周龙霞 作品数:13 被引量:47 H指数:4 供职机构: 宁夏医科大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 宁夏回族自治区教育厅基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
MST1在同型半胱氨酸促肝细胞凋亡过程中的表达及意义 被引量:4 2015年 目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促肝细胞凋亡中的作用.方法:动物水平:实验分为4组,每组12只小鼠.正常对照组:5周龄♂鼠(SPF级C57BL/6J)饲以普通饮食;Apo E-/-对照组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以普通饮食;Apo E-/-高蛋氨酸组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食(普通饮食中加入1.7%蛋氨酸);Apo E-/-叶酸和维生素B12干预组:5周龄♂纯合子A p o E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸和0.0004%维生素B12.喂养14 wk后,全自动生化分析仪测定血清Hcy水平;透射电镜、DAPI染色观察肝组织凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.细胞水平:分为3组:正常对照组(0μmol/L Hcy);高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia,HHcy)组(100μmol/L Hcy);干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12);干预肝细胞48 h.Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测肝细胞凋亡水平的变化;实时定量聚合酶链反应(q RTPCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.结果:动物水平:(1)各组小鼠喂养20 wk后,测定血清Hcy水平,Apo E-/-高蛋氨酸组血清H c y水平分别是正常对照组和A p o E-/-对照组的2.3倍和1.9倍(P<0.01).干预组血清Hcy水平较Apo E-/-高蛋氨酸组降低28%(P<0.01),提示造HHcy模型成功;(2)电镜结果显示,A p o E-/-高蛋氨酸组小鼠肝细胞出现凋亡的倾向,染色质凝聚浓缩或边缘化,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或变短,粗面内质网和滑面内质网明显肿胀、断裂、连贯性破坏、核糖体脱落,糖原溶解;(3)DAPI染色后观察,正常对照组和Apo E-/-对照组中细胞核大小均一、核圆,核膜光滑;Apo E-/-高蛋氨酸饮食组一些细胞出现核膜皱缩、细胞核呈现出各种不规则形状,提示可能存在凋亡;Apo E-/-干预组较Apo E-/-高蛋氨酸组细胞核损伤有所减轻;(4)与正常对照组和Apo E-/-对照组相比,Apo E-/-高蛋氨 孔繁琪 马胜超 赵丽 和杨杨 刘现梅 周龙霞 张辉 张鸣号 金少举 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 肝细胞凋亡 叶酸 维生素B12 ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中作用研究 被引量:9 2014年 目的探讨ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy和100μmol·L-1Hcy+叶酸+维生素B12(100+F+V)干预,并设对照组(0μmol·L-1Hcy)。油红O染色观察泡沫细胞形成,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测ABCA1、ACAT1 DNA甲基化水平,并分析两者比值变化;ELISA-like法检测DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;化学比色法分析细胞内胆固醇含量。结果成功复制了泡沫细胞模型;给予不同浓度Hcy刺激后,ABCA1 DNA甲基化改变呈上升趋势,ACAT1 DNA甲基化改变呈下降趋势,给予100+F+V干预后可逆转上述变化,其中ABCA1 DNA甲基化改变更明显;同时,不同浓度Hcy可使泡沫细胞内DNMTs活性和胆固醇含量增加。结论 ABCA1和ACAT1 DNA甲基化的改变参与了Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出,DNMTs可能起关键调控作用。 杨安宁 王磊 周龙霞 赵丽 王艳华 蔡欣 曹成建 杨程 陈久凯 马文斌 姜怡邓关键词:酰基辅酶A DNA甲基化 胆固醇流出 ABCA1甲基化及表达水平在回汉族AS人群中的变化及其诊断价值 2015年 目的本研究探讨宁夏回汉族动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)患者外周血ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)基因表达水平及其甲基化状态,并探讨其在AS发生、发展中的意义及诊断价值。方法选择经颈动脉多普勒超声确诊的回族AS组50例,回族对照组53例,汉族AS组55例,汉族对照组44例;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血ABCA1 mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)检测外周血ABCA1基因DNA启动子区甲基化程度。结果 ABCA1 mRNA相对表达水平,回族AS组比汉族AS组低13.21%(P<0.05),回族AS组比回族对照组低14.81%(P<0.05),汉族AS组比汉族对照组低20.89%(P<0.05);ABCA1基因甲基化水平,回族AS组高于汉族AS组(P<0.05),汉族AS组高于汉族对照组(P<0.05),回族AS组高于回族对照组(P<0.05),回族对照组高于汉族对照组(P<0.05)。ROC分析结果,ABCA1甲基化水平在回族AS组和汉族AS组中的最佳诊断点分别为0.498、0.428,ROC曲线下面积分别为0.649、0.665,灵敏度和特异度分别为91.7%、88.9%。结论回汉族AS患者外周血中ABCA1基因甲基化水平存在差异,回族人群ABCA1基因甲基化基础水平比汉族高,ABCA1 mRNA的表达水平比汉族低,ABCA1甲基化在诊断AS中有较好的价值。 陈久凯 张鸣号 周龙霞 赵丽 刘现梅 孔繁琪 王艳华 马文斌 姜怡邓关键词:DNA甲基化 动脉粥样硬化 miR-125b甲基化在同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用 被引量:8 2015年 目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进血管平滑肌细胞增殖中miR-125b甲基化的作用。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs),并分为空白对照组(0μmol·L-1Hcy),不同浓度Hcy干预组(50、100、200及500μmol·L-1Hcy),以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-125b的表达变化;利用miR-125b前体和抑制剂转染VSMCs后MTT法检测细胞增殖活性;生物信息学分析miR-125b启动子区Cp G岛分布情况,巢式降落式甲基特异性PCR(nt-MSP)法检测miR-125b甲基化状态的变化;并利用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞后再次检测miR-125b的表达。结果与对照组相比,100,200及500μmol·L-1Hcy可使miR-125b的表达水平降低,差异有显著性(P<0.01);miR-125b前体可以抑制VSMCs增殖,而miR-125b抑制剂可以促进VSMCs增殖(P<0.01);以miR-125b基因上游3 700 bp作为研究对象,生物信息学分析发现miR-125b启动子区含有一个长度为792bp(1881-2672区域)的CpG岛,且在Hcy干预下miR-125b的甲基化水平增强(P<0.01);而用AZC干预后,发现miR-125b表达上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy可能通过下调miR-125b表达从而促进VSMCs增殖,可能通过上调miR-125b基因甲基化水平从而下调miR-125b表达。 刘现梅 曹成建 田珏 赵丽 孔繁琪 周龙霞 陈久凯 王艳华 杨晓玲 贾月霞 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 DNA甲基化 血管平滑肌细胞 动脉粥样硬化 高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达 被引量:1 2015年 目的探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达。方法实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食。另选5周龄雄性纯合子Apo E-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸及0.0004%维生素B12。喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP)mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达。结果Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加最显著(P<0.01)。实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著降低(P<0.01,P<0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P<0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致。高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著增加(P<0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P<0.01)。小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P<0.01;r=-0.5501,P<0.01;r=-0.7772,P<0.01;r=-0.6785,P<0.01。结论高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制Apo E敲除鼠肾脏CFTR的表达。 马文斌 张辉 赵丽 周龙霞 陈久凯 王艳华 杨晓玲 田珏 张鸣号 徐华 姜怡邓关键词:高同型半胱氨酸血症 内质网应激 高同型半胱氨酸血症经内质网途径影响ApoE-/-鼠肝细胞凋亡 被引量:4 2014年 目的观察高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠肝细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法 36只ApoE-/-小鼠随机分为3组,每组12只:①ApoE-/-对照组(ApoE-/-group):普通饮食饲养;②蛋氨酸饮食组(methionine diet group):普通饮食+1.7%蛋氨酸饲养;③干预组(treatment group):普通饮食+1.7%蛋氨酸+0.006%叶酸及0.0004%VitB12饲养。另取12只正常C57 BL/6J小鼠给予普通饮食,作为正常对照组(normal control group)。饲养20周后,ELISA测定血清同型半胱氨酸(Hcy)浓度和肝组织Caspase-12含量;全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;DAPI染色法观察肝组织细胞核形态;电镜观察肝脏组织细胞超微结构。结果与正常对照组和ApoE-/-对照组相比,蛋氨酸饮食组Hcy浓度分别增高2.4倍(P<0.01)和2.5倍(P<0.01);ALT活性分别增高2.0倍(P<0.05)和1.2倍(P<0.05);各组AST活性无明显差异;肝组织切片DAPI染色及电镜结果显示,蛋氨酸饮食组小鼠肝细胞出现凋亡的形态学改变,蛋氨酸饮食组小鼠肝细胞线粒体肿胀、浓缩,内质网大量增生,可见细胞凋亡前体及凋亡小体;Caspase-12活性检测显示蛋氨酸饮食组较正常对照组增高(P<0.05)。与蛋氨酸饮食组比较,干预组小鼠血清Hcy浓度降低,Caspase-12活性下降,肝细胞病理变化减轻,血清ALT活性明显降低。结论 HHcy可能通过影响ApoE-/-鼠内质网功能改变,引起肝细胞凋亡。 王磊 田珏 曹成建 杨程 蔡欣 周龙霞 杨晓玲 姜怡邓关键词:高同型半胱氨酸血症 内质网 肝细胞 高同型半胱氨酸血症对ApoE^(-/-)鼠心脏内质网应激的影响 被引量:4 2015年 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对Apo E-/-鼠心脏内质网应激(ERS)的影响及其可能机制。方法取5周龄雄鼠12只作为正常对照组;另取5周龄雄性Apo E-/-小鼠36只,随机分为3组,Apo E-/-对照组:Apo E-/-小鼠饲以普通饲料配方饮食;高蛋氨酸组:Apo E-/-小鼠饲以高蛋氨酸饮食;干预组:Apo E-/-小鼠饲以高蛋氨酸饮食同时加0.006%叶酸和0.000 4%维生素B12。喂养20周后处死,行主动脉病理切片HE染色观察主动脉是否有斑块形成;取心脏,采用实时荧光定量PCR法检测GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR检测GRP78和CHOP启动子区DNA甲基化水平。结果正常对照组及Apo E-/-对照组斑块不明显,高蛋氨酸组动脉粥样硬化斑块面积明显增大,主动脉内膜可见灶性病变部位隆起突入动脉腔内,干预组动脉粥样硬化斑块面积较高蛋氨酸组有所减轻。与Apo E-/-对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA水平明显升高(P<0.05,P<0.01),干预组GRP78、CHOP mRNA水平较高蛋氨酸组降低(P<0.05)。与Apo E-/-对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP启动子区DNA甲基化水平降低(P<0.01),干预组GRP78、CHOP甲基化水平较高蛋氨酸组有所升高(P<0.05)。结论 HHcy可能通过影响DNA甲基化程度引起ERS相关基因表达改变,进而导致心肌细胞凋亡,补充叶酸与维生素B12可有效缓解HHcy所引起的ERS和凋亡。 周龙霞 赵丽 陈久凯 杨安宁 刘现梅 王艳华 姜怡邓 曹军关键词:高同型半胱氨酸血症 内质网应激 葡萄糖调节蛋白78 更正"ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激"[世界华人消化杂志2014;22(34):5228-5234] 2019年 1更正《世界华人消化杂志》2014年12月第22卷第34期第5228-5234页《ERO1α介导同型半胱氨酸诱导的肝细胞内质网应激》一文做出如下更正:第5231页图3中的B图应为图1. 周龙霞 杨安宁 陈久凯 赵丽 王艳华 刘现梅 蔡欣 张鸣号 姜怡邓 曹军关键词:同型半胱氨酸 内质网应激 肝细胞 华人 介导 ERO1α及其 DNA 甲基化在同型半胱氨酸抑制肝细胞增殖中的作用 被引量:4 2014年 目的探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1-α,ERO1α)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)抑制肝细胞增殖中的作用。方法以0μmol·L-1Hcy为正常对照组(NC group),以100μmol·L-1Hcy为干预组(Hcy group),干预肝细胞48h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测肝细胞增殖活力的变化;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot分别检测ERO1αmRNA和蛋白表达水平;构建ERO1α真核表达质粒,转染肝细胞后,荧光显微镜下观察转染效率并以qRTPCR及Western blot验证ERO1α是否过表达,后用MTT法检测肝细胞增殖活力的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt MS-PCR)检测ERO1αDNA甲基化水平。结果与正常对照组相比,Hcy干预组肝细胞内ERO1αmRNA及蛋白表达水平降低,且细胞增殖活力减弱(P<0.01)。测序结果证明ERO1α重组质粒构建成功,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白大量表达,qRT-PCR及Western blot验证结果显示ERO1α过表达(P<0.01),而MTT法结果表明ERO1α过表达可缓解Hcy导致的肝细胞增殖抑制(P<0.01)。Hcy刺激后ERO1αDNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Hcy通过下调ERO1α表达抑制肝细胞增殖,而ERO1α启动子区DNA甲基化是其重要的调控机制。 赵丽 曹成建 刘现梅 孔繁琪 马文斌 周龙霞 陈久凯 张鸣号 焦运 杨晓玲 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 肝细胞 增殖 DNA甲基化 THP-1单核细胞向泡沫细胞分化过程中FABP4表达量的变化 2015年 目的观察并检测脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)在THP-1单核细胞经巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达改变及其DNA启动子区甲基化变化,探讨FABP4在单核源性泡沫细胞形成中的作用。方法体外培养THP-1单核细胞,分别经佛波酯(PMA)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测三种细胞中FABP4的mRNA和蛋白表达;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)法检测FABP4 DNA甲基化水平。结果 THP-1单核细胞经巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,与单核细胞相比FABP4 mRNA表达量分别增加了3.87倍和2.08倍(P<0.01);蛋白表达量分别增加了1.21倍和0.69倍(P<0.01);各组之间FABP4甲基化水平无明显差异(P>0.05)。结论FABP4可能参与了THP-1单核细胞向巨噬细胞和泡沫细胞的分化过程,其机制可能与FABP4 DNA甲基化无关。 周龙霞 陈久凯 杨安宁 张鸣号 王艳华 马文斌 赵丽 刘现梅 姜怡邓 曹军关键词:单核细胞 巨噬细胞 泡沫细胞 DNA甲基化