裴东生 作品数:6 被引量:4 H指数:1 供职机构: 徐州医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 卫生部科学研究基金 江苏省青年科技基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
携带IL-18基因的溶瘤腺病毒对裸鼠恶性黑素瘤移植瘤的抗肿瘤作用 被引量:1 2009年 目的探讨携带IL-18基因的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-18)对裸鼠恶性黑素瘤移植瘤的抗肿瘤效果。方法取A375细胞2×10^6个接种于BALB~裸鼠腋下组织内,建立裸鼠黑素瘤模型,当移植瘤体积达100-150mm,时将其随机分为3组,每组8只,分别于瘤体内注射ZD55-IL-18、Ad—IL-18和磷酸盐缓冲液(PBS)。通过定期测量肿瘤体积观察肿瘤生长抑制情况,并切取肿瘤进行HE染色,观察肿瘤细胞生长形态;激光共聚焦显微镜下观察移植瘤组织IL-18表达水平、E1A蛋白的表达情况。免疫组化检测荷瘤裸鼠肿瘤组织CD34染色标记测定的肿瘤组织微血管密度;TUNEL法检测移植瘤组织细胞凋亡情况。结果肿瘤生长曲线表明,ZD55-IL-18处理组肿瘤生长速度较PBS组明显减慢,接种44d后ZD55-IL—18组肿瘤平均体积为(1039.378±29.67)mm3,Ad—IL-18组为(2900.46±62.65)m3,PBS组为(3980.24±63.78)mm3,各组间差异有统计学意义(P〈0.01)。HE染色发现,ZD55-IL-18处理组细胞核深染,很少见核仁,显示肿瘤组织生长抑制。激光共聚焦结果表明,ZD55-IL-18处理组IL-18的表达阳性率比Ad—IL-18处理组明显增强(P〈0.01),并可以在肿瘤组织中表达E1A蛋白;免疫组化检测显示,ZD55-IL-18治疗组肿瘤微血管密度明显低于PBS组(P〈0.05)。不同处理组移植瘤细胞凋亡阳性率ZD55-IL-18处理组(86.28%±3.25%)〉Ad—IL-18处理组(43.67%±3.46%)〉PBS处理组(10.73%±2.48%),各组之间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论携带IL-18基因的溶瘤腺病毒ZD55—1L-18对裸鼠恶性黑素瘤移植瘤的生长及转移有抑制作用,并探讨了其可能的作用环节。 刘彦群 杨春华 毛立军 裴东生 魏志平 郑骏年关键词:白细胞介素18 溶瘤腺病毒介导的IL-18在黑素瘤A375细胞中的表达 2008年 目的构建携带人IL-18基因的溶瘤腺病毒,观察在A375细胞中IL-18基因的表达情况。方法将pZD55-IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞获得重组腺病毒。PCR鉴定条件增殖腺病毒ZD55- IL-18。以ZD55-IL-18感染人黑素瘤A375细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-18基因mRNA的表达;Western blot法检测腺病毒E1A的表达情况;结晶紫染色法检测细胞杀伤作用;MTY法检测细胞存活情况。结果PCR鉴定表明ZD55-IL-18构建成功;RT-PCR和Western blot结果表明,ZD55-IL-18能高效介导IL-18基因在A375细胞中的表达,并在肿瘤细胞内表达E1A;结晶紫染色和MTT结果表明,ZD55-IL-18对A375细胞有明显的杀伤作用。结论构建成功的溶瘤腺病毒ZD55-IL-18,可在A375细胞中高效表达IL-18基因,并能抑制黑素瘤细胞生长。 杨春华 刘彦群 魏志平 毛立军 裴东生 史震 郑骏年关键词:溶瘤腺病毒 IL-18 黑素瘤 大鼠FasL基因克隆及重组慢病毒载体pLO134-FasL的构建 2005年 目的克隆大鼠FasL基因全长序列,构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL,为进一步研究FasL蛋白生物学功能奠定基础。方法根据大鼠FasL cDNA序列设计合成上、下游引物,以大鼠脾细胞提取的总RNA为模板,行RT-PCR扩增。扩增片断经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,插入慢病毒载体pLO134中并转化感受态细胞JM101。扩增后酶切鉴定,对正确的阳性克隆行DNA全序列分析。结果RT-PCR扩增获得870 bp DNA片段,DNA序列分析结果与发表于GenBank上的序列(U03470)完全一致。结论成功克隆大鼠FasL基因并构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL。 李望 孙晓青 张成静 胡书群 裴东生关键词:FASL 基因克隆 慢病毒载体 大鼠FasL基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统的建立 被引量:3 2006年 目的建立真核细胞表达的大鼠FasL基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统,为进一步研究转FasL基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受、保护移植物的作用奠定基础。方法制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(pLO134-FasL),包装质粒(ΔNRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G)。脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,72 h后收集病毒上清,Western-blot法检测293T细胞的FasL蛋白表达。结果转染后的293T细胞表达FasL蛋白。结论成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统。 李望 孙晓青 胡书群 裴东生 陈波关键词:FASL 慢病毒载体 293T细胞 肾癌G250抗原蛋白多糖(PG)区蛋白cDNA的克隆和序列测定 2006年 目的克隆肾癌G250抗原蛋白多糖(PG)区cDNA,为制备G250杂交瘤及抗G250的单克隆抗体奠定基础。方法从肾癌细胞786-0中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增出全长360 bp的G250抗原PG区cDNA,将其与表达载体pCA13连接,转化大肠杆菌JM109,构建G250抗原PG区cDNA克隆。结果酶切及序列分析表明,与GenBank报道的G250抗原PG区cDNA序列完全一致。结论G250抗原PG区cDNA已成功地得到克隆。 郑典宝 郑骏年 郝林 武艺 刘俊杰 裴东生 胡书群 陈家存 孙晓青关键词:CDNA克隆 携带人白细胞介素18基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定和滴度测定 2006年 目的构建人白细胞介素18(IL-18)基因复制缺陷型腺病毒表达载体。方法以质粒pJWIL—18为模板,设计并合成上、下游引物,利用多聚酶链反应(PCR)扩增获得IL-18基因片段,酶切后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13IL—18。鉴定正确后,将pCA13 IL—18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,9-12天出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA。进行PCR鉴定。大量扩增后,氯化铯梯度离心纯化腺病毒,测病毒滴度。结果酶切分析、序列测定、PCR验证表明,IL-18基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体中。结论成功构建了表达人IL-18基因的复制缺陷性腺病毒载体。 毛立军 郑骏年 郑典宝 郝林 郑宏祥 裴东生关键词:白细胞介素18 腺病毒载体