李崎
- 作品数：32 被引量：112H指数：6
- 供职机构：海南医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 比较人不同细胞来源诱导多能干细胞与胚胎干细胞拟胚体的分化培养过程
- 2021年
- 背景:通过小分子化合物、质粒转染等方法可成功诱导出无病毒载体整合的诱导多能干细胞。与胚胎干细胞相似,诱导多能干细胞可向造血祖细胞进行自由分化,但外源性因子的转入及不同来源人体细胞是否对诱导多能干细胞的分化及诱导造血祖细胞产生影响,目前尚未清楚。目的:比较人不同细胞来源诱导多能干细胞和胚胎干细胞拟胚体的基因表达差异,为诱导多能干细胞的临床转化进行探索。方法:分别选用羊水细胞及尿细胞来源诱导多能干细胞和人胚胎干细胞进行诱导分化。收集分化不同时间点的拟胚体,检测多能性基因Oct4、Sox2、Nanog以及内胚层标记基因GATA4、中胚层标记基因MSX1、外胚层标记基因PAX6、造血干细胞标记基因CD34和CD43的表达。结果与结论:①羊水细胞来源诱导多能干细胞拟胚体在培养第8天检测不到Oct4、Sox2、Nanog表达,尿细胞来源诱导多能干细胞和胚胎干细胞拟胚体可维持表达至第16天;②羊水细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中GATA4、MSX1、PAX6表达量峰值出现在第4天,持续表达到第8-12天,而其他2种细胞拟胚体中GATA4、MSX1、PAX6表达量峰值出现在第4-8天,并且可持续表达至第12-16天;三胚层标记基因在尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中的表达量明显高于其他2种细胞拟胚体;③在羊水细胞、尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中造血干细胞比率在第12天达峰值,而胚胎干细胞拟胚体中造血干细胞比率在第4天达峰值,尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中造血干细胞比率高于其他2种细胞拟胚体;④人不同细胞来源诱导多能干细胞及胚胎干细胞拟胚体分化培养过程中均具有全能性及三胚层分化能力但各具特点。尿细胞来源诱导多能干细胞或许更适合替代胚胎干细胞成为体外研究造血细胞分化的模型。
- 韦云剑张风波龙平龙平马燕琳马燕琳李崎
- 关键词：干细胞诱导多能干细胞胚胎干细胞拟胚体造血分化羊水细胞尿细胞
- 有效修复地中海贫血Westmead突变的方法及应用
- 有效修复地中海贫血Westmead突变的方法及应用。本发明提供了一种诱导型多能干细胞。该诱导型多能干细胞的HBA2基因不具有westmead突变。根据本发明实施例的诱导型多能干细胞最初是由由携带地中海贫血症westmea...
- 马燕琳龙平李崎黄元华李玲丽
- 文献传递
- 30例严重少精症、无精子症患者的遗传学分析被引量：2
- 2006年
- 目的探讨严重少精症和无精子症与遗传因素的关系。方法260例染色体G带分析;116例Y染色体AZF区18个微缺失位点进行多重PCR基因扩增检测分析。结果30例严重少精症和无精子症患者发现遗传异常,其中26例染色体异常,4例AZF基因有微缺失。结论严重少精症和无精子症与遗传密切相关,但严重少精症和无精子症的染色体分析与Y染色体AZF微缺失位点检测无相关性。
- 陈雪银李崎马燕琳金应霞麦扬青黎明红
- 关键词：严重少精症无精子症无精子因子Y染色体微缺失
- 利用CRISPR/Cas9技术构建定点突变小鼠品系被引量：6
- 2015年
- CRISPR/Cas9技术是新近发展起来的对细胞和动物模型进行基因编辑的重要方法。本文利用DNA双链断裂(Double-strand breaks,DSBs)引起的同源重组(Homologous recombination,HR)依赖与非依赖的修复机制,建立基于CRISPR/Cas9核酸酶技术构建定点突变小鼠品系的技术体系。针对赖氨酸特异脱甲基化酶2b(Lysine(K)-specific demethylase 2b,Kdm2b)酶活关键位点对应的基因组DNA序列设计单一导向RNA(Single-guide RNA,sg RNA),通过与Cas9 m RNA共显微注射,分别得到Kdm2b基因发生移码突变的基因失活品系及关键位点氨基酸缺失的酶活突变型小鼠品系。此外,利用HR介导的修复机理,将黄素单加氧酶3(Flavin containing monooxygenases3,Fmo3)基因的sg RNA序列及对应的点突变单链寡脱氧核苷(Single strand oligonucleotides,ss ODN)修复模板共注射到小鼠受精卵雄原核。对F0小鼠基因测序分析显示,成功构建了Fmo3基因移码突变的基因敲除和单碱基定点突变的基因敲入小鼠,这些突变能够稳定遗传给子代。本研究利用CRISPR/Cas9技术,通过同源重组依赖与非依赖两种DNA损伤修复方式,成功构建了特定位点突变的小鼠品系。
- 白敏李崎邵艳姣黄元华李大力马燕琳
- 关键词：基因敲除基因敲入同源重组
- 引物组及试剂盒
- 本发明提出了一组引物组以及包含该引物组的试剂盒。利用根据本发明实施例的引物组是针对Y染色体的6个STS位点设计的引物组，该引物组可应用于单个多重聚合酶链式反应，即在同一个PCR反应中使用该组引物进行扩增，可同时得到多个P...
- 李崎马燕琳陈宏健周繇
- 文献传递
- 应用荧光标记引物进行DMD家系连锁分析
- 2015年
- 目的应用荧光引物建立进行性肌营养不良产前诊断连锁分析方法。方法应用不同荧光染料标记7对dystrophy基因内部的短串联重复序列5'-5n4、DXS206、5'-7n4、DXS1238、DXS1237、DXS1236和DXS1235,经PCR扩增后,采用ABI3500测序仪进行毛细管电泳,对5个Duchenne型肌营养不良症(DMD)家系进行连锁分析,进行胎儿产前诊断。结果 2个胎儿被检测出携带与先证者相同的X染色体遗传片段,其中1个SRY基因检测阳性,建议引产;1个SRY基因检测阴性,建议继续妊娠;另外3个胎儿未检测出与先证者携带相同的X染色体遗传片段,建议继续妊娠。结论该方法方法操作简便、敏感、准确,用于产前诊断和携带者检出,可在临床推广运用。
- 李崎周繇马宁陈雪银金应霞陈宏健马燕琳
- 关键词：进行性肌营养不良短串联重复序列荧光
- 基因修复β-地中海贫血患者诱导多能干细胞可否成为治疗的希望?被引量：11
- 2017年
- 背景:对于重型β-地中海贫血,目前惟一的根治方法就是造血干细胞移植,但由于合适供者来源受限及费用昂贵,大部分患者难以得到救治。体细胞重编程技术如今已日臻成熟,在患者诱导多能干细胞中进行基因修复成为了β-地中海贫血治疗的希望。目的:通过论述ZFNs、TALENs、CRISPR/Cas 3种基因编辑技术体现CRISPR/Cas的优势,以及论述基因编辑技术在动物模型疾病治疗中的初步实验结果,从而展望基因编辑技术对β-地中海贫血进行基因治疗并且应用于临床的可能性。方法:以"beta thalassemia,genetic therapy,genome editing,homologous recombination,iPSCs"为英文检索词,以"β-地中海贫血,诱导多能干细胞"为中文检索词,由第一作者检索1989至2015年Pub Med数据库、中国期刊全文数据库,查阅近年β-地中海贫血的发生率和分布情况以及β-地中海贫血基因治疗的相关文献,最终保留67篇文献。结果与结论:随着基因编辑技术的发展,出现了3种定向基因编辑技术,包括ZFNs、TALENs、CRISPR/Cas技术。以地中海贫血患者来源的诱导多能干细胞为靶细胞,通过ZFNs、TALENs及CRISPR/Cas9技术对疾病基因进行纠正,完成对致病基因的治疗。CRISPR/Cas系统相对于其他基因编辑技术更加简单快捷、安全高效,应用也更加广泛,利用CRISPR/Cas9系统修复β-地中海贫血患者诱导多能干细胞、生殖细胞、受精卵、胚胎中β珠蛋白基因,将为今后临床的应用奠定基础。
- 李玲丽张风波李崎马燕琳
- 关键词：Β地中海贫血诱导多功能干细胞干细胞基因治疗Β-地中海贫血诱导多能干细胞
- 女性年龄对夫精宫腔内人工授精结局的影响被引量：4
- 2017年
- 目的分析不同年龄组促排卵周期夫精宫腔内人工授精(IUI)的临床结局及其影响因素。方法回顾性分析2008年1月至2015年12月期间在海南医学院第一附属医院生殖中心进行促排卵周期IUI治疗的4 228个周期的临床资料,分析临床妊娠率、抱婴率、流产率与女性年龄的关系。结果 IUI临床妊娠率为14.5%(614/4 228),抱婴率为10.1%(429/4 228),流产率为15.5%(95/614);按照女性年龄分为21~25岁组、26~30岁组、31~35岁组、36~38岁组、39~40岁组、>40岁组,各组临床妊娠率依次分别为16.5%(40/242)、16.8%(262/1 559)、14.2%(224/1 578)、13.1%(59/451)、8.9%(18/203)、5.6%(11/195);其抱婴率依次分别为10.3%(25/242)、12.2%(190/1 559)、10.2%(161/1 578)、8.4%(38/451)、4.9%(10/203)、2.6%(5/195);其流产率依次分别为7.5%(3/40)、14.1%(37/262)、13.4%(30/224)、25.4%(15/59)、27.8%(5/18)、45.5%(5/11);各年龄组临床妊娠率、抱婴率、流产率比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);HCG日子宫内膜厚度平均(9.4±2.0)mm,各组的子宫内膜厚度比较差异无统计学意义(P>0.05);各组平均处理后前向运动精子数依次分别是(11.7±12.3)百万、(10.4±10.8)百万、(9.9±9.4)百万、(10.2±10.6)百万、(8.9±10.0)百万,各组比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组的不孕年限依次分别为(3.5±1.5)年、(4.3±2.1)年、(5.2±2.7)年、(6.3±3.8)年、(6.3±4.6)年、(6.2±5.2)年;IUI次数依次分别为(1.4±0.6)次、(1.5±0.8)次、(1.6±0.8)次、(1.6±0.8)次、(1.6±0.9)次、(1.7±1.2)次;直径≥14 mm卵泡个数依次分别为(2.8±2.1)个、(2.7±2.1)个、(2.5±1.9)个、(2.5±1.8)个、(2.4±1.6)个、(2.3±1.4)个;不孕年限、IUI次数、直径≥14 mm的卵泡个数总体分布不全相同,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论年龄是影响AIH结局的重要因素,对于年龄较大的患者特别是>40岁者应慎重选择IUI,适当减少IUI次数。
- 朱娟黄元华卢伟英张毅李崎羊在家马燕琳
- 关键词：临床妊娠率流产率
- 2140例不孕患者夫精宫腔内人工授精的临床效果及其影响因素被引量：20
- 2017年
- 目的观察2 140例不孕患者夫精宫腔内人工授精(IUI)的临床效果,并分析其影响因素。方法 2 140例不孕患者,均行IUI治疗,共治疗3 383个IUI周期,采用B超测量HCG日患者子宫内膜厚度,计算直径≥14 mm卵泡数。IUI后第30天计算临床妊娠率、抱婴率、流产率、异位妊娠率、多胎妊娠率。分析IUI的临床妊娠率、抱婴率与不孕症患者年龄、不孕类型、不孕原因、IUI次数的关系。结果 3 383个IUI周期中患者HCG日子宫内膜厚度(9.4±2.0)mm,直径≥14 mm卵泡数(2.6±1.9)个。IUI后第30天时临床妊娠率15.0%(508/3 383),抱婴率11.1%(375/3 383)。流产率16.9%(86/508),异位妊娠率8.9%(45/508),其中宫内妊娠合并宫外妊娠者4例、双胎妊娠58例、三胎妊娠8例、四胎妊娠3例,多胎妊娠率13.6%(69/508)。女性年龄>40岁者临床妊娠率、抱婴率明显低于其余年龄者,P均<0.05。原发不孕与继发不孕患者的临床妊娠率分别为14.8%(285/1 921)、15.3%(223/1 462),抱婴率分别为10.9%(209/1 921)、11.4%(166/1 462),二者比较,P均>0.05。39~40岁原发不孕患者抱婴率明显低于继发不孕者,P<0.05。女性因素不孕患者临床妊娠率、抱婴率均低于混合因素者,P均<0.05。不同IUI周期次数之间临床妊娠率与抱婴率间比较差异无统计学意义。结论 IUI的成功率仍较低,女性年龄<40岁、提高IUI周期次数是提高IUI妊娠结局的重要因素,临床中应综合分析女性年龄、不孕类型、不孕原因选择合适助孕方案。
- 朱娟马燕琳黄元华卢伟英张毅黄炜李崎羊在家
- 关键词：宫腔内人工授精夫精人工授精人工授精临床妊娠率
- 肌营养不良的分子遗传学进展
- 2006年
- 马燕琳李崎黄元华
- 关键词：肌营养不良症神经系统遗传病进行性加重变性疾病
