察到VLPs的形成，其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。经纯化的目的蛋白纯度接近100％。结论已成功构建了pPIC3．5K—HPV16L1／E7和pPIC9K—HPV16L1／E7重组表达载体，阳性转化菌株可表达结构与野生型HPV16一致的VLPs。; 宋衍燕李秀玲何薇薇张中洋许丽锋; 关键词：人乳头瘤病毒毕赤酵母基因表达

脑心肌炎病毒鉴定方法的初步研究被引量：1: 2013年; 目的摸索建立脑心肌炎病毒（EMCV）鉴定方法。方法根据GenBank中EMCVVR．129B序列设计引物，提取病毒RNA，进行RT．PCR，琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。将DNA测序结果与GenBank中相同毒株EMCV序列进行比对。以RK细胞培养的全病毒作为免疫原制备抗血清，用于建立间接免疫荧光试验（IIFA）及中和试验方法，并验证方法精密性和特异性。制备抗GST—VPl和抗GST．VP2多克隆抗体，与EMCV浓缩液进行免疫印迹反应。结果获得的DNA片段与GenBank中上传的相同毒株EMCV序列进行比对，相似性为98％-100％。采用20100901批抗血清160倍稀释作为一抗，建立IIFA方法，特异性好。检测20100901批抗血清中和效价1：30211，建立的固定病毒．稀释血清中和试验方法特异性、精密性好。抗GST—VPl和GST—VP2抗体与EMCV浓缩液于相对分子质量为33x103左右分别出现清晰单一条带，与理论值相符。结论初步建立了用于EMCV毒株鉴定的RT-PCR、间接免疫荧光、中和试验及免疫印迹方法。; 徐静李树香岳野王欣怡刘敬凌媛许丽锋; 关键词：脑心肌炎病毒间接免疫荧光

治疗性乙型肝炎疫苗研究进展: 2010年; 全球范围内有超过4亿慢性乙型肝炎病毒携带者，这些患者发展为肝硬化和肝癌的危险性较大。现有疗法不能长期控制大多数患者的病毒复制，而治疗性乙型肝炎疫苗因其独特的优点正成为新的研究热点。此文就治疗性乙型肝炎疫苗的分类及最新研究进展加以综述。; 李计来许丽锋徐静

免疫复合物型乙型肝炎疫苗的免疫原性分析被引量：2: 2013年; 目的：分析免疫复合物型乙型肝炎疫苗在小鼠体内和食蟹猴体内的免疫原性。方法免疫复合物型乙型肝炎疫苗单次免疫小鼠，不同时间点采血进行anti-HBs滴度动态检测；不同免疫程序免疫小鼠，进行anti-HBs滴度检测；肌肉注射5μg/只免疫小鼠，ELISPOT方法检测IFN-γ形成斑点数并进行阳转率统计；测定稳定性试验样品的ED50；分别以20μg/只和100μg/只剂量免疫食蟹猴，不同时间点采血检测anti-HBs滴度。结果免疫复合物型乙型肝炎疫苗动态检测anti-HBs滴度均高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）；免疫复合物型乙型肝炎免疫2针次anti-HBs滴度可达到重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）免疫3针次水平；免疫复合物型乙型肝炎疫苗细胞免疫检测IFN-γ斑点形成细胞（ SFC）及阳转率高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）及酿酒乙型肝炎疫苗国家参考品；免疫复合物型乙型肝炎疫苗长期稳定性优于酿酒酵母乙肝疫苗，ED50值低于后者，高低两种剂量免疫食蟹猴，均可诱导高滴度anti-HBs，且持续性良好。结论免疫复合物型乙型肝炎疫苗有较好的免疫原性，其体液免疫和细胞免疫水平均优于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）。; 徐静王娟吴刚周嘉琪单璞李计来许丽锋; 关键词：免疫复合物乙型肝炎疫苗免疫原性

重组大肠杆菌的包涵体被引量：28: 1996年; 白东亭许丽锋; 关键词：重组大肠杆菌包涵体生物制品

麻疹、腮腺炎、风疹三联减毒活疫苗的研制: 韩雅儒王淑珍沙凤环周谦董春明许丽锋朱立李淑云; 1996年10月～2002年12月，自选课题、自筹经费进行了研究。一、概述采用我国自行研制的麻疹、腮腺炎、风疹减毒株，制备高滴度单价疫苗半成品，建立生产麻疹、腮腺炎、风疹三联减毒活疫苗(MMR疫苗)的生产工艺，提高疫...; 关键词：

乙型肝炎疫苗无／低应答的应对策略: 2010年; 乙型肝炎（乙肝）疫苗接种者中约有5％～10％的接种者对乙肝疫苗形低应答。应对乙肝疫苗无应答的策略包括改良疫苗、优化疫苗接种策略及改善机体状况。; 王娟许丽锋徐静; 关键词：乙型接种

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