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NY-ESO-1肿瘤抗原模拟表位及其应用: 本发明公开了NY-ESO-1肿瘤抗原模拟表位，其氨基酸序列为Ser-Leu-Leu-Met-Phe-Ile-Thr-Gln-Cys，即SLLMFITQC；该模拟表位可以上调CTL免疫应答并能和天然表位发生交叉反应，具有免...; 吴玉章尚小云王莉; 文献传递

免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞被引量：13: 2007年; 目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。; 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳黎万玲姜曼王莉吴玉章; 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞

BCR组库分析乙肝疫苗接种反应及初步机理分析被引量：1: 2017年; 目的接种乙肝疫苗是控制乙肝流行最经济有效的方法,通过对3次乙肝注射疫苗前后的B细胞库进行高通量测序分析,探讨注射乙肝疫苗后体液免疫的动态过程。方法将志愿者接种乙肝疫苗前后的外周血样进行密度梯度离心获得淋巴细胞并提取RNA,逆转录为cDNA后对B细胞受体H链的CDR3区序列进行高通量测序,以揭示注射乙肝疫苗前后B细胞应答的变化,分析人外周血B细胞受体CDR3的多样性以及序列变化与疫苗应答之间的关系。结果志愿者外周血B细胞受体CDR3的种类和数量在接种疫苗后都有所降低,并表现出其特有的免疫学特征,包括高频取用的V、D、J家族、V-J家族配对发生了改变,CDR3区氨基酸的取用和长度分布也发生显著变化;并且接种疫苗后,志愿者外周血中存在某些寡克隆异常增殖的情况。结论大部分志愿者在接种疫苗后,B细胞受体组库的多样性等发生特征性改变,并且出现某些疫苗接种相关的寡克隆。B细胞受体高通量测序技术可以从克隆水平上监控乙肝疫苗接种后抗体产生和表达的动态变化过程。; 姜琼郑文红王晨辉唐小琴董惠尚小云吴玉章; 关键词：乙肝疫苗高通量测序

激动型抗4-1BB抗体3H3交联促进CD8^+ T细胞中Akt激酶活性: 2007年; 目的:研究4-1BB信号促进CD8+T细胞增殖、存活及Akt活性的变化。方法:利用小鼠CD8α+T细胞磁珠负性分选试剂盒制备高纯度CD8+T细胞,并通过体外抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化CD8+T细胞。再通过流式细胞术(FCM)分析3H3交联与否,四唑盐(WST-1)/ECS检测CD8+T细胞的增殖程度,Annexin V检测抗凋亡能力,免疫印迹法分析胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结果:3H3交联可以明显促进活化的CD8+T细胞增殖和存活,并且3H3介导的4-1BB信号可明显促进CD8+T细胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性。结论:Akt途径可能参与了3H3交联介导的4-1BB信号对CD8+T细胞增殖与存活的调节效应。; 杨曌傅晓岚尚小云牛微吴玉章王莉; 关键词：4-1BB CD8^+T细胞

外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞与乙型肝炎疫苗接种后应答关系的研究被引量：2: 2009年; 目的通过检测乙型肝炎（简称乙肝）疫苗接种后弱应答和无应答人外周血CIM＋CD25＋调节性T细胞（CIM＋CD25＋regulatoryTcell，简称Treg细胞）的频率，探讨CIM＋CD25＋调节性T细胞与乙肝疫苗接种后弱和（或）无应答之间的关系。方法利用流式细胞分析方法对25例乙肝疫苗无应答、30例乙肝疫苗弱应答者外周血Treg细胞的频率进行分析，另外选取20例乙肝疫苗强应答者作为对照。结果强应答组Treg细胞的频率为（4．32±1．21）％，弱应答组Treg细胞的频率为（7．01±1．06）％，无应答组Treg细胞的频率为（12．75±2．01）％，无应答组和弱应答组与强应答组相比Treg细胞频率显著升高（t=8．426，t=3．289，P值均〈0．01）。结论乙肝疫苗接种后无应答和弱应答现象与外周血CIM＋CD25＋调节性T细胞频率升高存在一定关系。; 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳姜曼王莉; 关键词：抗体生成流式细胞术

乙肝疫苗弱与无应答者外周血HBsAg抗原特异性CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外诱导被引量：5: 2008年; 目的用乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)在体外刺激乙肝疫苗弱、无应答者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),看是否能够诱导出一群HBsAg特异性的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cell,简称Treg)。方法分离并培养乙肝疫苗强应答、弱应答和无应答者的外周血PBMCs,用植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)和HBsAg刺激,并设不加抗原的空白对照。流式细胞仪检测抗原刺激后Treg细胞的表达频率,并用噻唑蓝比色法(MTT)检测培养细胞的增殖反应。结果弱、无应答组PBMC经HBsAg刺激后Treg细胞的表达频率与PHA刺激孔和不加抗原的空白对照孔相比,明显上升(P<0.01);而强应答组HBsAg,PHA刺激孔以及空白对照孔三孔之间Treg细胞的表达频率均无显著差异。MTT法检测细胞增殖反应,发现弱、无应答组与强应答组相比,HBsAg刺激后细胞增殖反应明显降低(P<0.01),但三组之间PHA刺激孔以及空白对照孔均无显著差异。结论乙肝疫苗弱、无应答现象可能是由于注射疫苗后,在体内诱导出了一群HBsAg特异性的Treg细胞,而这群具有抑制功能的T细胞介导了机体细胞及体液免疫功能的下降,从而导致弱、无应答现象的发生。; 牛微杨明空尚小云傅晓岚姜曼王莉; 关键词：乙肝疫苗无应答 CD4^+CD25^+调节性T细胞细胞增殖反应

整合法预测HBV相关抗原的HLA-A* 0201限制性结合肽被引量：2: 2009年; 目的预测HBV的相关抗原HBsAg、HBcAg、DNA polymerase新的HLA-A*0201限制性结合肽。方法选取SYFPEITHI、BIMAS、SVMHC、IEDB、EpiJen预测工具以及整合法预测抗原对应蛋白序列P03146,P03138,P03156的HLA-A*0201限制性结合肽,并与现有表位数据库中的结合肽比较。结果整合法与单个预测算法相比提高了预测的灵敏度和特异性,对3种抗原的预测准确性均有提高,MR(misclassification rate)值分别降为1.14%、3.41%、1.46%;利用此方法发现3种抗原尚未得到实验验证的HLA-A*0201结合肽,分别为,HBcAg:ELMTLATWV(64-72)、LMTLATWVGV(65-74);HBsAg:LMT-LATWVGV(246-254)、IIFLFILLL(244-252)、FLFILLLCLI(246-255)、SLYSILSPFL(367-375)以及LLCLIFLLVL(251-260);DNA polymerase:SLFTAVTNFL(513-522)、GLLGFAAPFT(554-563);在HBsAg蛋白序列中发现了31个氨基酸的免疫热点区域FIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLI(243-273)。结论整合法比单个预测算法性能更好,能够更准确地预测抗原的HLA限制性结合肽,采用该方法所发现的9条可能表位和1个免疫热点区域为后续HBV新表位的鉴定及其功能研究提供了有价值的线索。; 王书峰尚小云巩沅鑫吴玉章; 关键词：MHC 整合法结合肽

人Ⅱ型胶原的HLA-A~＊0201限制性CTL表位的预测及初步鉴定被引量：6: 2010年; 目的预测和初步鉴定类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要自身抗原Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,CⅡ)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测工具预测该抗原HLA-A*0201限制性结合肽;人工合成待测表位肽,利用T2细胞株通过直接免疫荧光法测定各肽与HLA-A*0201分子的结合力。利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT)方法检测候选肽刺激关节滑液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cell,SFMC)分泌IFN-γ的能力。结果综合BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测结果筛选出来可能与HLA-A*0201结合的5条肽。MHC亲和力实验表明,在候选的5条肽中,P1261、P1365及P1399具有与HLA-A*0201分子结合的能力,平均荧光强度分别为:1.35、2.53、1.78。ELISPOT试验结果表明,P1365具有刺激SFMC分泌IFN-γ的能力。结论表位预测结果与初步鉴定结果具有一致性,两者联合应用初步认为P1365是HLA-A*0201限制性CTL表位的可能性最大,为下一步表位鉴定及基于人CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定理论基础。; 陈晓玲方勇飞尚小云王书峰高乐女王莉吴玉章; 关键词：CTL 结合肽表位

CD4^+ CD25^+调节性T细胞对乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞分泌IL-4水平和抗-HBs产生的影响被引量：9: 2007年; 目的:通过分析乙肝疫苗弱/无应答者外周血单个核细胞(PBMC)剔除CD4+ CD25+调节性T细胞(简称Treg细胞)和不剔除Treg细胞后,用乙肝表面抗原(HBsAg)诱导,检测其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平,来探讨Treg细胞与乙肝疫苗弱/无应答现象的关系。方法:选择25例乙肝疫苗无应答者,30例弱应答者,同时选择20例强应答者作为对照,用HBsAg在体外诱导剔除和不剔除Treg细胞的3组人外周血PBMC,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清的IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平。结果:剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导,其培养上清IL-4分泌水平强应答组、弱应答组和无应答组相比无明显差异(P>0.05),其抗-HBs的产生水平也无明显差异(P>0.05);不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导,其培养上清IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平弱/无应答组与强应答组相比差异有显著性(P<0.01),弱/无应答组的IL-4分泌水平与抗-HBs的产生水平显著低于强应答组。结论:不剔除Treg细胞的外周血PBMC经HBsAg诱导,其培养上清IL-4分泌水平和抗-HBs的产生水平弱/无应答者与强应答者相比显著低下。由于IL-4主要是由Th2细胞分泌,因此我们推测乙肝疫苗弱/无应答现象可能是由于Treg细胞抑制了Th2细胞的极化,从而影响了机体的体液免疫应答。; 牛微杨曌尚小云吴玉章唐艳姜曼黎万玲王莉; 关键词：TREG细胞抗-HBS

肝癌患者CD4^+CD25^+调节性T细胞的检测及其临床意义被引量：13: 2007年; 背景与目的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatoryTcells)在自身免疫耐受、移植和抗肿瘤应答中起着重要的作用,它们在肿瘤患者中的作用机制尚未阐明。本研究分析、探讨肝癌患者肿瘤组织和外周血CD4+CD25+调节性T细胞频率的临床意义。方法应用流式细胞仪分析肝癌患者的肿瘤组织、外周血和非肝癌对照组中单个核细胞(PBMCs)的CD4+CD25+调节性T细胞频率。结果肝癌患者外周血CD4+CD25+T细胞占PBMCs(6.9±2.8)%,肝癌组织CD4+CD25+T细胞占(6.7±1.6)%,均较对照组显著增高。并且CD4+CD25+T细胞的阳性率与淋巴结转移率和TNM分期存在相关性。淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,CD4+CD25+T细胞的阳性率越高。结论CD4+CD25+调节性T细胞在肝癌患者中比例升高,可能是肝癌患者细胞免疫功能削弱的机制之一。; 杨曌牛微尚小云吴玉章赵建平王莉; 关键词：肝癌 CD4 CD25 T细胞流式细胞仪

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尚小云

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