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应用间接免疫荧光试验检测猪圆环病毒抗体被引量：79: 2002年; 用猪肾传代细胞系PK 15增殖猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )毒株制备抗原 ,建立了检测PCV抗体的间接免疫荧光试验 (IFA)。应用该方法对 64份临床送检血清样品进行了检测。结果 ,3 8份血清呈现PCV抗体阳性 (5 9% )。IFA方法的建立为临床上进行PCV流行病学调查及相关疾病的诊断提供了另一种检测手段。; 芦银华谈国蕾华修国陈德胜陈溥言; 关键词：间接免疫圆环病毒抗体

猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析被引量：33: 2003年; 根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )基因序列 ,设计两对特异性引物 ,用PCR方法从接种疑似PMWS仔猪病料的细胞中分段扩增 2个分离毒株全基因组。将扩增片段克隆入 pGEM Teasy载体 ,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒。对质粒中的插入片段进行测序拼接 ,获得 2株均为 176 8bp的全基因组序列。应用DNAstar序列分析软件 ,对所测PCV 2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行同源性比较 ,并绘制系统发生树 ,结果发现 :所测两毒株之间的核苷酸序列同源性极高 ,可达 99 8% ,亲缘关系密切 ;与PCV 2参考毒株的同源性介于95 3%～ 99 7%之间 ,其中与美国的一株PCV 2同源性最高 ,分别为 99 5 %和 99 7% ,亲缘关系很近 ;与国内两分离株同源性分别为 96 4%和 98 8%～ 98 9% ;与PCV 1参考毒株同源性仅为 77 1%～ 77 5 %。; 芦银华华修国陈德胜黄伟坚戴亚斌谈国蕾陈溥言; 关键词：猪圆环病毒 PCR

猪圆环病毒II型ORF2基因在酵母中的高效分泌表达被引量：11: 2005年; 为了建立一种简便的检测猪圆环病毒2型(PCV2)的方法,本实验将PCV2 的ORF2 基因片段整合到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X 33染色体上,构建了X 33(pPICZa ORF2)重组工程菌。经甲醇诱导后,成功的表达出ORF2基因片段。经过Bradford 蛋白质总含量测定和凝胶薄层扫描结果表明,表达产物占重组工程菌培养上清总蛋白的58%,表达量可达47mg/ L。间接ELISA结果初步表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效地区分PCV2型病毒标准阳性与阴性血清。; 张晓勇郑其升魏雪涛谈国蕾任雪枫曹瑞兵陈德胜陈溥言; 关键词：猪圆环病毒巴斯德毕赤酵母分泌表达

猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因原核表达载体的构建及表达: 2005年; 用PK-15细胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法扩增核衣壳蛋白(Cap蛋白)全基因,克隆到pET-32a载体中,构建了表达载体pETORF2,转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,结果显示表达的蛋白大小与设计不符。同样的方法,又构建了表达载体pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符。对Cap蛋白编码基因进行改造,在不改变原氨基酸序列的基础上,把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子,根据此序列,设计了4条长引物,参照SOE的原理,用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段,并克隆到pET-32a载体中,成功构建了重组表达载体pETP1P4。SDS-PAGE电泳结果表明,表达的蛋白分子量与设计相符。; 崔立朱建国芦银华谈国蕾陈溥言华修国; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白大肠杆菌

猪圆环病毒2型ORF2编码基因真核表达载体的构建及表达被引量：3: 2003年; 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因,将其克隆入pSecTag2载体中,构建了pSecORF2载体。又设计一条含信号肽序列的上游引物,以pSecORF2为模板,扩增出含信号肽序列的ORF2基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRESiORF2真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO细胞,进行表达。间接免疫荧光实验(IFA)成功检测到pIRESiORF2在CHO细胞中的表达。这为进一步研究ORF2编码蛋白的生物学活性及建立PCV诊断试剂盒打下基础。; 谈国蕾胡志华芦银华陈德胜陈溥言; 关键词：猪圆环病毒 ORF2 编码基因真核表达载体

感染性猪圆环病毒2型基因组DNA的分子克隆被引量：7: 2003年; 本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组(1768bp),克隆入pcDNA3载体的EcoR Ⅰ酶切应点,获得含有PCV-2全基因组的重组质粒,命名为pcDNApcv2。将重组质粒大量扩增后,用EcoR Ⅰ切出1768bp的PCV-2全基因组,在体外用T4 DNA连接酶使其连接环化。用脂质体法将体外连接产物转染无PCV污染的PK-15细胞,经4次连续传代,用间接免疫荧光实验(IFA)及电镜观察证实已获得复制能力的PCV-2病毒。由此可见,本试验构建的环化的PCV-2全基因组DNA具有感染性。; 芦银华华修国崔立谈国蕾许立华黄伟坚陈德胜陈溥言; 关键词：猪圆环病毒2型基因组 DNA 克隆

猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因在原核和真核系统中的表达: 猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪群中发生的多种疾病相关,包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、A2型先天性震颤(CT)、猪呼吸道病复合征(PRDC)等.其中以PMWS最为严重,已经给全世...; 谈国蕾; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白稀有密码子 CHO细胞; 文献传递

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因真核表达载体的构建及表达被引量：7: 2004年; Using a pair of specific primers designed according to the relevant nucleotide sequences from GenBank, the main antigen domain for VP2 gene of Porcine parvovirus was ampilified with PCR method using the genomic DNA as template. The PCR product was cloned into the expression vector pIREShyg to get a recombinant eukaryotic expression plasmid pIREShyg-VP2, which was then transfected into the CHO-K1 cells. The expressed product was detected by IFA after the positive cell clone was selected with hygromycin. The result revealed that the main antigen domain for VP2 gene of porcine parvovirus was stably expressed in CHO-K1 cells.; 任雪枫胡志华谈国蕾周斌徐学清郑其升张晓勇陈德胜陈溥言; 关键词：猪细小病毒 VP2蛋白潮霉素 CHO-K1细胞

猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒快速检测方法的研究: 本研究利用PCR和RT-PCR技术对猪圆环病毒(PCV)及猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)单独或混合感染进行快速检测的研究。初步确定了PCR、RT-PCR反应的基本条件,对从江苏、上海、浙江和山东等8个猪场的38...; 芦银华谈国蕾陈德胜陈溥言; 文献传递

猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建被引量：2: 2002年; 根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列，设计一　对引物，应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体，筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２，并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析，结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％，与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切，回收ＯＲＦ２基因，转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间，构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。; 芦银华陈德胜华修国黄伟坚谈国蕾陈溥言; 关键词：猪圆环病毒 ORF2 真核表达载体基因序列

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谈国蕾

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