毛小琴 作品数:58 被引量:228 H指数:7 供职机构: 云南省第一人民医院 更多>> 发文基金: 云南省卫生科技计划项目 国家自然科学基金 云南省应用基础研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 农业科学 更多>>
一种用于检测大肠杆菌的引物及其方法和应用 本发明公开了一种用于检测大肠杆菌的引物及其方法和应用,所述的引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示,针对所涉及的引物,建立了大肠杆菌的检测方法,其具有特异性良好、灵敏较好、检测快速可靠、操作简... 毛小琴 刘有福 宋玉竹 牛华 夏雪山医院肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮耐药机制研究 被引量:6 2017年 目的研究质粒介导的喹诺酮耐药基因在医院内的流行情况,检测菌株的耐药性,分析菌株间的同源性。方法收集临床分离的耐喹诺酮产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌,利用PCR方法对质粒耐药基因进行检测,阳性菌株进行接合试验,然后检测药物对供体菌、受体菌和接合子最小抑菌浓度(MIC)值的变化,通过脉冲场电泳检测菌株间的同源性。结果所有菌株均未检出耐药基因qnrA与qnrC,其他7种耐药基因如qnrB均阳性,且部分菌株携带多个耐药基因。阳性菌株接合子对喹诺酮的耐药性增强并且有些质粒携带多种耐药基因,脉冲场电泳分析大肠埃希菌喹诺酮耐药株主要以发散为主,肺炎克雷伯菌主要以相对暴发流行为主。结论携带β-内酰胺酶基因的菌株,质粒介导的喹诺酮耐药基因检出率高,二者呈一定程度的共存。携带喹诺酮耐药基因的质粒水平转移,细菌对喹诺酮的耐药性增强,在免疫力低下人群,耐药菌株的传播更为迅速。 毛小琴 苑荣亮关键词:质粒介导 喹诺酮耐药 同源性 产气肠杆菌组成型启动子的筛选及其活性测定 被引量:2 2016年 目的:从产气肠杆菌基因组中筛选组成型启动子,并检测其活性。方法用Sau3 AⅠ限制性内切酶将产气杆菌的基因组酶切到500 bp大小,连接到pCMR8 a载体上,转化DH5α感受态后涂布氯霉素和卡那抗生素的双抗平板上筛选启动子,经SDS-PAGE分析启动子的蛋白表达能力,筛选较强启动子并对其进行截短和顺反性实验,最后利用截短启动子表达不同的蛋白。结果成功筛选到了5个启动子序列,获得到了表达能力最强启动子的截短核心序列,验证了其具有反向启动外源蛋白表达的能力,成功表达了其他外源蛋白。结论本实验通过大肠埃希菌表达系统成功的筛选并验证了产气杆菌的一种组成型启动子,具有较强的启动外源蛋白表达能力,对工业上蛋白的生产及实验室表达某种蛋白具有重要意义。 苑荣亮 仉秋实 汪玉婷 岳风先 刘志成 张成 井敏敏 毛小琴 井申荣关键词:产气肠杆菌 组成型启动子 蛋白表达 活性测定 降钙素原用于沙门菌属感染诊断的初步评估 被引量:2 2012年 目的初步评估降钙素原(PCT)用于诊断沙门菌属感染的可行性。方法以医院231例疑似沙门菌属感染者的PCT和肥达反应进行回顾性统计分析,了解PCT在不同肥达反应结果中的分布规律。结果 231份标本中有肥达反应阳性78份,PCT阳性131份;肥达反应与PCT均阳性42例,二者均阴性89例,两者差异无统计学意义;无论肥达反应为阳性或阴性,PCT大多数均<1.0ng/ml,分别占88.1%和89.9%,其中PCT主要位于0.05~0.50,分别占66.7%和68.5%,两者差异也均无统计学意义;PCT<0.05ng/ml时,肥达反应阳性36例;0.05 毛小琴 周光 李丰良 刘海云 郑瑞 徐宁关键词:降钙素原 沙门菌属 肥达反应 免疫比浊法与ELISA法检测梅毒抗体的一致性比较 被引量:6 2012年 目的评价免疫比浊法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测梅毒抗体的一致性。方法以ELISA检测门诊和住院患者标本共10 985例,ELISA阳性者再做苍白密螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)及免疫比浊法(3TP)。结果共检出ELISA阳性200例,ELISA法与3TP和TPPA检测结果阳性符合率均为92.50%,ELISA法无漏检,出现假阳性15例,假阳性率1.70%;3TP与TPPA检测阳性符合率为98.40%,3TP漏检3例,漏检率1.60%,出现假阳性3例,假阳性率为0.03%,3种方法的阳性检出率差异无统计学意义;按ELISA的原始吸光度值,将200例标本分为高、中和低吸光度组,把每组中的3种方法进行统计学比较,高吸光度组和中吸光度组中3种方法的阳性符合率均>95.0%,检测结果差异无统计学意义;在低吸光度组中,ELISA法与3TP和TPPA的符合率均为70.70%,3TP与TPPA的符合率为87.80%,检测结果差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ELISA、3TP两种检测方法均有较高的灵敏度和特异性,尤其是在中、高吸光度值时,3TP特异性比ELISA强,且与TPPA的一致性很好,可用做梅毒的大批量初筛和确认试验。 周光 胡琳琳 陈刚 毛小琴关键词:梅毒 酶联免疫吸附试验 免疫比浊法 一种金黄色葡萄球菌特异基因的用途 本发明公开了一种金黄色葡萄球菌特异基因的新用途,该基因为putative restriction enzyme基因,Genbank登陆号为12329975;本发明用引物通过聚合酶链式反应检测标本中是否存在putative... 宋玉竹 刘有福 张阿梅 毛小琴 夏雪山 牛华 孔令聘 谢丽娇文献传递 RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定 2015年 目的建立有活性的蛋白激酶C受体1(RACK1)过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系(HUVEC),为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP获得过表达载体p IRES2-EGFP-RACK1;同时,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,亚克隆至p Genesil-1得到相应的干扰载体;脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,qRT-PCR及Western blot鉴定RACK1 mRNA和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。 张丽 贾雄飞 牛华 冯悦 宋玉竹 张望龙 李胜营 吴明江 毛小琴关键词:RACK1 过表达 RNA干扰 肾移植术后尿蛋白二维电泳图谱的建立 2008年 目的近年来诊断急性排斥反应的发生,一直朝着寻找非侵入性的检测方向努力,尿液中的蛋白可以为肾脏疾病病理变化提供线索。本次实验的目的旨在建立肾移植术后病人尿蛋白二维电泳图谱。方法利用二维凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE)技术,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,改良等电聚焦的电压在3500V,总伏小时为14000 Vh;12%的SDS-PAGE进行第二向电泳,银染显色。结果得到了令人满意的肾移植术后发生急性排斥反应患者尿蛋白二维电泳图。结论此方法,可为后续利用蛋白质组技术,研究急性排斥反应诊断标志物提供可靠的技术支持。 贾雄飞 贺伟峰 毛小琴 甘成军 罗高兴 黄正根 袁顺宗 王晓娟 彭旭 程文广 谭江琳 吴军关键词:肾移植 急性排斥反应 蛋白质组 二维电泳 人急性早幼粒HL60细胞双向电泳条件的优化 被引量:1 2008年 目的:比较不同蛋白提取方式和不同电泳条件下HL60细胞全蛋白的双向电泳结果,寻找新的针对HL60细胞省时高效的双向电泳条件.方法:分别采用标准蛋白提取,三氯乙酸/丙酮沉淀和超声破碎三种不同蛋白提取方法,在传统双向电泳和改良双向电泳条件下做对比,并做蛋白点数和凝胶重复性分析.结果:在传统等电聚焦条件下,双向电泳凝胶图谱两端均出现大量横纹和阴影,分离效果较差.采用改良双向电泳条件后,三种蛋白提取方法的蛋白分离效果均明显改善,重复性提高,并且省时、可靠.其中,标准蛋白提取优于三氯乙酸/丙酮沉淀和超声破碎两种蛋白提取方法,蛋白点数即可达到(1102±7)个,重复性为(74.8±6.4)%,基本满足后续蛋白点的筛选和比对.三氯乙酸/丙酮沉淀法可造成部分蛋白损失,仅能分离出(844±15)个蛋白点.超声破碎法虽然使得蛋白点数明显增多,但可重复性明显下降,还不足40%.结论:采用标准蛋白提取法和改良的电泳条件,可以省时、高效地分离HL60细胞全蛋白. 唐薇 毛小琴 王伟佳 邱宗荫关键词:HL-60细胞 电泳 凝胶 幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的制备 被引量:2 2006年 目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀。以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度。结果母鸡初次免疫后76d,抗体效价达到1∶6400,最高可达1∶12800。蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25·66mg/ml。结论已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体。 毛小琴 杨致邦 黄伟 张绍兰 田一玲 叶翠莲关键词:幽门螺杆菌 细胞空泡毒素 蛋黄抗体