刘健胜 作品数:18 被引量:53 H指数:5 供职机构: 连云港市第一人民医院 更多>> 发文基金: 连云港市科技发展计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
敲低Orai1基因表达对小鼠足细胞相关蛋白的影响 王玫瑰 闫京京 魏冬月 于艳辉 刘健胜 卢思广关键词:足细胞 NEPHRIN PODOCIN TRPC6 Α-ACTININ-4 人 Orail基因真核表达载体的构建及在足细胞中的表达 2014年 目的构建重组人 Orail基因真核表达载体,观察其在小鼠肾小球足细胞株(MPC5)中的表达。方法根据GenBank数据库检索到的人 Orail基因序列,人工合成法合成Orail基因编码区(coding sequence,CDS)全长序列,克隆至质粒表达载体PG-CMV-IRES-EGFP,构建重组质粒载体PC-CMV-Orail,通过PCR、双酶切及基因测序等方法进行鉴定;以脂质体转染法将重组质粒转染至MPC5细胞,应用荧光显微镜观察绿色荧光检测转染效率,RT-PCR、Western blot法分别检测Orail基因的转录与翻译。结果PCR扩增的片段长度为906bp,双酶切出现两条带,其中约906bp处可见目的条带。核酸测序结果与GenBank中所报道的人 Orail基因的CDS序列完全一致。转染后48h置荧光显微镜下观察,85%以上的足细胞中可见绿色荧光。RT-PCR及Western blot实验结果分别显示转染后的MPC5细胞在mRNA与蛋白水平表达Orail均有所增强。结论成功构建了重组人 Orail基因真核表达载体PG-CMV-Orail,并建立了过表达Orail基因的肾小球足细胞模型,为深入研究钙库操纵的Ca2’通道与足细胞病之间的关系奠定了良好的实验基础。 魏冬月 芦恩产 刘健胜 苗莉关键词:足细胞 基因 真核表达 三甲基化组蛋白H3赖氨酸4对调节性T淋巴细胞foxp3基因表达的影响 被引量:1 2012年 目的探讨天然调节性T淋巴细胞(nTreg)的三甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4me3)对foxp3基因的影响,寻找维持调节性T淋巴细胞(Treg)表型长期稳定的方法。方法使用免疫磁珠细胞(MACS)分选法从健康人外周血中分离出CD4+CD25+Treg。对CD4+CD25+Treg分别进行0 d、3 d、7 d培养,其中0 d为阴性对照组,3 d为阳性组1,7 d为阳性组2,采用流式细胞仪(FCM)对0 d、3 d、7 d nTreg膜表面标志CD25的变化进行检测,并分别对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞通过染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测foxp3基因启动子区H3K4me3及DNA水平变化。结果 1.使用细胞计数Kit-8(CCK-8)法确定植物血凝素(PHA)质量浓度在10 mg.L-1时为最佳的药物质量浓度,对Treg细胞的增殖作用最为显著。nTreg细胞培养0 d、3 d、7 d的表型变化呈递减趋势。随着培养时间(0 d、3 d、7 d)的延长,与foxp3基因启动子区结合的H3K4me3表达逐渐减少。2.采用ChIP-PCR法对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞检测与H3K4me3结合的foxp3基因启动子区DNA水平变化。DNA凝胶电泳图显示,0 d、3 d在204 bp处可见条带(灰度值分别为2.31、0.91),7 d有模糊条带或无条带。三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHA不能维持Treg细胞的表型稳定,其机制与H3K4me3减少有关。 何敏 李兴花 刘华 陈宁宁 于艳辉 卢思广 刘健胜关键词:调节性T淋巴细胞 生长激素激发试验诊断矮小儿童的临床价值 被引量:7 2010年 目的 探讨生长激素(GH)激发试验在矮小儿童诊断中的临床价值.方法 将72例疑诊生长激素缺乏症(GHD)患儿随机分为两组,两组均行左旋多巴试验,其中观察A组加行精氨酸试验,观察B组加行胰岛素诱发低血糖试验.结果 两组激发试验后垂体有应答43例,观察A组GH峰值出现在左旋多巴试验后30~90 min者占85.71%,精氨酸试验后占95.23%;观察B组GH峰值出现在左旋多巴试验后30~90 min者占81.81%,胰岛素诱发低血糖试验后30~60 min者占95.45%.两组比较无统计学差异(P<0.05).观察A组GH激发试验阳性34.10%,观察B组58.00%,两组比较有统计学差异(P<0.05).结论 三种激发试验后GH峰值出现时间以胰岛素诱发低血糖试验出现较早,且左旋多巴+胰岛素诱发低血糖试验的阳性率高,其诊断GHD较敏感. 白华 刘健胜 江芸关键词:矮小症 生长激素 罗格列酮对大鼠系膜增生性肾炎的治疗作用 被引量:3 2009年 目的研究罗格列酮对大鼠系膜增生性肾炎(MsPGN)的治疗作用并探讨其可能的作用机制,寻找治疗系膜增生性肾炎的新途径。方法大鼠随机分为3组:空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、罗格列酮治疗组(C组)。B、C组以四氯化碳及牛血清白蛋白灌胃制备系膜增生性肾炎模型,制模成功后,A、B组予生理盐水,治疗组予罗格列酮分别灌胃均8周,每周测各组大鼠24 h尿蛋白排泄量及尿红细胞计数。实验结束时,测血清白蛋白、血糖、肝肾功能、肾脏系膜细胞及系膜基质增生情况(光镜、PAS染色)及各组大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄量、尿红细胞计数、TGF-β1及α-SMA表达水平、肾小球PAS染色灰度值较模型组均明显减少,血清白蛋白明显升高,差异均有统计学意义。3组之间血糖及肝肾功能比较差异无统计学意义。结论罗格列酮对大鼠系膜增生性肾炎具有治疗作用,其作用机制之一可能是通过抑制TGF-β1及其下游因子表达。 刘健胜 沈琪 卢思广关键词:系膜增生性肾炎 罗格列酮 尿红细胞 Α-平滑肌肌动蛋白 常见吸入、食物性过敏原与儿童过敏性紫癜体液免疫的相关研究 被引量:4 2012年 目的:评价常见吸入性、食物性过敏原对过敏性紫癜(HSP)患儿免疫球蛋白种类、水平及肾脏损害的影响。方法:选取2010-01~2011-12在我科住院治疗的116例HSP患儿,ELISA法检测血清7种常见吸入性过敏原特异性IgE和7种常见食物性过敏原特异性IgG,免疫比浊法检测血清IgA、IgG、IgM、IgE、C3、C4水平,观察患儿肾脏损害情况。结果:吸入性过敏原阳性率为36.20%,食物性过敏原阳性率为73.27%;吸入性过敏原阳性组血清IgA、IgE水平较吸入性过敏原阴性组高(P<0.05);食物性过敏原阳性组血清IgG、IgM水平较食物性过敏原阴性组高(P<0.05);食物性过敏原阳性组肾脏损害发生率较阴性组低(P<0.05)。结论:吸入性过敏原IgE介导的I型超敏反应参与HSP的发病,其诱发更加明显的HSP患儿血清IgA增加;食物性过敏原介导的III型超敏反应参与HSP发病,食物性过敏原阳性HSP患儿肾脏损害发生率较阴性组低。 陈宁宁 闫京京 王玫瑰 于艳辉 刘健胜 白华 江芸 卢思广关键词:过敏性紫癜 肾脏损害 吸入性过敏原 免疫球蛋白 肾小管间质纤维化发病机制的研究进展 被引量:9 2011年 肾小管间质纤维化(TIF)是各种原因引起的慢性肾脏疾病进行性进展的共同途径,也是这些患者预后的决定性因素。其主要病理特征是炎性细胞浸润、肾间质成纤维细胞大量增殖、细胞外基质在肾间质的过度沉积及肾单位的进行性丢失,TIF的本质是慢性进行性炎症过程。研究表明,肾小管上皮/内皮间充质细胞的转分化、物理因素以及多种化学因子的共同作用,在诱导、促进TIF过程中发挥重要作用。现就近年来关于TIF的发生、发展及主要的影响因素方面的进展作一概述。 卢思广 刘健胜 于艳辉关键词:肾小管间质纤维化 细胞外基质 细胞外基质 成纤维细胞 白细胞介素-6、红细胞沉降率和D-二聚体检测在肺炎支原体肺炎患儿中的临床意义 被引量:12 2019年 目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)、红细胞沉降率(ESR)和D-二聚体检测在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿中的临床意义。方法 选取2017年6月至2018年6月在连云港市第一人民医院接受治疗的89例MPP患儿作为观察组,同期在该院体检的健康儿童50例为对照组。根据入院时临床肺部感染评分(CPIS)将观察组分为轻症组( n =62,CPIS评分≤6分)和重症组( n =27,CPIS评分>6分)。根据预后情况不同分为预后良好组( n =78)和预后不良组( n =11)。比较轻症组、重症组和对照组IL-6、ESR和D-二聚体水平及CPIS评分,分析IL-6、ESR和D-二聚体与CPIS评分的相关性;比较预后良好组及预后不良组的IL-6、ESR和D-二聚体水平;采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析IL-6、ESR和D-二聚体预测患儿预后的价值。结果 与对照组相比,观察组IL-6、ESR、D-二聚体水平及CPIS评分上升( P <0.05)。重症组IL-6、ESR、D-二聚体水平及CPIS评分均高于轻症组( P <0.05)。Pearson分析表明, IL-6、ESR、D-二聚体水平与CPIS评分均呈正相关( r 分别为 0.714 、0.732、0.623, P <0.05)。预后良好组IL-6、ESR、D-二聚体水平均低于预后不良组,差异有统计学意义( P < 0.05 )。IL-6评估预后的曲线下面积(AUC)和95% CI 分别为0.684和1.014~3.973,ESR和D-二聚体评估预后的AUC分别是0.757和0.713。以IL-6、ESR及D-二聚体的截断点分别为22.3 ng/L、36.7 mm/h及 1 457.8 ng/mL时,IL-6+ESR+D-二聚体检测在 MPP患儿中具有较好的预后评估价值。结论 MPP患儿血清IL-6、ESR和D-二聚体水平显著上升,与患儿病情严重程度和预后有关,对病情判断和预后评估具有一定参考价值。 张慧 徐莲 刘健胜 苗莉 张春燕 张瑞环 于艳辉关键词:白细胞介素-6 红细胞沉降率 D-二聚体 肺炎支原体肺炎 STIM1及ORAI1基因过表达载体的建立及其对足细胞相关蛋白的影响 目的建立足细胞过表达STIM1、ORAI1细胞模型,检测STIM1/ORAI1过表达对足细胞相关蛋白如Podocin、α-actinin-4等mRNA或蛋白表达水平的影响,为深入研究钙库操纵的Ca~(2+)通道与足细胞病... 苗莉 刘健胜 王玫瑰 闫京京 卢思广敲低STIM1基因表达对小鼠足细胞裂孔膜分子的影响 目的:观察敲低小鼠肾小球足细胞STIM1基因表达对Nephrin、Podocin、CD2AP及α-actinin-4等基因表达的影响,探讨STIM1和足细胞损伤间可能存在的关系.方法:采用RPMI1640培养基,在33℃... 闫京京 王玫瑰 魏冬月 于艳辉 刘健胜 卢思广关键词:足细胞 小分子干扰RNA